S100A13在乳腺癌组织中的表达及临床意义

刘应红　田寅　胡少军

【摘要】 目的：探讨S100A13在乳腺良恶性组织中的表达以及临床意义。方法：选取2015年9月-2017年9月来自佳木斯大学附属第一医院收治的乳腺疾病患者108例作为研究对象，其中68例乳腺癌患者为乳腺癌组，40例乳腺纤维腺瘤患者为乳腺纤维腺瘤组。通过免疫组化染色SP法检测S100A13在两组中的表达结果。结果：在乳腺癌组中有39例S100A13表达阳性，阳性率为57.35%，在乳腺纤维瘤组中有15例S100A13表达阳性，阳性率为37.50%，S100A13在两组中的表达情况比较，差异有统计学意义（字2=3.971，P<0.05）。S100A13的阳性表达率在乳腺癌患者的年龄和肿块大小上比较，差异均无统计学意义（P>0.05）。而S100A13的阳性表达率随乳腺癌的临床分期升高而升高，Ⅲ+Ⅳ期乳腺癌患者的S100A13阳性表达率为78.57%，明显高于Ⅰ+Ⅱ期的52.50%，差异有统计学意义（P<0.05）；乳腺癌淋巴结转移患者的S100A13阳性表达率为63.04%，明显高于无淋巴结转移的36.36%，差异有统计学意义（P<0.05）。结论：关于S100A13的表达与乳腺癌的发生发展关系研究较少，本研究表明S100A13可能成为判断乳腺肿物良恶性的又一有价值的辅助检查指标，并有可能为乳腺癌的预后提供有意义的参考，同时成为新的治疗靶点。

【关键词】 乳腺癌； S100A13； 免疫組化

【Abstract】 Objective：To investigate the expression of S100A13 in benign and malignant breast tissues and its clinical significance.Method：A total of 118 patients with breast disease in the First Affiliated Hospital of Jiamusi University from September 2015 to September 2017 were selected as the study objects.68 cases breast cancer patients were set up as breast cancer group and 40 cases breast fibroadenoma patients were set up as breast fibroadenoma group.The expression of S100A13 in two groups was detected by immunohistochemical SP method.Result：In breast cancer group，39 cases were positive for S100A13，the positive rate was 57.35%；and in breast fibroadenoma group，15 cases were positive，the positive rate was 37.50%，the expression of S100A13 between the two groups was compared，the difference was statistically significant（字2=3.971，P<0.05）.The positive expression rates of S100A13 were not significantly different in age and tumor size of breast cancer patients（P>0.05）.The positive expression rate of S100A13 increased with the clinical stage of breast cancer，the positive expression rate of S100A13 in stage Ⅲ and Ⅳ breast cancer was 78.57%，which was significantly higher than 52.50% of stage Ⅰ and Ⅱ，the difference was statistically significant （P<0.05）.The positive rate of S100A13 in patients with lymph node metastasis from breast cancer was 63.04%，which was significantly higher than 36.36% without lymph node metastasis，the difference was statistically significant （P<0.05）.Conclusion：There is little research on the relationship between the expression of S100A13 and the occurrence and development of breast cancer.This study shows that S100A13 may be another valuable auxiliary test to judge benign and malignant breast tumor and may provide a meaningful reference of prognosis for breast cancer，while becoming a new therapeutic target.

【Key words】 Breast cancer； S100A13； Immunohistochemistry

First-authors address：The First Affiliated Hospital of Jiamusi University，Jiamusi 154003，China

doi：10.3969/j.issn.1674-4985.2018.22.028

中国肿瘤登记中心根据我国在2016年收集上报的关于恶性肿瘤全国各登记处的资料来估计我国2013年恶性肿瘤的发病与死亡情况的最新数据显示，女性恶性肿瘤的发病首位仍然是乳腺癌，而且每年新发的病例大约27.9万[1]。作为临床上女性最常见恶性肿瘤的乳腺癌不仅给女性患者的身心健康和生活质量带来严重的威胁，而且还给患者和家庭带来了巨大精神和经济负担。因此对乳腺癌展开研究，让乳腺癌患者能够及时诊断并通过综合有效的治疗来提高生存率和降低死亡率具有重要的意义。有多项研究表明钙结合蛋白S100（S100 calcium binding protein）家族与恶性肿瘤的发生发展、浸润转移及判断肿瘤预后等有密切的联系[2-3]。S100A13是由21个成员组成的钙结合蛋白家族S100中较新的一个，S100A13与家族成员之间既有相同之处也有其独特之处，相同之处在于其结构上大致相似，功能上主要是通过对钙离子的代谢调节和与靶蛋白结合来发挥多种生物学的作用。但同时又有研究表明S100A13在组织分布、细胞定位及生理作用等方面又有不同于其他S100蛋白家族的地方，这表明S100A13可能具有独特的生物学功能，有其研究的意义。Pierce等[4]在一个体外细胞的试验中发现，高侵袭性的肺癌细胞中S100A13含量较高，而利用RNA干预消耗S100A13mRNA后肺癌细胞的侵袭性明显下降，因此认为S100A13可能与肺癌细胞的侵袭转移有关。刘畅等[5]在甲状腺组织中采用免疫组织化学法检测S100A13的表达，其表达阳性率在甲状腺癌为91.1%、甲状腺腺瘤为66.7%、甲状腺正常组织为64.3%，S100A13在甲状腺癌组织中的强阳性率，提示其对甲状腺癌的发生发展和淋巴转移起重要作用。张鹏等[6]在肝癌组织、癌旁组织、正常肝组织中采用原位RT-PCR技术和免疫组织化学法检测中S100A13 mRNA的表达及S100A13蛋白的表达的研究表明S100A13在肝癌组织、癌旁及正常组织中都有一定程度的表达，但肝癌组织中的表达率及表达量均明显高于癌旁及正常组织且S100A13表达与肝癌患者的性别、年龄及其病理分级无统计相关性。甲状腺癌与乳腺癌的流行病学资料显示患病对象主要为女性，且两者均受调于下丘脑-垂体-腺体軸，在碘的吸收、TH、性激素方面，甲状腺癌和乳腺癌存在着或多或少的共通点[7]。有研究表明部分乳腺癌患者并发甲状腺形态、功能甚至病理上的改变。有关S100A13报道多与甲状腺癌有关，而在乳腺癌研究中，对于S100A13的表达情况研究及报道较少。因此，本研究旨在通过免疫组化方法检测S100A13在乳腺良恶性疾病中的表达情况，并初步探讨S100A13对乳腺癌的发生发展及淋巴转移的影响为临床上乳腺癌患者的临床治疗及预后评估提供一定的实验依据及新思路，现报道如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料 选取2015年9月-2017年9月来自佳木斯大学附属第一医院收治的乳腺疾病患者108例作为研究对象，其中68例乳腺癌患者为乳腺癌组，40例乳腺纤维腺瘤患者为乳腺纤维腺瘤组。纳入标准：均为女性；手术前未经过乳腺良恶性疾病的任何相关治疗并未合并身体其他部位良恶性肿瘤；均已经外科手术切除后送至本院病理科确诊。排除标准：既往已行乳腺纤维腺瘤切除术；乳腺癌术前已行放、化疗；合并其他乳腺良恶性病变。在68例乳腺癌患者中，按WHO分期标准根据临床TNM分期：Ⅰ期14例，Ⅱ期26例，Ⅲ期22例，Ⅳ期6例；组织学分级：组织学分级Ⅰ级（高分化）16例，Ⅱ级（中分化）30例，Ⅲ级（低分化）22例。患者年龄24～65岁，中位数45岁。所有患者均知晓本次研究并签署知情同意书。该研究已经医院伦理学委员会批准。

1.2 方法 所有收集的病理标本均经4%多聚甲醛磷酸液固定然后脱水，透明后使用石蜡包埋，并制作成6.0 ?m厚的连续切片，然后行S100A13蛋白免疫组化检测。实验材料准备：福州迈新公司购买SP试剂盒，武汉三鹰生物技术有限公司购买兔抗人S100A13抗体，其余所需试剂及材料均由佳木斯附属第一医院病理科提供，严格参照试剂说明书进行操作。

1.3 观察指标与判断标准 S100A13表达用细胞阳性百分率及细胞染色的强度两项得分合计来进行判定，总分<3分为阴性，>3分为阳性。随机选择5个高倍镜视野（×400）进行判断：细胞阳性率0～5%计0分，6%～25%计1分，26%～50%计2分，51%～100%计3分。细胞染色强度与背景色相比，无色为0分，浅黄色1分，棕黄色2分，棕褐色3分。

1.4 统计学处理 采用SPSS 13.0软件对所得数据进行统计分析，计量资料用（x±s）表示，比较采用t检验；计数资料以率（%）表示，比较采用字2检验，P<0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 S100A13在两组中的表达情况比较 在乳腺癌组中有39例S100A13表达阳性，阳性率为57.35%，在乳腺纤维瘤组中有15例S100A13表达阳性，阳性率为37.50%，S100A13在两组中的表达情况比较，差异有统计学意义（字2=3.971，P<0.05），见表1。

2.2 S100A13的表达与乳腺癌组织临床病理参数的关系 在68例乳腺癌患者中，S100A13的阳性表达与乳腺癌患者的年龄和肿块大小无关，与乳腺癌的临床分期与有无淋巴结转移有关，即S100A13的阳性表达率在乳腺癌患者≤45岁中为53.85%与>45岁中的59.52%比较，差异无统计学意义（P>0.05）；S100A13的阳性表达率在乳腺癌肿块大小≤2 cm为57.14%，2～5 cm为58.54%，>5 cm为53.85%，差异无统计学意义（P>0.05）。而S100A13的阳性表达率随乳腺癌的临床分期升高而升高，Ⅲ+Ⅳ期的乳腺癌患者S100A13阳性表达率为78.57%，明显高于Ⅰ+Ⅱ期的52.50%，差异有统计学意义（P<0.05）；乳腺癌淋巴结转移患者S100A13的阳性表达率为63.04%，明显高于无淋巴结转移的36.36%，差异有统计学意义（P<0.05）。见表2。

3 讨论

目前多个实验研究提示可以把S100A13作为肿瘤的预后标志以及治疗的靶点之一，人类S100A13基因定位于稳定性差的1号染色体长臂2区1带（1q21），其表达产物S100A13蛋白为酸性蛋白，其分子量为11 kD，作为一个二聚体存在的S100A13，每个单体中包含了四个α螺旋，并与两个Ca2+结合，两个EF手型结构组成其立体结构，一个EF手型由结合钙离子的螺旋-环-螺旋配基组成，两端为疏水区，中央为铰链区，这与传统的S100是一致的，而与传统的S100不同之处在于，另一个EF手型的结构域中含有一个独特的赖氨酸残基而且羧基端含有八个碱性氨基酸，这个独特结构可能影响其与Ca2+与其他蛋白结合而发挥重要的生物学效应[8-10]。目前对S100A13的临床研究较少，其功能的研究也主要集中在S100A13介导Cu2+依赖性的成纤维细胞生长因子1（fibroblast growth factor-1，FGF-1）和白介素-1α（interleukin-1 alpha，IL-1α）跨膜释放上。S100A13凭借其独特的结构，作为一种信号肽与FGF-1和IL-1α相结合，实现FGF-1由胞内向胞外的转运，从而实现细胞内外的信号传递，这种跨膜转运方式与传统的信号肽参与的蛋白跨膜转运不同，因此被称为FGF-1的非经典分泌途径[11-12]。多研究表明S100A13是通过介导FGF-1的非经典分泌途径来增强FGF-1的表达和功能发挥作用的。有研究表明FGF-1通过让细胞加速有丝分裂，让内皮细胞分泌胶原酶和蛋白水解酶来使胶原水解和沉积形成管腔样的结构，让血管内皮细胞和平滑肌细胞发生增生迁移来形成新生血管，以此来促进癌的转移[13]。此外，还有研究表明S100A13能引起细胞的过度增值，主要是通过启动其他蛋白质的表达和转录来发挥作用，S100A13和FGF-1能与多种酸性磷脂结合，结合后不仅提高了蛋白复合体穿过细胞膜的速度，而且蛋白复合体经磷酸化修饰后再结合于DNA的特定增强子上，从而引起细胞过度增殖[14]。Brewer等[15]利用了Cu2+的螯合剂四硫钼酸盐（Tetrathiomolybdate，TM）治疗第Ⅳ期的乳腺癌，研究发现使用TM后不仅乳腺癌肿内的FGF-1和IL-1α的表达明显下降而且乳腺癌肿的生长速度以及其淋巴转移都有所减慢。探究TM治疗乳腺癌的作用可能是通过螯合Cu2+后阻止了其所介导的FGF-1和IL-1α的释放所发挥的。已经证实S100A13的在促进的FGF1和IL-1α的释放方面的作用，这在肿瘤的浸润转移中有重要意义，同时也提示S100A13可能是乳腺癌治疗的一个新靶点，FGF-1释放显著降低后，肿瘤新生的血管可能会被阻断，那么癌肿大小将逐渐缩小，为外科手术提供很多可行性。

综上所述，本研究表明S100A13的在良恶性乳腺肿物判断有难度时，可能会提供有价值的实验室检测指标，同时表明S100A13与乳腺癌的发生发展有一定关系，对判断乳腺癌的生物学行为，恶性程度和预后具有一定的作用，可能为预测乳腺癌患者病情发展及指导临床治疗提供新指标及新思路。

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（收稿日期：2018-02-07） （本文编辑：李莹莹）