多元指纹图谱分析复方银杏通脉胶囊的质量评价研究*

盛家峰,李晓霞，张海涛

河南省漯河市第二人民医院药剂科(漯河462000)

主题词 色谱法，高压液相 @多元指纹图谱 @复方银杏通脉胶囊 @质量评价

随着我国人口老龄化的加剧，人体自身身体机能的衰退导致多数老龄化人口的主要威胁性疾病有心血管疾病、脑血管疾病等。结合中医辨证论治，老年人多以肝肾脾虚为本，血瘀为标，中医药在防治心脑血管疾病方面积累了丰富的临床治疗经验，无论治标的活血化瘀还是治本的补肝益肾均在临床和实验研究中有很大进展，其中复方银杏通脉的主要功效是滋补肝肾，健脾通脉，临床上用于治疗活血消栓，理气止痛，用于冠心病、心绞痛、脑动脉硬化、高血脂症、中风及其后遗症[1-3]。临床上复方银杏通脉的制剂类型只有口服液，无法满足部分患者更倾向于服用胶囊的需求，而复方银杏通脉中以银杏叶为君药，活血通脉，促进血液循环，丹参和川芎为臣，助君药活血行气，安抚脑神经；佐药三七助君臣活血通脉，黄芪补益肝肾脾之气，元阳充溢，气行血行，全方共奏补益肝肾，健脾通脉之效。基于此，本课题组研究制备复方银杏通脉胶囊，以满足患者不同服药需求，提高患者按时服用的依从性，现将复方银杏通脉胶囊的制备及质量评价研究详细报道如下。

仪器与试药

1 仪 器 液相色谱仪(型号:LC-4100，厂家：滕州市艾伦分析仪器有限公司);精密电子秤(型号: FA2004C，厂家：苏州奇乐电子科技有限公司);薄层板涂布器(型号：VF2162，厂家：荷兰TQC)。

2 试 剂 由Fisher scientific公司提供的甲醇(批号LOT:111280)和乙腈(批号LOT:096328);中国食品药品检定研究院提供的超纯水、银杏叶提取物对照品(21576-1028279)和丹参酮Ⅱ A对照品(71728-110766)。

3 分析样品 复方银杏通胶囊的研制[4]：处方：银杏叶、丹参各200 g，三七20 g，川芎160 g，黄芪65 g，由我院中药房提供，以上银杏叶和三七分别研磨成粗粉，银杏叶粉精密称取50 g与三七粉混合待用，其余银杏叶粉末加5倍量90%乙醇浸泡3 d获得第一次银杏叶滤过液，银杏叶粉末药渣再加入5倍量60%乙醇浸泡2 d，获得第二次银杏叶滤过液，混合2次银杏叶滤过液回收乙醇获得银杏叶醇提取液，银杏叶粉末药渣再加入5倍量水煮沸1 h，滤过合并银杏叶醇提液，并将其浓缩至稠膏状(相对密度为1.30～1.35，检测温度50℃)；丹参、川芎和黄芪常规浸泡煎煮，熬取两次滤过煎煮液并混合，滤过并将其浓缩至稠膏状(相对密度为1.30～1.35，检测温度50℃)；混合所有稠膏和粉末，减压干燥，粉碎成细粉，加入适量糊精，混匀，制粒，烘干并装胶囊(1号，0.3g/粒)，共制成胶囊1000粒，即得复方银杏通脉胶囊。

方法与结果

1 色谱条件 以乙腈为流动相A，以水为流动相B，按下表1中的规定进行梯度洗脱：检测波长为265nm：柱温为35℃。

2 对照品溶液的制备 精密称取银杏叶提取物对照品，加水制成每1 ml含48μg的对照溶液；精密称取丹参酮ⅡA对照品，加甲醇制成每1 ml含有10 μg的对照品溶液；将两种对照品溶液混合获得混合对照品溶液。

表1 流动相洗脱梯度

3 供试品溶液的制备 精密称取复方银杏通脉胶囊的内容物1.0 g，加入含有20 ml甲醇的锥形瓶中，塞紧瓶口，充分摇匀，称重并记录，在500 W功率和40 KHz频率下超声处理30 min后，冷却称重并记录，重量与第一次记录进行对比并以甲醇补齐致等重，摇匀后采用0.45 μm微孔滤膜滤过，滤过液即为供试品溶液。

4 专属性试验 取同一供试品溶液根据2.3制备的供试品溶液，采用薄层层析的方法对复方银杏通脉胶囊进行专属性试验，结果显示如图1，复方银杏通脉胶囊专属性良好。

5 线性关系考察 精密量取混合对照品的甲醇溶液(0.1072mg/ml)3.0、6.0、12.0、18.0、24.0ml，分别置50ml量瓶中。加甲醇稀释至刻度，摇匀，分别精密吸取10μl，注入液相色谱仪，记录峰面积；以混合对照品进样量(μg)为横坐标(X，峰面积积分值为纵坐标(Y)，绘制标准曲线，回归方程y=2581530.89X-12670.48，r=0.9999(n=5)，结果表明，混合对照品在0.06432～0.1456μg范围内线性关系良好，见表2。

表2 线性关系考察

6 中间精密度试验 精密吸取10μl同一供试品溶液，连续进样5次，结果显示相对标注偏差RSD是0.83%，精密度良好。

7 供试品溶液稳定性试验 精密吸取10 μl同一供试品溶液，配置后分别放置0、2、4、8、16、24、48 h后进样检测，结果显示48 h内供试品溶液基本稳定，RSD是1.05%。

8 重复性试验 精密吸取10 μl同一供试品溶液，在相同色谱条件，相同液相分析仪上检测5次，结果显示标准偏差RSD为0.80%，重复性良好。

9 回收率试验 采用加样回收法，精密称取6份已知含量的同一批号样品各约0.5 g，分别精密加入20 ml混合对照品甲醇溶液(0.00536 mg/ml)，进行回收率试验测定，计算结果显示平均回收率为99.07%，RSD为0.75%， 见表3。

表3 回收率试验测定结果

10 样品测定结果

10.1 多元指纹图分析：精密称取三批样品进行多元指纹图谱分析，结果显示银杏叶提取物RSD为3.81%，丹参酮ⅡA的RSD为4.96%，见图2。

10.2 复方银杏通脉胶囊制剂检查项目测定：根据《中国药典》[5]中对胶囊制剂水分、装量差异和崩解时限进行检查，结果如表4所示，均符合国家相关规定。

表4 复方银杏通脉胶囊制剂检查项目测定结果

10.3 重金属和砷盐的超标检验：重金属超标检测中取2g复方银杏通脉胶囊内容物，在恒重坩埚中慢慢炽热至完全炭化，温度大约升高到500℃～600℃，内容物完全灰化后并至恒重，结果显示三批样品重金属含量均小于10 ppm；砷盐检测中取1 g复方银杏通脉胶囊内容物，加入少量水和1 g氢氧化钙后混匀并干燥，同重金属检测相似先小火炭化再高温灰化，灰化后冷却加少量水和5 ml盐酸并至恒重，结果显示三批样品砷盐含量均小于2 ppm，见表5。

表5 重金属和砷盐的超标检验

讨 论

本论文研究了治疗冠心病轻度脑动脉硬化的中药新制剂——复方银杏通脉胶囊，本课题组通过近几年比较系统的文献梳理工作和反复试验研究工作，完成了复方银杏通脉胶囊制剂工艺的研究、指纹图谱检测方法可行性的研究以及复方银杏通脉胶囊的质量评价研究，取得了预期效果。

1 建立了制剂工艺方法

1．1 以处方君药银杏叶中银杏叶提取物和臣药丹参中的丹参酮ⅡA的含量为考察指标，通过正交试验法优选出银杏叶合并醇提的工艺条件，与丹参、川芎、黄芪合并水提的工艺条件，混合银杏叶粉末和三七粉末。不断重复验证试验，表明此复方银杏通脉胶囊的工艺稳定性和可行性良好[6-7]。

1．2 确定了胶囊剂最佳成型工艺条件为：采用减压干燥，粉碎成细粉，加入适量糊精混匀帮助赋形，用85%乙醇湿法制粒，烘干并装1号胶囊[8]。

2 建立了制剂质量标准与控制方法

2．1 药物质量安全性控制方法：为控制复方银杏通脉胶囊的生产质量的安全性，采用薄层色谱法结合处方药味所含化学成分及药理学活性，对方中的君药和臣药均进行了有效复方银杏通脉胶囊质量标准的研究。薄层色谱法对银杏叶中的银杏叶提取物、丹参中的丹参酮IIA等进行了定性鉴别，显示3批不同的测试样本的色谱斑点清晰，重现性好，空白均无出现干扰[9-10]；同时研究人员按照《中国药典》标准规定，对复方银杏通脉胶囊制剂的水分、装量差异、崩解时限进行了检查，其结果完全符合《中国药典》的相关规定；进一步测定了重金属、砷盐的含量结果均远小于规定限度；综上本研究显示，复方银杏通脉胶囊质量安全性较高。

2．2 采用多元指纹图谱分析进行定量控制方法：应用多元指纹图谱分析测定了复方银杏通脉胶囊制剂中银杏叶提取物、丹参酮IIA的含量，基于前期研究条件如色谱洗脱梯度、线性考察和样品回收率等方法的反复试验确认，显示多元指纹图谱是一种方法简便，且具有高灵敏度、高重复性和较强的专属性强的一种研究方法[11]。回归方程y=2581530.89X-12670.48，r=0.9999(n=5)，结果表明，混合对照品在0.06432-0.1456ug范围内线性关系良好；平均回收率为99.07%，RSD为0.75%。

3 结 论 本研究采用多元指纹图谱分析从定性到定量多指标、全方位质量控制方法研究复方银杏通脉胶囊。制剂由五味药组成，制订了薄层色谱鉴别研究其专属性进行定性质量评价[12]；合理的制订定量质量评价研究方法，多元指纹图谱分析，结果显示复方银杏通脉胶囊中银杏叶提取物RSD为3.81%，丹参酮ⅡA的RSD4.96%。本研究所建立的方法准确性，简易性和可操作性均较强，不仅有利于临床应用，同时对相关品种的质量控制起到借鉴作用。