HPLC法测定气血和胶囊中芍药苷的含量

1.甘肃医学院，甘肃 平凉 744000；2.平凉市妇幼保健院，甘肃 平凉 744000；3.宁夏美德医疗器械有限公司，宁夏 银川 750000

气血和胶囊是由当归、赤芍、川芎、桃仁、红花、桔梗、牛膝、枳壳等15味药物组成，具有舒肝理气、活血止痛的功效，用于妇女月经过少、经期后错、行气不畅、经色暗红有血块、小腹或少腹疼痛、乳房胀痛、或伴有面部色素沉着[1]。本方原为散剂，为了便于服用和生产，因此将其改为胶囊剂，同时建立了采用高效液相色谱法测定芍药苷含量的方法，为后期新药开发及质量标准的制订提供依据。

1 仪器与材料

1.1 仪器 Agilent1100型高效液相仪(美国Agilent公司)；ISO9001型电子分析天平(北京赛多利斯仪器系统有限公司)；TDL-40B台式离心机(上海安亭科学仪器公司)，AS系列超声仪(天津奥特赛恩斯仪器有限公司)。

1.2 材料 芍药苷对照品(批号：110736-200630，中国药品生物制品检定所)；甲醇(色谱纯，美国Fisher公司)；乙腈(色谱纯，美国Fisher公司)；水为超纯手(娃哈哈纯净水)；气血和胶囊样品及阴性供试品(均系实验室自制)，其它试剂均为分析纯。

2 方法与结果

2.1 色谱条件 Knauer C18色谱柱(250 mm×4.6 mm，5 μm)；流动相：乙腈-水(20∶80)；检测波长230 nm；柱温：30℃，流速1.0 mL/min，进样量20 μL，理论塔板数按芍药苷峰计算应不低于2000。

2.2 样品的制备

2.2.1 对照品溶液的制备 精密称定经五氧化二磷干燥至恒重的芍药苷对照品4.2850 mg置25 mL容量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，作为储备液；精密吸取储备液1 mL置10 mL量瓶中，加甲醇稀释至刻度，配制成对照品(17.14 μg/mL)溶液。

2.2.2 供试品溶液的制备 取本品内容物0.6 g精密称量，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇25 mL密塞，称定重量，超声处理30 min，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，离心，取上清液，精密吸取滤液5 mL，水浴蒸干，残渣用5 mL流动相溶解，转移至10 mL量瓶中，加流动相稀释至刻度，用0.45 μm微孔滤膜滤过，取续滤液作为供试品溶液[2]。

2.2.3 阴性供试品溶液的制备 按处方中药味比例配制不含赤芍的阴性供试品，按“2.2.2”项下供试品溶液制备方法操作，即可。

2.3 方法学考察

2.3.1 专属性试验 精密吸取上述照品溶液、供试品溶液和阴性供试品溶液各20 μL注入高效液相色谱仪，记录色谱图。在该系统条件下，供试品溶液与对照品溶液在相应的位置上有相同的色谱峰，主峰与其它组分的分离良好，阴性供试品在相应位置无干扰峰出现。如图1所示。

2.3.2 线性关系考察 分别精密吸取“2.2.1”项下对照品溶液1、5、10、15、20 μL，按“2.1”项下色谱条件测定，记录峰面积，以进样量(X，μg)、峰面积积分值(Y)为纵坐标进行线性回归，得回归方程Y=1546.59X-135.2377，r=0.9999(n=6)。结果表明，芍药苷进样量在0.01701～0.3428 μg范围内与峰面积积分线值保持良好线性关系。

2.3.3 精密度试验 精密吸取对照品溶液20 μL，按上述色谱条件注入液相色谱仪，连续进样5次，结果测得峰面积RSD=0.97%。

2.3.4 稳定性试验 精密吸取同一批供试品溶液各20 μL，分别于0、2、4、6、8 h按上述色谱条件进行测定，RSD=0.87%，结果表明供试品溶液在制备后8 h内基本稳定。

2.3.5 重复性试验 精密称取供试品(批号：150101)共5份，按“2.2.2”项下的方法制备供试品溶液，按上述色谱条件注入液相色谱仪，测定，计算，样品中芍药苷的平均含量为0.74 mg/g，RSD=1.61%，结果表明本法的重现性良好。

2.3.6 样回收率试验 精密称取同一批已知含量的供试品(批号：150101)6份，每份约0.6 g，分别精密加入1、2、4 mL的芍药苷对照品(17.14 μg/mL)储备液各2份，按供试品制备与测定方法操作，结果见表1。

表1 芍药苷加样回收率实验结果 (n=6)

2.3.7 样品测定结果 取5批气血和胶囊，依法制备和测定，记录芍药苷峰面积，按外标法计算含量，结果见表2。结果表明5批气血和胶囊中芍药苷的含量均大于0.20(mg/粒)。

表2 5批气血和胶囊的含量测定结果

3 讨论

赤芍为气血和胶囊处方中主要药物之一，而芍药苷是其主要有效成分，因此选择芍药苷作为控制气血和胶囊的质量的指标成分，用高效液相法测定芍药苷含量。实验发现关键在于根据具体情况有效的排除其它成分的干扰，因此本实验采用先超声，过滤，蒸干，然后用流动相溶解方法处理样品，收得满意效果[3]。同时，实验经过方法学分析的过程中，参考了中国药典中芍药苷的测定方法[4]，反复试验，最终得芍药苷的测定方法为：乙腈-水(20∶80)作流动相，在流速为1.0 mL/min，柱温35℃时进行测定，峰形分离度好，且阴性供试品在此处无干扰，这与中国药典的测定方法不同，需要进一步的验证和分析。本实验方法简便，准确，重现性、回收率均较好，可以用于对气血和胶囊进行质量控制。同时，当归也是气血和胶囊中的药物之一，在后续的实验中，将进一步测定当归中阿魏酸的含量，更好地完善气血和胶囊的质量控制。