GC—MS法测定猪尿中盐酸克伦特罗的残留量不确定度评定

刘正华 郑飞腾

摘要 建立了气相色谱-质谱（GC-MS）法测定猪尿中盐酸克伦特罗残留量的不确定度评定数学模型，分析了影响样品测定结果不确定度的主要来源，计算出了各影响因素的不确定度分量，当猪尿中盐酸克伦特罗残留量的测定结果为5.58 μg/L时，其扩展不确定度为0.16 μg/L。

关键词 猪尿；盐酸克伦特罗；气相色谱-质谱法；不确定度；评定

中图分类号 TS207.3 文献标识码 A 文章编号 1007-5739（2018）12-0231-02

盐酸克伦特罗（α-[（叔丁氨基）甲基]-4-氨基-3，5-二氯苯甲醇盐酸盐）是一种人工合成强选择性的β-肾上腺受体激动剂，俗称“瘦肉精”[1-2]，具有促进动物生长、提高瘦肉率的效果。研究发现，盐酸克伦特罗易在肌肉、内脏中蓄积，导致了一些因食用“瘦肉精”的动物源食品安全事件[3-4]。包括中国在内的世界上许多国家要求动物源食品中不得检出盐酸克伦特罗[5]。盐酸克伦特罗已成为生猪屠宰前的必检项目之一。因此，对猪尿中的盐酸克伦特罗残留量进行准确测量具有重要意义，其直接关系到人们的身体健康和企业的经济利益。

本研究依据《测量不确定度评定与表示》（JJF 1059.1—2012）建立了一套气相色谱-质谱法测定猪尿中的盐酸克伦特罗不确定度的评定方案[6]，通过分析不确定度的主要影响因素，提高测定结果的准确性和可靠性。

1 材料与方法

1.1 仪器与试剂

Agilent 7890A-5975C气相色谱-质谱（美国安捷伦科技有限公司）、24位固相萃取装置（美国Supelco公司）、T18 basic匀浆机（广州仪科实验室技术有限公司）、AB-204-S电子分析天平（梅特勒-托利多仪器上海有限公司）、Milli-Q Advantages A10超纯水机（法国密理博中国有限公司）。

盐酸克伦特罗标准物质（10 mg，德国Dr.Ehrenstorfer G-mbH公司），D9盐酸克伦特罗标准物质（5 mg，德国Dr.Eh-renstorfer GmbH公司），乙酸乙酯、甲苯、异丙醇、甲醇，均为色谱纯，由德国Merck公司生产；盐酸、乙酸铵，均为优级纯，由广州化学试剂厂生产。

1.2 样品制备

1.2.1 提取与净化。准确量取5.00 mL猪尿样品于50 mL塑料离心管中，乙酸调pH值=5.2±0.1，加入1.00 mL 0.02 mol/L乙酸铵溶液，加入100 μL 500 ng/mL D9盐酸克伦特罗内标工作液和50 μL 3 000U/mL β-葡萄糖醛酸苷酶，60 ℃衍生2 h，用2.0 mol/L NaOH溶液调pH值=9.5±0.2，涡旋30 s，再用20 mL乙酸乙酯异丙醇（V∶V=3∶2）振荡提取15 min后旋蒸浓缩至近干，用3.00 mL 0.02 mol/L乙酸铵溶液溶解待净化。将SCX小柱（500 mg/3 mL）依次用5.00 mL甲醇、5.00 mL水、5.00 mL 30 mmol/L盐酸溶液活化，然后将待净化的样品液全部转移至柱内，再依次用5.00 mL水、5.00 mL甲醇淋洗，最后用6.00 mL 4%氨水甲醇洗脱，50 ℃水浴氮吹干。

1.2.2 衍生上机。在吹干的样品瓶中加入100 μL甲苯和100 μL衍生试剂BSTFA，80 ℃衍生1 h，待冷却后再加入300 μL甲苯涡旋混匀后供GC-MS测定。

2 结果与分析

2.1 不确定度来源分析及数学模型确定

2.1.1 不确定度来源分析。由试验过程可知，影响猪尿中的盐酸克伦特罗残留量检测结果的不确定因素主要來源于由拟合的标准曲线计算样品溶液中盐酸克伦特罗的浓度引入的不确定度、猪尿样品量取体积引入的不确定度[7-8]、样品分取液体积及样品分取液体积引入的不确定度、样品定容时引入的不确定度。

3 结论与讨论

综上所述，采用气相色谱-质谱法测定猪尿中的盐酸克伦特罗残留量，本样品结果为（5.58±0.16）μg/L，k=2（95%的置信区间）。

试验讨论了气相色谱-质谱法测定猪尿中的盐酸克伦特罗残留量的不确定度评定方法，定量表征了测定结果的可信度，评估了标准不确定度及扩展不确定度[7-8]。由计算得到的合成标准不确定度可以看出，标准工作溶液的配制和拟合标准曲线的非线性是这种不确定度的主要来源，可以通过改进标准工作溶液的配制方法来减少测量不确定度。此外，由于在移取、分取、定容时移液器容量允差带来的溶液体积变化所带来的不确定度也不容忽视，在实际检测工作中应选用合适量程的移液器以减少测量不确定度。

4 参考文献

[1] ZHANG X，ZHAO H，XUE Y，et al.Colorimetric sensing of clenbutero using gold nanoparticles in the presence of melamine[J].Biosens Bioelec-tron，2012，34（1）：112-117.

[2] ZHANG G P，WANG X N，YANG J F，et al.Development of an immunoc-hromatographic lateral flow test strip for detection of β-adrenergic agon-ist clenbuterol residues[J].J Immunol methods，2006，312（1）：27-33.

[3] 王立斌，张永慧，梁春穗，等.盐酸克伦特罗引起特大食物中毒的调查与思考[J].华南预防医学，2002，28（1）：54-56.

[4] 严华松，金乐君.15起盐酸克伦特罗食物中毒的调查与分析[J].福建医药杂志，2004，26（6）：232.

[5] 中华人民共和国农业部公告第235号[A/OL].（2002-12-24）[2018-03-03].http：//jiuban.moa.gov.cn/zwllm/nybz/200803/t20080304_1028649.htm.

[6] 国家质量监督检验检疫总局.测量不确定度评定与表示：JJF1059.1-2012 [S].北京：中国标准出版社，2012.

[7] 黄美玲，聂飞，刘红，等.ELISA法测定水产品中氯霉素残留量的测量不确定度评定[J].农业与技术，2012，32（12）：169-170.

[8] 李兰英，丁敏，徐勤，等.LC-MS/MS测定猪尿中盐酸克伦特罗不确定度的评定[J].中国计量学院学报，2012，23（1）：7-12.