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HPLC—DAD法测定蓝花参中橙皮苷含量

2018-09-18张宽曾茂贵罗兰

中国民族民间医药·上半月 2018年5期

张宽 曾茂贵 罗兰

【摘 要】 目的:建立高效液相色谱测定蓝花参中橙皮苷含量的方法。方法:色谱柱:BEH C18柱(100×2.1 mm,1.7 μm);检测波长:268 nm;流速:0.3 mL/min;柱温:30 ℃;乙腈-1%乙酸水溶液为流动相进行梯度洗脱。结果:橙皮苷回归方程:y=0.101x+0.401(r=0.9965),线性范围为4.144~82.88μg/mL;橙皮苷的平均加样回收率为97.63%,RSD为1.39%。结论:该法精密度、准确性良好,方法简便快捷,可用于蓝花参中橙皮苷的含量测定。

【关键词】 HPLC;蓝花参;橙皮苷

【中图分类号】R284 【文献标志码】 A 【文章编号】1007-8517(2018)09-0008-03

蓝花参(Wahlenbergia marginata(Thunb.) A. DC.)为桔梗科蓝花参属的植物,入药部位为根或全草,具有益气健脾、祛痰止咳的功效,临床上常用于治疗气管炎、百日咳[1]等疾病。目前发现蓝花参中含有甾体类化合物如β-谷甾醇葡萄糖苷、多炔类化合物如党参炔苷、苯丙素类化合物如Wahlenbergioside及挥发油如n-十六烷酸[2-4]等化学成分。橙皮苷为课题组首次于蓝花参中发现的黄酮类物质,其相对分子量为610.56 kD[5]。大量的研究表明[6],橙皮苷在抗肿瘤、心血管保护、神经保护及过敏性哮喘等方面皆有良好的治疗效果。本实验利用高效液相色谱(High Performance Liquid Chromatography,HPLC)法测定蓝花参中橙皮苷含量,为建立快速准确测定蓝花参中的橙皮苷提供依据。

1 仪器与材料

1.1 仪器 Waters H-class高效液相色谱仪(配有在线脱气机、四元泵、自动进样器,美国Waters公司);SB-5200DT超声波提取器(宁波新芝生物科技股份有限公司,批号:131897);BSA224S电子天平(赛多利斯科学仪器有限公司,批号:2014-03)。

1.2 材料 蓝花参全草干品购于福州回春中药饮片厂有限公司(批号:14010507),经福建卫生职业技术学院药学系朱扶蓉副教授鉴定为[Wahlenbergia marginata(Thunb.) A.DC.]。

橙皮苷对照品(批号:K02M3C1,上海源叶生物科技有限公司),HPLC级乙腈(批号:20150402)、甲醇(批号:20160411,国药集团化学试剂有限公司);AR,级乙酸(批号:0812181)、甲酸(批号:1608241,汕头市西陇化工厂有限公司)。

2 方法与结果

2.1 色譜条件与系统适用性试验 流动相乙腈(A)-1%乙酸水(B),梯度洗脱(0~1 min,5%~15%A;1~4 min,15%~20%A;4~7 min,20%~25%A;7~10 min,25%~30%A;10~13 min,30%~35%A;13~16 min,35%~40%A;16~20 min,40%~60%A;20~23 min,60%~70%A);流速:0.3 mL/min;检测波长268 nm;柱温30 ℃;进样量2 μL。见图1所示。

2.2 对照品溶液制备 精密称定橙皮苷对照品1.036 mg于10 mL容量瓶中,加入甲醇,超声溶解,定容,得到浓度为1.036 mg/mL的对照品贮备液。

2.3 供试品溶液制备 精密称定蓝花参药材约2.0 g,精密加入40%乙醇50 mL,称定重量,超声30 min(250 W、50 Hz)后取出,放至室温,补足重量,0.22 μm微孔滤膜滤过,取续滤液,即得。

2.4 标准曲线制备 精密量取橙皮苷对照品溶液适量,稀释成一系列对照品溶液,按2.1项下色谱条件测定,以对照品溶液浓度(C)为横坐标x,峰面积(A)为纵坐标y,得回归方程:y=0.101x+0.401(r=0.9965),线性范围为4.144~82.88 μg/mL。如图2所示。

2.5 精密度试验 精密吸取混合对照品溶液2 μL,按“2.1”项下色谱条件连续进样6次。橙皮苷峰面积RSD为0.35%,橙皮苷保留时间(tR)RSD为0.14%,表明该仪器精密度良好。

2.6 稳定性试验 精密称定蓝花参药材约2.0 g,按“2.3”项下制备供试品溶液,于0,1,2,4,8,12 h,按“2.1”项下色谱条件进样。橙皮苷峰面积RSD为0.51%,说明该供试品在12 h内稳定。

2.7 重复性试验 精密称定蓝花参药材约2.0 g,按“2.3”项下方法制备供试品溶液,按“2.1”项下色谱条件进样,平行操作6次。橙皮苷的平均含量为698.209 μg/g,RSD为0.47%,说明该方法的重复性良好。

2.8 加样回收率试验 精密称取同批蓝花参药材6份,每份约1.0 g,均精密加入橙皮苷对照品溶液适量,按“2.3”项下方法制备供试品溶液,按“2.1”项下色谱条件进样。橙皮苷的平均加样回收率为97.63%,RSD为1.39%。说明该方法准确性高。见表1。

2.9 样品测试 精密称取蓝花参2 g,平行3份,按照“2.3“项下制备供试品溶液,按”2.1”项下色谱条件分别对3份样品进行测定,橙皮苷含量分别为681.221 μg/g、675.365 μg/g、684.981 μg/g,平均值为680.522 μg/g,RSD为0.62%。

3 讨论

文献报道[7]橙皮苷具有较强的抗炎作用,对4种炎症模型均表现出剂量依赖性的抑制作用,而蓝花参经实验证实其高、中剂量均具有抗炎消肿作用[8]。由此推断橙皮苷有可能是其抗炎活性物质基础之一,其具体作用机制有待进一步实验证。

蓝花参中橙皮苷的含量测定未见文献报道,故试验采用HPLC-DAD法对蓝花参中橙皮苷含量进行快速检测,该法简便易行,且精密度、准确性、重复性均良好,为建立快速准确测定蓝花参中的橙皮苷提供依据。

参考文献

[1]国家中药管理局《中华本草》编委会.中华本草:第8册[M].上海:上海科学技术出版社,1999:130-135.

[2]张宗平,贾忠建,朱子清.细叶沙参化学成分的研究[J].兰州大学学报:自然科学版,1987,23(4):159-160.

[3]W. G. M A, Tan R X, Fuzzati N, et al. Cheminform Abstract: Wahlenbergioside, a Phenylpropanoid Glucoside from Wahlenbergia marginata[J]. Phytochemistry, 1997, 45(2):411-415.

[4]柯鹏颉.蓝花参中挥发油的气质联用分析[J].海峡药学,2006,18(3):88-89.

[5]曾茂贵,张宽,罗兰.基于HPLC-DAD-Q-TOF-MS的蓝花参化学成分定性研究[J].中国医院药学杂志,2017,37(11):23-28.

[6]李雪飞,江洪.橙皮苷药理学作用机制及研究进展[J].海南医学,2016,27(14):2337-2340.

[7]李荣,胡成穆,姜辉,等.橙皮苷的提取及其抗炎活性研究[J].安徽医科大学学报,2007,42(5):546-549.

[8]叶华,曾茂贵,罗戢彬凯,等.蓝花参抗炎、止痛的药效学与急性毒性试验研究[J].福建中医药,2012,43(5):49-50,55.

(收稿日期:2018-03-09 编辑:陶希睿)