木麒麟对佐剂性关节炎大鼠足肿胀的影响

彭志洁　赖琪　滕逸飞　乔珍艳　陈毅飞

【摘 要】目的：研究木麒麟对佐剂性关节炎（Adjuvant arthritis，AA ）大鼠足肿胀的影响。方法：将50只SD大鼠随机分成5组，即空白组、模型组、阳性对照组和木麒麟高、低剂量组。除空白组外，其余各组用弗氏完全佐剂（Freunds complete adjuvant，CFA）诱导建立AA大鼠模型，造模第17天进行药物外敷浸泡治疗，量取各组给药前后的足跖及足关节直径，观察其肿胀度。结果：与模型组相比，木麒麟高剂量组和阳性对照组的足跖、足关节肿胀度减轻（P<0.05）。结论：木麒麟对佐剂性关节炎大鼠足肿胀有明显的抑制作用。

【关键词】木麒麟；佐剂性关节炎；足肿胀

中图分类号： R283.6；R285.5 文献标识码： A 文章编号： 2095-2457（2018）14-0124-003

DOI：10.19694/j.cnki.issn2095-2457.2018.14.055

The paw swelling effect of pereskia aculeate miller on adjuvant arthritisin rats

PENG Zhi-jie1 LAI Qi1 TENG Yi-fei1 QIAO Zhen-yan1 CHEN Yi-fei2

（1.College of Pharmacy， 2014， Guilin Medical College， Guilin， Guangxi 541004， China；

2.Department of Pharmacology， Guilin Medical College， Guilin， Guangxi 541004， China）

【Abstract】Objective：To study paw swelling effects of Pereskiaaculeate Miller on adjuvant arthritis（AA）in rats. Methods：50 spraguedawley rats were stochastic divided into five groups：blank group， model group，positive control group high and low dose group of Pereskia Aculeate Miller.Except the blank group，a rat model of AA induced by other groups using Freunds complete adjuvant（CFA），after seventeenth days of medicine soaking treatment.Then they were given the amount of foot and podarthrumdiameter before and after treatment，and to observe the degree of swelling. Results：Compared with the model group，the foot and podarthrum swelling degree of the high dose group was reduced（P<0.05）.Conclusions：Pereskia aculeate Miller has remarkable inhibitory effect on adjuvant arthritis of rats.

【Key words】Pereskia Aculeate Miller；Adjuvant Arthritis；Paw swelling

類风湿性关节炎（Rheumatoid arthritis， RA）是一种以致残性关节病变为主要的风湿病，其病理表现主要是滑膜细胞异常增殖、炎性细胞浸润，累及周身关节滑膜，甚至严重时可导致滑膜增厚，形成侵袭性血管翳，侵蚀软骨与骨导致关节破坏[1]。木麒麟（Pereskia aculeate Miller）又称虎刺，是仙人掌科木麒麟属植物，在巴西的传统医学中，木麒麟常被用来做润肤剂、治疗皮肤创伤和各种炎症[2]。近年来随着对木麒麟的深入研究，有报道木麒麟叶子甲醇提取物对急慢性炎症小鼠具有抗炎作用，其相关机制在一定程度与抑制IL-1β，IL- 6和TNF-α炎症因子释放有关[3]，其甲醇提取物中的己烷分数成分在促进伤口愈合中发挥很大的作用[4]，还有研究指出其叶子粘液含量越多，伤口愈合速度越快[5]，但对于其治疗各种炎症的抗炎作用机制目前仍不完全清楚。AA模型是评价类风湿性关节炎药物经常使用的动物模型之一，其发病机理，病变部位以及病变性质都和人的RA基本类似。本研究以类风湿性关节炎动物模型—AA大鼠模型作为研究对象，通过观察大鼠足跖及足关节的肿胀度变化和检测炎性因子的含量来验证木麒麟治疗RA的作用效果，为今后木麒麟在临床上治疗类风湿等疾病的应用提供一定的理论依据。

1 材料与方法

1.1 动物

随机抽取SPF级的SD大鼠（桂林医学院实验动物中心提供，合格证号：SCXK桂2007-0001）50只，体重（180±20）g。

1.2 药物、试剂与主要仪器

木麒麟（在广西贺州当地采摘，经桂林医学院生药学教研室王晓华副教授鉴定），雷公藤多苷片（远大医药黄石飞制药有限公司生产， 批号20151202），弗氏完全佐剂（CFA，由美国SIGMA-ALDRICH公司提供，F5881-10X10ML），Elisa试剂盒（伊莱瑞特生物科技有限公司，产品编号E-EL-R0019c），酶标仪（英国生物技术仪器公司），离心机（由德国SIGMA-ALDRICH公司生产）

1.3 分组

将适应性喂养一周后的50只SD大鼠随机分成空白组、模型对照组、阳性对照组、木麒麟高剂量组和木麒麟低剂量组，每组10只。测量正常状态下各组大鼠右足足跖的厚度。

1.4 模型制备

除空白对照组外，其余的40只大鼠都进行AA模型的制备，将0.05ml CFA（10mg/ml）于每只大鼠的右后足足跖皮内注射[6]，诱发佐剂性关节炎，此期间注意观察大鼠后足的活动情况，对于肿胀程度不明显的大鼠再给予注射0.05ml CFA加强免疫。

1.5 药物配制

称取95g木麒麟110ml自来水捣碎研磨成糊状作为高剂量木麒麟，浓度为0.86g/ml（按生药量计），取47.5g木麒麟加110ml捣碎研磨成糊状作为低剂量木麒麟，浓度为0.43g/ml（按生药量计）。SD大鼠造模第17d开始外敷浸泡药物，每次外敷浸泡十分钟，保证药物的经皮吸收。模型组外敷浸泡等容积自来水，阳性对照组灌胃雷公藤多苷片（12mg/kg），每个组每日一次，连续7d给药。空白组大鼠与其余组别一样在相同环境条件下喂养。

1.6 测量足肿胀度

采用精度0.01mm游标卡尺，量取致炎足跖厚度，注射CFA前量取正常值，给药最后一天后，量取各组大鼠足足跖厚度，并比较给药前后的足跖厚度，观察足跖肿胀的变化情况。

1.7 统计学方法

采用SPSS统计软件进行数据处理与统计分析，组间利用单因素方差分析方法。计量资料以x±s表示，P<0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 对AA大鼠足跖肿胀的影响

模型组大鼠的右后足（注射足）在致炎后开始发红并逐渐肿胀（如图1），24h左右肿胀到达高峰，16d左右出现右后足跖肿胀等继发性病变，至第17d达到峰值，关节活动受限，此后肿胀渐渐减轻一直到观察结束。实验结果表明，模型组肿胀与正常组相比具有显著性差异（P<0.05），说明炎症反应明显。和模型组比较，给药7d后木麒麟高剂量能够显著降低足跖肿胀程度，差异具有统计学意义（P<0.05）。木麒麟低剂量组与模型组相比，而足跖肿胀度差异不明显。木麒麟高剂量组与阳性对照组比较，足关节肿胀度没有明显差异（P>0.05）。足跖肿胀实验反应木麒麟高剂量能够抑制大鼠足跖及足关节肿胀。见图2和图3。

3 讨论

目前对RA的病因还没有完全清楚，但RA患者的炎性细胞因子异常活跃。RA滑膜的炎症反应涉及多种细胞因子，其中TNF-α和IL-1β被认为是关节疾病病理过程中促进软骨基质的破坏及功能退化重要的细胞因子[7]。目前的研究表明，当机体受到炎症刺激后，IL-1β和TNF-α促进胶原酶和前列腺素E2（PGE2）等小分子炎症介质的释放，抑制各种生长因子对软骨细胞的促有丝分裂作用，最终导致软骨和骨的破坏[8]。另外，IL-1β还可以使嗜中性粒细胞、巨噬细胞和淋巴细胞聚集，从而加重炎症反应[9]。有研究表明，TNF-α阻滞剂能够有效的抑制滑膜炎症甚至骨侵蚀的加重[7]。有研究指出，足跖肿胀度是反应AA模型后肢炎症轻重程度的外部客观指标[10]。本研究通过大鼠足跖肿胀度变化来观察木麒麟治疗AA的效果，结果显示，高剂量木麒麟能明显抑制CFA诱导的足跖肿胀。下一步我们将探讨木麒麟明显的抑制AA大鼠足跖肿胀的作用，是否与抑制炎症因子IL1β、TNF-α的产生与释放密切相关，期望为其治疗类风湿性关节炎的临床应用提供实验依据。

注：与空白组比较，*P<0.05；与模型组比较，**P<0.05； 与阳性对照组比较，#P<0.05.

图2 木麒麟对AA大鼠足趾肿胀的影响

非甾体类抗炎药是在临床上用来治疗RA最多的药物之一，但中年患者长期使用非甾体类抗炎药时，有增加消化道出血及心血管疾病的风险[11-12]。本实验利用外敷方法治疗，外敷疗法可以减少对胃肠道的刺激及肝肾脏的损害，和创伤性的治疗比较，疼痛反应轻，且具有安全，方便等特点[13]。另外，木麒麟为天然植物，天然药物具有良好的抗炎效果、毒副反应小，并且天然药物来源丰富、结构多样，具有良好的应用前景[14]。今后应进一步加强对木麒麟的抗AA活性成分及活性部位的研究，从更多的抗炎途径和环节对其进行深入探究，以促进木麒麟在临床治疗类风湿关节炎的推广和应用。

【参考文献】

[1]田振华，黄国华伶，张翔云，等.苗医验方“四大血”抗炎、镇痛作用拆方研究.亚太传统医药，2013（3）：12-14.

[2]AlmeidaM，CorreaA.Improvement of physiological parameters of rats subjected to hypercaloric diet，with the use of Pereskiagrandifolia（Cactaceae） leaf flour.Obes Res ClinPract， 2016，10（6）：701-709.

[3]PintoN.Pereskia aculeate Miller leaves present in vivo topical anti-inflammatory activity in models of acute and chronic dermatitis.Journal of Ethnophannacology，2015，173：330-337.

[4]PintoN.Pereskia aculeate Miller leaves accelerate excisional wound healing in mice.Journal of Ethnopharmacology，2016，194： 131-136.

[5]CarvalhoaE，SoaresaC.Wound healing properties and mucilage content of Pereskiaaculeate from different substrates.Rev Bras Farmacogn.2014，（24）：677-682.

[6]張玉玲，佟继铭.疼痛实验动物模型研究概况.承德医学院学报，2009，26（02）：195-198.

[7]黄淑婷，徐建华，丁长海.炎症细胞因子及力学因素在膝骨关节炎发病机制和关节结构改变中的作用.安徽医学，2013（9）：1417-1419.

[8]Zwerina J，Hayer S，Tohidast-Akrad M，et al.Single and combined inhibition of tumor necrosis factor，interleukin-1 and RANKL pathways in tumor necrosis factor-induced arthritis： effects on synovial inflammation， bone erosion and cartilage destruction.Arthritis Rheum，2004，50（1）：277-290.

[9]杨会杰，阎昊，佟继铭，等.赤雹根总皂苷对AA大鼠脾脏TNF-α、IL-1β、IL-6表达的影响.承德医学院学报，2014，（01）：8-10.

[10]龙丽，赵金霞，贾汝琳，等.草乌甲素对大鼠佐剂性关节炎的影响.临床药物治疗杂志，2013，（01）：16-18.

[11]黄木全.膝关节骨性关节炎各期经筋辨证及相关证素研究.北京：北京中医药大学，2012.

[12]何小斌.功能训练联合温针药灸治疗膝关节骨性关节炎随机平行对照.实用中医内科杂志，2014（09）：117-120.

[13]李华，方志远，柏立群等.中药外敷法对轻中度膝关节骨性关节炎WOMAC评分和VAS评分的影响.世界中医药，2017，12（04）：803-806.

[14]刘莹，王振洲，李平亚等.天然药物抗炎成分及作用机制的研究进展.特产研究，2017，（01）：69-76.