miR-182、信号传导和转录激活因子3、基质金属蛋白酶-7与食管癌老年患者临床病理及预后的关系

王岩峰 郑玉环

(大庆油田总医院病理科，黑龙江 大庆 163001)

食管癌为食管腺上皮或者鳞状上皮的恶性病变，多发生于老年人群，其进展较为缓慢，早期诊治者治愈率高，但发病较隐匿，早期症状不明显，临床病理为老年食管癌患者预后评估的主要方式，目前临床上缺乏对食管癌高危人群筛选、早期诊断及预后评估的典型标志物〔1〕。细胞癌变属多因素、多阶段过程，与系列基因突变有着良好的相关性〔2〕。微小RNA(miR)-182具有高度的组织及肿瘤特异性，且稳定性高，可调控基因转录，参与肿瘤发生发展，为潜在调控靶点。信号传导和转录激活因子(STAT)3作为一种原癌基因，可起到信号传导和转录作用，从而调控细胞生长、分化及侵袭转移等〔3〕。同时基质金属蛋白酶(MMPs)降解能够导致肿瘤发生侵袭与转移，MMP-7为其主要类型之一，可降解多种细胞外基质〔4〕。多个研究证实〔5,6〕，miR-182、STAT3、MMP-7于多种肿瘤组织中高度表达，并指出其异常表达可能和患者临床病理和预后相关。本研究旨在探讨miR-182、STAT3、MMP-7于食管癌发生中的机制，并分析其和临床病理与预后的关系。

1 资料与方法

1.1一般资料 大庆油田总医院2014年1月至2015年6月67例老年食管癌患者，纳入标准〔7〕：均经病理组织活检证实为食管癌；年龄≥60岁。排除标准：接受新辅助放化疗；全身系统明显病变。年龄60～79岁，平均(72.14±5.32)岁；肿瘤直径大小2～8 cm，平均(4.33±1.02)cm。

1.2方法 ①标本收集：手术收集癌与癌旁组织，放置于液氮中并转移至-80℃低温箱待用。②miR-182测定：将冻存的食管细胞珠复苏后常规传代培养，于6孔板中接种，待细胞丰度至90%时停止培养。取磷酸盐缓冲液(PBS)冲洗，加入miR提取试剂盒中裂解液，采集细胞，并置于-80℃低温箱中待用。取食管组织标本，进行固化、研碎，并加入miR提取试剂盒中裂解液。取分光光度计测定miR浓度和质量。反转录后，加入miR-182，放置于荧光定量聚合酶链反应(PCR)仪中实施PCR扩增。并按2-△△Ct法计算miR-182相对表达量。③STAT3、MMP-7测定：选用免疫组织化学染色法进行，将标本组织制作为蜡块并切片，脱蜡至水，并常规切片。经二甲苯脱蜡、梯度乙醇水化，取3%过氧化氢溶液将内源性过氧化氢酶灭活。微波抗原修复，取正常养血清进行非特异性抗原封闭。再予以复染、脱水、透明并封片。在光学显微镜下观察，选择图像分析系统拍片。选择MIAS2000图像分析系统处STAT3及MMP-7阳性区域平均光密度值，并以此代表阳性产物表达；STAT3于细胞核或者细胞质中阳性表达，且表现为棕黄色颗粒样物质。MMP-7于细胞质内阳性表达，且表现为棕黄色颗粒样物质〔8〕。

1.3统计学方法 采用SPPS18.0统计软件进行χ2检验，Spearman等级相关分析，Kaplan-Meier法绘制生存曲线，Cox回归模型实施多因素影响分析。

2 结 果

2.1miR-182、STAT3、MMP-7于食管癌组织与癌旁组织中表达 miR-182于食管癌组织与癌旁组织高表达率分别为52.24%(35/67)和14.93%(10/67)，STAT3分别为64.18%(43/67)和17.91%(12/67)，MMP-7分别为55.22%(37/67)和16.42%(11/67)，三者癌组织高表达率均显著高于癌旁组织(P<0.05)。

2.2miR-182、STAT3、MMP-7与食管癌老年患者临床病理关系 miR-182、STAT3、MMP-7高表达与食管癌老年患者性别、年龄、肿瘤直径无关(P>0.05)；miR-182、STAT3、MMP-7高表达与食管癌分化程度、T分期、淋巴结转移及临床分期有关(P<0.05)，见表1。

表1 miR-182、STAT3、MMP-7高表达与食管癌老年患者临床病理的关系〔n(%)〕

2.3食管癌肿瘤组织中miR-182、STAT3、MMP-7表达相关性 67例食管癌中，miR-182、STAT3、MMP-7均为阳性表达者32例，均为阴性表达20例，miR-182、STAT3、MMP-7均呈正相关(P<0.05，miR-182与STAT3r=0.421，miR-182与MMP-7r=0.560，STAT3与MMP-7r=0.409)。

2.4miR-182、STAT3、MMP-7表达和食管癌患者预后联系 miR-182高表达者和低表达者2年生存率分别为(19/35)和(25/32)，STAT3分别为(23/43)和(19/24)，MMP-7分别为(17/37)和(24/30)，miR-182、STAT3、MMP-7高表达者2年生存率均分别显著低于低表达者(P<0.05)，见图1。Cox比例风险显示，分化程度、T分期、临床分期和食管癌患者预后无关，淋巴结转移、miR-182、STAT3、MMP-7高表达为食管癌患者预后独立危险因素。见表2。

图1 食管癌患者不同miR-182、STAT3、MMP-7表达的生存分析

因素BSBWaldχ2值P值OR95%CI分化程度0.5710.3822.2340.1381.7730.820～3.776T分期0.6870.3623.6010.0722.0100.984～4.130淋巴结转移0.8310.3754.9110.0242.3411.020～4.873临床分期0.1650.4080.1640.6731.1860.539～0.268miR-1820.7780.3624.6190.0282.1101.084～4.321STAT30.6420.4402.1290.0193.1211.248～8.761MMP-70.7090.3414.2250.0322.0850.874～3.720

3 讨 论

尽管目前多个临床病理学特征能够一定程度地评估预后，但由于个体及肿瘤差异无法准确预测肿瘤预后〔9，10〕。近年来，随着临床对细胞癌变机制的不断认识，发现部分分子标记物能够于肿瘤发生发展及预后评估中起重要作用〔11〕。既往研究已证实〔12〕基因异常表达是肿瘤发生的主要机制，miR可通过诱导特异性基因沉默，引起靶mRNA降解并影响蛋白质合成，转录后可负性调节基因表达，起到抑癌基因或癌基因作用，为基因表达的新型调控因子。目前miR在食管癌中表达备受临床关注，多种miR可异常表达，其中miR-203及miR-375下调能够避免促进肿瘤细胞凋亡，降低肿瘤分期；miR-106b及miR-192等明显上调，能够导致肿瘤细胞增殖与转移〔13，14〕。鲁之中等〔15〕研究表明，食管癌组织中miR-182表达明显高于癌旁组织，并指出其可于食管癌发病中发挥癌基因作用，和本结果研究相似。本研究说明miR-182可能调控食管癌发生发展，是影响食管癌患者预后的独立危险因素，可作为预后判断的观察指标。

细胞信号传导障碍能够影响细胞正常生长、分化及代谢，导致肿瘤发生。STAT3通路可于细胞周期调控和凋亡中起到重要作用，机体正常状态下其激活相对快速且短暂，从而维持正常细胞生理功能〔16〕。其调控异常可持续性激活，刺激相关基因异常表达，并经多种途径导致细胞发生增殖及恶性转化，引起免疫逃逸，并发挥致癌作用。研究证实〔17，18〕，STAT3可于乳腺癌、结直肠癌等实体肿瘤组织中持续激活，促进肿瘤细胞形成并抑制其凋亡。本文结果和临床研究报道〔19〕相似，提示其可一定程度反映食管癌的分化程度与侵袭转移等恶性特征。

目前认为肿瘤侵袭转移为多步骤的复杂过程，其中细胞外基质与基底膜降解为其中心环节，临床研究证实〔20〕，MMPs能够通过降解相关蛋白质，引起肿瘤侵袭及转移，且可诱导血管新生，加剧肿瘤形成。MMP-7作为其重要成员，对细胞基质有广泛降解作用，且可刺激其他MMPs表达。相关研究报道〔21〕，MMP-7主要于食管癌细胞质和细胞膜中表达，且呈异质性表达，本研究也支持此观点。本研究提示MMP-7高表达能够促进肿瘤进展，并可反映肿瘤病理体征，一定程度预测肿瘤恶性程度，与Ishikawa等〔22〕研究报道结果相似。本研究结果显示，食管癌miR-182、STAT3及MMP-7之间表达呈正相关，可能与其存在共同通路，或者可于共同刺激因素下激活，有待研究证实。