舒筋通络颗粒中乳香挥发油提取及包合工艺研究

屈云萍 李哲 王娇 李菲 杨斯斯 刘铁军

摘要：为提高乳香挥发油在制剂中的稳定性，对舒筋通络颗粒中乳香挥发油的提取及其包合工艺进行了研究。选择浸泡时间（A）、药材粒径（B）、加水量（C）、提取时间（D）为考察因素，采用L9（34）进行正交试验设计，优化乳香挥发油的提取工艺，通过正交试验，对饱和水溶液法和胶体磨法两种包合方式进行了工艺研究。结果表明：影响因素的优化组合为A1B1C1D3，其中加水量和提取时间对收率具有极显著性影响，包合时间、挥发油和β-环糊精比例、包合温度对饱和水溶液法有极显著性影响；研磨时间、挥发油和β-环糊精比例对胶体磨法有极显著性影响。从生产角度考虑，包合乳香挥发油采用胶体磨法较饱和水溶液法更具有优势。

关键词：中药药剂学；乳香挥发油；提取；包合；饱和水溶液法；胶体磨法；正交试验设计

中图分类号：R943文献标志码：Adoi： 10.7535/hbgykj.2018yx04012

舒筋通络颗粒是由骨碎补、牛膝、川芎、天麻、黄芪、威灵仙、地龙、葛根和乳香制成的中药颗粒，系神威药业集团独家上市的新药，已被2015年版《中华人民共和国药典》收录[1]，具有补肝益肾、活血舒筋之功效，适于治疗颈椎病之肝肾阴虚、气滞血瘀证，头晕、头痛、胀痛或刺痛，耳聋、耳鸣，颈项僵直，颈、肩、背疼痛，肢体麻木，倦怠乏力，腰膝酸软，口唇色暗，舌质暗红或有瘀斑等，对治疗神经根型、椎动脉型和脊髓型颈椎病亦有疗效[2-4]。乳香为方中的要药，主要起活血化痰、消肿止痛、祛腐生肌的功效[1]，乙酸辛酯是乳香挥发油的主要成分[5-7]，其留存在药品中的量越多，效果越好。

植物中提取挥发油的方法主要有压榨法、溶剂回流浸取法、微波辅助法、超临界流体萃取法、水蒸气蒸馏法、水酶法等[8-11]。本研究采用水蒸气蒸馏法，以挥发油得率为考核指标，优选乳香挥发油提取工艺。为提高挥发油在制剂中的稳定性，采用β-环糊精包合，并以包合率及包合物得率为考核指标，采用正交试验优选包合工艺，比较包合方式的各自优势。

1主要仪器与试药

METTLER-RLC-210.4电子分析天平，梅特勒-托利多仪器（上海）有限公司提供；电热真空干燥机，贵阳新奇微波工业有限责任公司提供；配液小罐，浙江苍南县立瓯石化设备有限公司提供；DFY-00型粉碎机，浙江温岭市大德中药材器械厂提供。

乳香药材，经河北省药品检验研究院中药师孙宝惠主任鉴定为木兰科八角茴香正品；β-环糊精，安徽山河药用辅料股份有限公司提供。

2实验部分

2.1舒筋通络颗粒制备工艺

将乳香以外的药材按规定提取，干燥成浸膏粉，采用水蒸气蒸馏法提取挥发油，收集挥发油，以β-环糊精包合，将包合物与浸膏粉、辅料、矫味剂混匀，制粒即得。

2.2乳香挥发油提取工艺条件的优化

2.2.1正交试验

影响挥发油提取的主要因素有浸泡时间、药材粒径、加水量、提取时间等。本研究采用L9（34）正交表进行试验，选择浸泡时间（A）、药材粒径（B）、加水量（C）、提取时间（D）为考察的4个因素[12]，以挥发油收率为评价指标，优化提取工艺。因素与水平见表1，正交试验设计与结果见表2，方差分析结果见表3。

2.2.2正交试验结果分析

在设计的因素水平范围内，从方差分析结果可知各因素对结果的影响顺序为D>C>A>B。其中，加水量（C）、提取时间（D）具有极显著性影响，浸泡时间（A）、药材粒径（B）无显著性影响。综合考虑后确定舒筋通络颗粒中乳香油提取工艺水平的最优组合为A1B1C1D3。

2.2.3工艺验证

按优化后的工艺条件，提取6 批（每批藥材量50 kg）乳香挥发油，收率分别为1.4%，1.5%，1.4%，1.4%，1.5%和1.5%，均值为99.72%，RSD值为0084%（n=6） 。结果均在预测范围内，重现性良好，证明优化工艺条件可行。

2.3乳香挥发油包合工艺

2.3.1包合物的制备

常用的挥发油包合方式有2种[13-14]：饱和水溶液法和胶体磨法。

1）饱和水溶液法取称量好的β-环糊精，用纯化水搅拌后加入到配液小罐中，加热至规定温度，同时开启搅拌桨持续搅拌，溶液呈透明状时停止加热。待溶液温度降至规定温度，将用等量95%（体积分数，下同）乙醇稀释后的乳香油缓缓加入到β-环糊精溶液中，边加边搅拌，到达规定时间后放出，置冷库冷藏24 h，用约0.074 mm（200目）的滤布过滤，滤渣用水洗涤后再用乙醚洗涤至无乳香油味，置于烘箱中于60 ℃以下干燥，粉碎即得。

2）胶体磨法取一定量的β-环糊精，加入一定量的水，搅拌，加入到胶体磨中研磨至规定时间，缓慢加入乳香油，研磨至规定时间，低温冷藏24 h，用约0074 mm（200目）的滤布过滤，将滤渣用水洗涤后再用乙醚洗涤至无乳香油味，置于烘箱中于60 ℃以下干燥，粉碎即得。

2.3.2空白回收率的测定

包合物包合完成、冷藏过夜后，需用无水乙醇或其他有机试剂将未包合的挥发油洗去，抽滤，然后得到的就是包有挥发油的包合物。将此包合物干燥后，放入挥发油提取器，提取出来的油就是被包合的油。取1 mL挥发油，在该挥发油提取器中进行测定，按式（1）计算空白回收率：

空白回收率=实际收油量投油量×100%。（1）

2.3.3包合率及包合物得率的测定

将所得干燥包合物精确称定，置于1 000 mL圆底烧瓶中，加入400 mL蒸馏水，分别按《中华人民共和国药典》2015年版“挥发油测定法”提取挥发油，至挥发油体积不再增加为止，读取体积，计算挥发油包合率和包合物得率，分别见式（2）和式（3）：

挥发油包合率=实际收油量投油量×空白回收率×100%，（2）

包合物得率=包合物质量β-环糊精量+投油量×100%。（3）

2.3.4综合评价指标Y

挥发油包合的越多，留存在产品中发挥疗效就越好，因此将包合率占比定为60%、包合物得率占比定为40%。

Y=包合率×60%+包合物得率×40%。

2.4两种包合方法最佳工艺的确定

取“2.2.3”工艺验证提取的6批乳香挥发油，确定两种包合方法的最佳工艺，按“2.3.1”所述方法进行包合。

2.4.1饱和水溶液法包合最佳工艺

影响饱和水溶液法包合的主要因素有挥发油和β-环糊精比例（A）、包合温度[15-16]（B）、包合时间（C）和加油速率（D）等，通过L9（34）正交表进行试验，因素与水平见表4，正交试验设计与结果见表5，方差分析结果见表6。

从方差分析结果可知，各因素对试验结果的影响顺序为C>A>B>D。其中，包合时间（因素C）、挥发油和β-环糊精比例（因素A）、包合温度（因素B）具有极显著性影响，加油速率（因素D）无显著性影响。综合考虑，确定饱和水溶液法包合工藝水平的最优组合为A1B1C3D1，即挥发油和β-环糊精比例（体积质量比，下同）为1∶10，包合温度为35 ℃，包合时间为4 h，加油速率为40 mL/min。

2.4.2胶体磨法包合最佳工艺

影响胶体磨法包合的主要因素有挥发油和β-环糊精比例（因素A）、加水量（因素B）、研磨时间（因素C）等，通过L4（23）正交表进行试验，方差分析结果见表7。

由方差分析结果得出，影响胶体磨法包合乳香油的因素顺序为C>A>B，其中研磨时间（因素C）、挥发油和β-环糊精比例（因素A）影响极显著，加水量（因素B）无显著性影响。综合考虑，确定胶体磨法包合工艺水平的最优条件：即挥发油和β-环糊精比例为1∶3，加水量为3倍，研磨时间为30 min。

2.5两种包合方法最优工艺验证

用正交试验得出的包合乳香油的最优工艺参数进行包合，每种方法各3批，具体试验所用物料、包合时间及包合物综合评价数据见表8。

由验证数据不难看出，两种包合方法得率差别不大，但胶体磨法的包合率较饱和水溶液法要高一些。另外，从经济角度考虑，胶体磨法所使用的物料要少很多，且包合时间较饱和水溶液法大大缩短，因此，考虑到企业生产成本问题，建议选用胶体磨法[17-18]。

3结语

1）通过正交试验，对舒筋通络颗粒中的乳香提取工艺进行了优化，采用水蒸气蒸馏法提取，加水量和提取时间对乳香挥发油收率具有极显著性影响，浸泡时间和药材粒径并无显著性影响。

2）通过比较两种包合方法的工艺条件可知，胶体磨法比饱和水溶液法使用的β-环糊精量少，包合时间短，工艺简便，且包合物得率及挥发油的利用率综合评定较高。胶体磨法包合乳香挥发油工艺具有节约、简便、高效、质优等优点。

3）本次试验未对包合物进行成分检测确认，后续工作将持续开展两种不同包合方式对乳香挥发油成分的检测研究。

参考文献/References：

[1] 国家药典委员会. 中华人民共和国药典[M].北京：中国医药科技出版社，2015.

[2] 李宁.舒筋通络颗粒治疗神经根型颈椎病的疗效观察[J].中国医药科学，2013，3（21）：105-106.

LI Ning.Efficacy observation of Shujintongluo particles in treatment of cervical spondylotic radiculopathy[J].China Medicine and Pharmacy，2013，3（21）：105-106.

[3]丁建锋，贾本让.舒筋通络颗粒治疗脊髓型颈椎病疗效观察[J].现代中西医结合杂志，2009，18（13）：1477-1478.

[4]刘西纺，孙银娣，殷继超，等.舒筋通络颗粒配合不同疗法治疗急性发作期神经根型颈椎病[J].现代中西医结合杂志，2012，25（21）：2760-2761.

[5]FARAH I，SHAH A K，AAIF H.Phytochemistry and potential therapeutic actions of Boswellic acids： A mini-review[J].Asian Pacific Journal of Tropical Biomedicine，2017，7（6）513-523.

[6]刘青，于宗渊.气相色谱法测定乳香挥发油中乙酸辛酯的含量[J].时珍国医国药，2007，18（6）：1416.

LIU Qing，YU Zongyuan.Quantitative measurement of octyl acetate in olibanum volatile oil by GC[J].Lishizhen Medicine and Matetia Medica Research， 2007，18（6）：1416.

[7]宋光林，郭峰，曾广铭，等.乳香中乙酸辛酯含量的测定[J].贵州科学，2008，26（1）：57-60.

SONG Guanglin，GUO Feng，ZENG Guangming，et al.Determination of octyl acetate in olibanum[J].Guizhou Science， 2008，26（1）：57-60.

[8]方学智，姚小华，王开良，等.不同制油方法对油茶籽油品质的影响[J].中国油脂，2009，34（1）：23-25.

FANG Xuezhi ，YAO Xiaohua，WANG Kailiang，et al.Effects of extraction methods on the quality of oil-tea camellia seed oil[J].China Oils and Fats， 2009，34（1）：23-25.

[9]耿晶娟，舒奕，陶莎，等.不同方法提取火麻籽油的品质分析[J].中国油脂，2015，40（5）：46-48.

GENG Jingjuan，SHU Yi，TAO Sha，et al.Ouality analysis of hemp seed oils extracted by different methods[J].China Oils and Fats， 2015，40（5）：46-48.

[10]張玲，付佳，高军刚，等.香樟籽油的超声波辅助提取工艺研究[J].安徽农业科学，2010，38（1）：352-353.

ZHANG Ling，FU Jia，GAO Jungang，et al.Extraction of oil from cinnamomum camohora fruit with ultrasonic[J].Journal of Anhui Agricultural Science，2010，38（1）：352-353.

[11]赵津，周泽中，闫路娜.基于正交试验设计对柚皮果胶提取工艺的优化[J].河北工业科技，2013，30（5）：338-341.

ZHAO Jin，ZHOU Zezhong，YAN Luna.Optimization of extraction process of grapefruit peel pectin based on orthogonal experimental design[J].Hebei Journal of Industrial Science and Technology，2013，30（5）：338-341.

[12]郭志军，胡凯莉，秦建芳.乳香挥发油的超临界CO2萃取工艺研究[J].上海中医药杂志，2011，45（3）：75-77.

GUO Zhijun，HU Kaili，QIN Jianfang.Study on supercritical CO2 extraction technology of frankincense essential oil[J].Shanghai Journal of Traditional Chinese Medicine， 2011，45（3）：75-77.

[13]侯家玉.中药药理学[M].北京：中国中医药出版社，2002：57.

[14]卢鹏伟，牛艳阳，李更生.制乳香、制没药挥发油β-环糊精包合工艺的研究[J].河南大学学报（医学版），2008，27（2）：34-38.

LU Pengwei，NIU Yanyang，LI Gengsheng.Study on the process conditions of β-cyclodextrin inclusion of volatile oils from olibanum and myrrha [J].Journal of Henan University（Medical Science）， 2008，27（2）：34-38.

[15]罗国平，张存劳，郭慧辉，等.砂仁油的提取及其包埋技术研究[J].现代中药研究与实践，2016，30（5）：39-42.

LUO Guoping，ZHANG Cunlao，GUO Huihui， et al.Study on the extraction and inclusion technologies for oil in fructus amomi[J].Research and Practice on Chinese Medicines， 2016，30（5）：39-42.

[16]陈龙，吴凤智，周鸿翔，等.响应面法优化β-环糊精包埋核桃油工艺研究[J].食品科技，2014，39（7）：172-175.

CHEN Long，WU Fengzhi，ZHOU Hongxiang， et al.Optimization of process of β-cyclodextrin embedding walnut oil by response surface methodology[J].Food Science and Technology，2014，39（7）：172-175.

[17]张广庆.中药乳香的化学成分及生物活性研究[J].科技创新与应用，2015（23）：95.

[18]王萌，张会敏，郭长强.全国5个不同地区乳香中乙酸辛酯含量的测定[J].中医药学报，2011，39（2）：76-77.

WANG Meng，ZHANG Huimin，GUO Changqiang.Determination of octyle acetate in olibanum from 5 different regions of the country[J].Acta Chinese Medicine and Pharmacology， 2011，39（2）：76-77.