原子吸收分光光度法测定藏药二十五味珊瑚丸中5种重金属含量

2018-09-10刘兰张勇仓钟铧次仁久米王聚乐

中国药房 2018年7期

刘兰张勇仓钟铧次仁久米王聚乐

中圖分类号 R284 文献标志码 A 文章编号 1001-0408（2018）07-0973-04

DOI 10.6039/j.issn.1001-0408.2018.07.26

摘要目的：建立测定藏药二十五味珊瑚丸中5种重金属含量的方法，并考察西藏不同地区5个厂家生产的该药品中重金属含量情况。方法：以浓硝酸-高氯酸（4 ∶ 1，V/V）消解二十五味珊瑚丸样品，采用火焰原子吸收分光光度法测定其中铜（Cu）、铅（Pb）、镉（Cd）3种重金属元素的含量，氢化物发生原子吸收分光光度法测定其中砷（As）、汞（Hg）2种重金属元素的含量。结果：5种重金属元素含量检测在相应质量浓度范围内线性关系均良好（r均≥0.999 1）；Cu、Pb、Cd元素的检测限分别为0.001 6、0.041 2、0.036 3 mg/L，定量限分别为0.005 3、0.137 3、0.121 0 mg/L；As、Hg元素的检测限分别为0.325 7、0.692 3 μg/L，定量限分别为1.085 7、2.307 7 μg/L；精密度试验的RSD均≤5.54%（n=6）；稳定性试验的RSD均≤3.79%；重复性试验的RSD均≤3.72%；平均加样回收率为91.34%～110.11%，RSD为0.66%～6.80%（n=6）。含量测定结果显示，5个厂家的样品中Cu含量皆未超标，但 Cd、Hg含量均超标；其中还有4个厂家样品中Pb含量超标，2个厂家样品中As含量超标。结论：建立的含量测定方法的准确度、灵敏度较高，且稳定性、重复性较好，适用于二十五味珊瑚丸中5种重金属含量的测定；5个厂家生产样品均在一定程度上存在重金属超标问题。

关键词火焰原子吸收分光光度法；氢化物发生原子吸收分光光度法；二十五味珊瑚丸；重金属；含量测定

ABSTRACT OBJECTIVE： To establish a method for the contents determination of 5 heavy metals in Ershiwuwei shanhu pills，and to investigate the contents of heavy metals in Ershiwuwei shanhu pills produced by 5 manufacturers from different districts of Tibet. METHODS： Ershiwuwei shanhu pills were digested by HNO3-HClO4 （4 ∶ 1，V/V）. The contents of 3 heavy metals as Cu， Pb， Cd in samples were measured by flame atomic absorption spectrometry （FAAS）. The contents of 2 heavy metals as As，Hg in samples were measured by hydride generation atomic absorption spectrometry （HG-AAS）. RESULTS： 5 kinds of heavy metals have good linear relationship in the corresponding mass concentration range （all r≥0.999 1）. The limits of detection of Cu， Pb， Cd were 0.001 6， 0.041 2， 0.036 3 mg/L， and the limits of quantitation were 0.005 3， 0.137 3， 0.121 0 mg/L； the limits of detection of As， Hg were 0.325 7， 0.692 3 μg/L， and the limits of quantitation were 1.085 7， 2.307 7 μg/L. RSDs of precision tests were ≤5.54%（n=6）； RSDs of stability tests were all≤3.79%； RSDs of reproducibility tests were ≤3.72%. The average recovery rates were 91.34%-110.11% （RSDs were 0.66%-6.80%，n=6）. Results of contents determination showed that the contents of Cu in samples from 5 manufacturers were not out of limits， but the contents of Cd and Hg were all out of limits； the contents of Pb in samples from 4 manufacturers were out of limits， and the contents of As in samples from 2 manufacturers were out of limits. CONCLUSIONS： The established method has good accuracy， sensitivity， stability and reproducibility， and it is suitable for contents determination of 5 heavy metals in Ershiwuwei shanhu pills. To some extent，there is a problem of excessive heavy metals in samples from 5 manufacturers.

KEYWORDS Flame atomic absorption spectrometry； Hydride generation atomic absorption spectrometry； Ershiwuwei shanhu pills； Heavy metals； Content determination

二十五味珊瑚丸是由人工麝香、珊瑚、珍珠母、广木香、红花、朱砂、榜那等25味药材组成的复方制剂[1]，在1997年被原卫生部批准为国家中药保护品种[2]，主要用于白脉病（即神经系统疾病）的治疗，有清热定惊、开窍、通络、止痛等功效[3-4]，现收载于2015年版《中国药典》（一部）中[5]。该药中的朱砂、青金石、炉甘石、磁石、禹粮土等10味矿物药是其重要组成部分[6-7]，其中不乏重金属元素。由于藏药疗程较长的特点，可能导致重金属在体内蓄积中毒，故而为该药的使用带来了较大的风险，极大地影响了该药的临床应用[8-9]。銅（Cu）、铅（Pb）、镉（Cd）、砷（As）、汞（Hg）等重金属严重影响人体健康[10]，国际和国内都对其提出了严格的限量标准[11]。目前，对二十五味珊瑚丸中重金属含量的报道极少，仅有少量关于其中Hg含量的报道[12-13]，且2015年版《中国药典》（一部）收载的二十五味珊瑚丸质量标准项下并未对其重金属含量进行检查。鉴于此，笔者采用火焰原子吸收分光光度法对西藏不同地区5个厂家生产的二十五味珊瑚丸中Cu、Pb、Cd 3种重金属元素的含量进行分析，并利用氢化物发生原子吸收分光光度法对其中As、Hg 2种重金属元素的含量进行分析，为该药的质量控制提供一定的试验依据。

1 材料

1.1 仪器

AA-7000型原子吸收分光光度计与Cu、Pb、Cd、As、Hg空心阴极灯（北京东西分析仪器有限公司）。

1.2 药品与试剂

二十五味珊瑚丸为分别购自西藏拉萨市某藏药A厂（批号：15084A，规格：1 g/丸）、西藏拉萨市某藏药B厂（批号：150201，规格：1 g/丸）、西藏山南市某藏药C厂（批号：150401-180，规格：1 g/丸）、西藏日喀则市某藏药D厂（批号：150401，规格：0.25 g/丸）、西藏昌都市某藏药E厂（批号：140901，规格：0.25 g/丸）；Cu、Pb、Cd、As、Hg元素的标准溶液（国家钢铁材料测试中心，批号分别为：GSB G 62024-90、GSB G 62071-90、GSB G 62040-90、GSB G 62028-90、GSB G 62069-90，质量浓度均为1 000 mg/L）；浓硝酸、高氯酸等均为分析纯，水为蒸馏水。

2 方法与结果

2.1 仪器工作条件

采用火焰原子吸收分光光度法测定Cu、Pb、Cd含量，仪器工作条件见表1。采用氢化物发生原子吸收分光光度法测定As、Hg含量，仪器工作条件见表2。

2.2 溶液的制备

2.2.1 供试品溶液的制备将二十五味珊瑚丸用研钵研成粉末，干燥，准确称取干粉 1.0 g于 100 mL锥形瓶中，加入15 mL混合酸液（HNO3与HClO4体积比为4 ∶ 1），轻轻振摇使混合酸液面浸没样品，静置48 h。置电炉上加热消解至溶液澄明后，继续加热消解至冒浓白烟，直至白烟散尽，消解液呈微黄色，放冷，转入50 mL量瓶中，用 2%HNO3溶液洗涤锥形瓶3次，洗液合并于量瓶中， 2%HNO3溶液定容，摇匀，即得。

2.2.2 空白溶液的制备不加二十五味珊瑚丸粉末样品，其余方法同“2.2.1”项下，制备缺药品的空白溶液。

2.2.3 标准溶液的制备分别取“1.2”项下Cu、Pb、Cd、As、Hg元素的标准溶液（1 000 mg/L）适量，用2%HNO3为溶剂制备系列质量浓度的标准溶液：Cu为0.312 5、0.625 0、1.250 0、2.500 0、5.00 00 mg/L，Pb为0.625 0、1.250 0、2.500 0、5.000 0、10.000 0 mg/L，Cd为0.0312 5、0.062 5、0.125 0、0.250 0、0.500 0 mg/L，As为6.250 0、12.500 0、25.000 0、50.000 0、100.000 0 μg/L，Hg为6.250 0、12.500 0、25.000 0、50.000 0、100.000 0 μg/L。

2.3 线性关系考察

分别量取“2.2.3”项下各元素标准品溶液适量，参考2015年版《中国药典》（四部）通则0406第一法测定[14]，以质量浓度为横坐标（x）、吸光度为纵坐标（y）作图，求出回归方程。结果显示，5种重金属元素检测在相应质量浓度范围内线性关系均良好（r均≥0.999 1），5种重金属元素的线性范围测定结果见表3。

2.4 检测限与定量限考察

对空白溶液进行20次测定，记录其吸光度的标准偏差δ，S为工作曲线的斜率，以3 δ/S为检测限，10 δ/S为定量限。结果表明，Cu、Pb、Cd元素的检测限分别为0.001 6、0.041 2、0.036 3 mg/L，As、Hg元素的检测限分别为0.325 7、0.692 3 μg/L；Cu、Pb、Cd元素的定量限为0.005 3、0.137 3、0.121 0 mg/L，As、Hg元素的定量限分别为1.085 7、2.307 7 μg/L。

2.5 精密度考察

取“2.2.3”项下各元素标准品溶液（Cu、Pb、Cd、As、Hg溶液的质量浓度分别为5.000 0 mg/L、10.000 0 mg/L、0.500 0 mg/L、100.000 0 μg/L、100.000 0 μg/L）适量，然后按“2.1”项下仪器工作条件进样测定，平行测定6次。结果，Cu、Pb、Cd、As、Hg含量的RSD分别为0.78%、0.03%、0.56%、5.54%、3.29%（n=6）。结果表明，方法精密度较好。

2.6 稳定性考察

取“2.2.1”项下供试品溶液（样品来源于C厂）适量，室温下分别放置 0、2、4、8、12 h，然后按“2.1”项下仪器工作条件进样测定。结果，Cu、Pb、Cd、As、Hg含量检测的RSD分别为0.70%、0.31%、0.88%、3.79%、3.68%（n=5）。结果表明，供试品溶液在室温下放置 12 h较为稳定。

2.7 重复性考察

精密称取同一批样品（来源于C厂）适量，按“2.2.1”项下方法制备供试品溶液，共6份，分别按“2.1”项下仪器工作条件进样测定。结果，Cu、Pb、Cd、As、Hg的平均含量分别为 8.264 2、2.086 7、3.196 9、0.412 4、1.415 1 mg/kg，RSD分别为1.40%、0.72%、1.39%、3.72%、3.27%（n=6）。结果表明，本方法重复性良好。

2.8 准确度考察

取已知重金属含量的样品粉末（来源于C厂）约0.3 g，共6份，再分别加入已知含量的Cu、Pb、Cd、As、Hg標准溶液，按“2.2.1”项下方法制备供试品溶液，分别按“2.1”项下仪器工作条件进样测定。结果，5种重金属元素的平均加样回收率为91.34%～110.11%（RSD为0.66%～6.80%）。结果表明，该方法准确度较高，结果见表4。

2.9 样品含量测定

取5个厂家样品，按“2.2.1”项下方法制备供试品溶液，然后按“2.1”项下仪器工作条件进样测定，根据标准曲线计算二十五味珊瑚丸中5种重金属的含量。结果，不同厂家样品中重金属含量差异较大，Cu元素的含量范围为8.208 1～10.294 0 mg/kg，Pb元素的含量范围为2.027 5～18.720 3 mg/kg，Cd元素含量范围为2.879 9～3.654 9 mg/kg，As元素的含量为0.319 8～12.325 4 mg/kg，Hg元素含量为0.717 1～4.974 2 mg/kg，结果见表5。

3 讨论

参照我国《药用植物及制剂进出口绿色行业标准》中重金属限量标准[15]：Cu元素含量应≤20.0 mg/kg，Pb元素含量应≤5.0 mg/kg，Cd元素含量应≤0.3 mg/kg，As元素含量应≤2.0 mg/kg，Hg元素含量应≤0.2 mg/kg。本研究结果显示，5个厂家的样品中Cu含量均未超出限量，Cd、Hg含量均超出了限量，5个厂家中仅有C厂生产的样品中Pb含量未超出限量，A、E 2个厂家生产的样品中As含量均超出了限量。

由于二十五味珊瑚丸样品在制备成溶液后，其中的Cu、Pb和Cd元素在乙炔-空气产生的火焰中可以有效地被原子化，产生理想的检测信号，加之火焰原子吸收法具有重现性好、分析速度快、操作简便等优点，所以笔者采用空气-乙炔火焰原子吸收分光光度法测定样品中的Cu、Pb和Cd含量。参考2015年版《中国药典》（四部）通则0406第一法[14]，样品溶液中的As和Hg元素在酸性介质中被还原成低沸点、易分解的氢化物或者蒸气，然后在吸收池中被原子化，再进行原子吸收信号的检测，可以得到较准确的结果，所以本研究采用氢化物发生原子吸收分光光度法测定样品中As和Hg元素含量。

二十五味珊瑚丸生产厂家众多，为较全面地反映其中重金属的含量情况，笔者选择西藏4个不同地区的5个厂家的产品作为检测样品。结果表明，5个厂家的产品都有一定程度的重金属超标问题。结合之前针对藏药重金属含量的一些研究[16]，发现二十五味珊瑚丸等藏药的重金属超标问题已不容忽视。

综上所述，本研究采用原子吸收分光光度法测定了二十五味珊瑚丸中Cu、Pb、Cd、As、Hg 5种重金属元素的含量，方法准确、可靠，结果可为二十五味珊瑚丸的质量控制提供重要的试验依据。

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