海南省汉族人群HLA—B*5801基因多态性与别嘌醇所致不良反应的相关性研究

云雄 吴丹娜 韩方璇 黄春新 彭文兴

中图分类号 Q343.1+5 文献标志码 A 文章编号 1001-0408（2018）09-1256-04

DOI 10.6039/j.issn.1001-0408.2018.09.25

摘 要 目的：探讨海南省汉族人群HLA-B*5801基因多态性与别嘌醇所致不良反应的相关性。方法：对海南省人民医院2015年9月-2017年9月住院的149例使用别嘌醇的患者采用原位杂交荧光染色分析技术检测其HLA-B*5801等位基因，根据其不良反应情况分为耐受组和不良反应组，应用Woolfs公式计算比值比（OR），分析HLA-B*5801等位基因与别嘌醇不良反应发生的相关性。结果：149例患者中耐受组133例，其中17.29%（23/133）携带HLA-B*5801等位基因；不良反应组16例，其中93.75%（15/16）携带HLA-B*5801等位基因。发生不良反应的16例患者中，13例为皮肤及其附件损伤、1例为全身性损害，1例为胃肠系统损害，1例为中枢及外周神经系统损害。携带HLA-B*5801等位基因患者发生不良反应的风险显著高于不携带HLA-B*5801等位基因患者（OR：71.74，95%CI：9.02～570.55，P<0.000），其中发生皮肤及其附件损伤与HLA-B*5801等位基因也呈強相关性（OR：57.39，95%CI：7.11～463.50，P<0.000）。结论：海南省汉族人群HLA-B*5801等位基因与别嘌醇所致不良反应具有强相关性，建议本地区汉族患者开始服用别嘌醇前先检测HLA-B*5801等位基因，有助于减少别嘌醇所致不良反应的发生。

关键词 HLA-B*5801；别嘌醇；基因多态性；不良反应；海南省；汉族

ABSTRACT OBJECTIVE： To investigate the relationship between HLA-B*5801 gene polymorphism and allopurinol-induced ADR in the Han population of Hainan Province. METHODS： The in-situ hybridization fluorescence staining analysis technique was used to detect HLA-B*5801 allele of 149 inpatients receiving allopurinol in Hainan Provincial Peoples Hospital during Sept. 2015-Sept. 2017. They were divided into tolerance group and ADR group according to ADR. Woolfs formula was used to calculate OR. The correlation of HLA-B*5801 allele with the occurrence of allopurinol-induced ADR was analyzed. RESULTS： Of 149 patients， there were 133 cases in tolerance group， among which 17.29% （23/133） carried HLA-B*5801 allele. There were 16 cases in ADR group， among which 93.75%（15/16） carried HLA-B*5801 allele. Among 16 ADR patients， 13 patients suffered from lesion of skin and its appendents； 1 patient suffered from systemic damage； 1 patient suffered from gastrointestinal systemic damage； 1 patient suffered from central and peripheral nervous system damage. The risk of ADR in patients with HLA-B*5801 allele was significantly higher than patients without HLA-B*5801 allele（OR：71.74，95%CI：9.02-570.55，P<0.000）. The lesion of skin and its appendents was strongly associated with HLA-B*5801 allele （OR：57.39， 95%CI： 7.11-463.50， P<0.000）. CONCLUSIONS： HLA-B*5801 allele is strongly associated with allopurinol-induced ADR. It is suggested that HLA-B*5801 allele of Han patients should be detected before taking allopurinol， which helps to reduce the incidence of allopurinol-induced ADR.

KEYWORDS HLA-B* 5801； Allopurinol； Gene polymorphism； ADR； Hainan province； Han population

海南由于特色的饮食结构，如常食海鲜等富含嘌呤类食物，高血脂、痛风等慢性疾病发病率日趋上涨[1]，近些年已有不少研究[2-3]报道，别嘌醇是治疗痛风的主要药物，但其易引发严重不良反应，尤其是严重的皮肤反应，包括重症渗出性多形红斑型药疹（Stevens-Johnson syndrome，SJS）和中毒性表皮坏死松解症（Toxic epidermal necrolysis，TEN），发生率约为5%，约占药疹病例的11.94%，病死率可达30%～50%[2]，已引起人们越来越多的关注。已有研究显示，中国汉族人群中HLA-B*5801等位基因阳性者发生别嘌醇所致SJS或TEN的风险显著高于HLA-B*5801等位基因阴性者[3]，但目前针对海南省汉族人群HLA-B*5801等位基因多态性与别嘌醇所致不良反应的相关性研究报道很少。故本研究主要收集海南省行HLA-B*5801 等位基因检测的汉族人群，根据其使用别嘌醇后不良反应的发生情况，分析该地区人群HLA-B*5801等位基因多态性与别嘌醇所致不良反应的相关性。

1 资料来源与方法

1.1 临床资料

收集海南省人民医院2015年9月-2017年9月具有别嘌醇使用指征的海南省汉族人群资料及其服药后3个月内的不良反应发生情况。共收集患者149例，主要来源于肾病风湿科129例、医疗保健科20例，根据是否发生不良反应分为使用别嘌醇后未发生不良反应的耐受组和使用别嘌醇后发生不良反应的不良反应组。耐受组共133例患者，平均年龄（51.65±19.9）岁，男性89例，女性44例；不良反应组共16例患者，平均年龄（49.25±17.56）岁，男性10例，女性6例，两组患者年龄和性别分布差异均无统计学意义（P>0.05）。

1.2 基因检测

利用原位杂交荧光染色分析技术检测患者基因型。具体操作：（1）氯化铵溶液与灭菌注射用水按照1 ∶ 9比例稀释作为预处理液，对用乙二胺四乙酸钠抗凝采血真空管采集的临床全血样本进行编号，上下颠倒混匀。（2）取对应编号的1.5 mL离心管加入1.2 mL预处理液与150 μL混匀的临床全血样本上下颠倒10次混匀，然后放于室温环境静置5 min。（3）将样本放入离心机中，700×g离心5 min。（4）去上清液后离心管底部可见约2 mm×2 mm的白细胞沉淀，若团块过小须重复（2）～（4）步骤。（5）向离心管中加入50 μL PHARM-GENE01SNP分析保存液（北京华夏时代基因科技发展有限公司）反复吹打混匀，放于室温环境静置30 min，得到白细胞保存液。（6）取1.5 μL白细胞保存液加入HLA-B*5801 PHARM- GENE200SNP分析样品处理试剂（北京华夏时代基因科技发展有限公司）后，置于TL998A荧光检测仪中。（7）采用原位杂交荧光染色分析系统自动判读荧光信号值获取荧光曲线图进行HLA-B*5801基因分型并作阳性质控，当两条荧光信号中有一条信号高于内参信号，则此位点为阳性，因此“+/-”和“+/+”的结果均表示HLA-B*5801等位基因呈阳性，即携带HLA-B*5801等位基因，而“-/-”表示HLA-B*5801等位基因呈阴性，即不携带HLA-B*5801等位基因。

1.3 统计学方法

运用SPSS 19.0软件进行统计，基因型频率采用频率计数法计算，“-/-”“-/+”“+/+”3种基因型的个体数分别为n1、n2、n3，其基因型频率分别为n1/（n1+n2+n3）、n2/（n1+n2+n3）、n3/（n1+n2+n3），阴性基因等位频率p=（2n1+n2）/（n1+n2+n3），阳性基因等位频率q=（2n2+n3）/（n1+n2+n3），“-/-”“-/+”“+/+”3种基因型理论基因型频率分别为p2、2pq、q2。将基因频率进行Hardy-Weinberg（简称H-W）遗传平衡检验[4]。相关性分析采用卡方检验和Fisher精确检验，应用Woolfs公式计算比值比（OR）及其95%置信区间（CI），以P<0.05表示差异具有统计学意义。

2 结果

2.1 HLA-B*5801 基因分布

149例患者中38例（占总人数的25.50%）携带HLA-B*5801等位基因，包括耐受组23例（占耐受组的17.29%）和不良反应组15例（占不良反应组的93.75%）。H-W遗传平衡检验结果显示，实际基因型分布与理论基因型分布差异无统计学意义（χ2=0.495，P=0.078 1），符合H-W平衡定律，表明具有该地区人群代表性。HLA-B*5801 基因分布情况见表1。

2.2 不良反应发生情况

不良反应组16 例患者使用别嘌醇后出现不同程度的不良反应，其中15例患者携带HLA-B*5801等位基因。16例患者出现的不良反应临床症状主要以皮肤及其附件损伤为主，共13例，占不良反应组的81.25%，其中有3例患者（占不良反应组的18.75%）表现为严重皮肤不良反应，且检测基因型均为强阳性（“+/+”），经Fisher精确检验显示，严重皮肤不良反应患者与其他不良反应患者比较，P<0.05，显示使用别嘌醇后引起严重皮肤不良反应与引起其他不良反应的基因分布具有显著差异，可见HLA-B*5801等位基因强阳性为使用别嘌醇后引起严重皮肤不良反应的高危因素。患者使用别嘌醇后出现严重皮肤不良反应的时间为第5～30天不等，其中有1例患者用药15 d后出现的严重皮肤不良反应，临床表现为四肢出现皮疹，停药后皮疹消退，继续服用别嘌醇后第2天面部出现红斑，伴有发热，遂自行口服“快克”治疗，红斑迅速增多，遍布全身，伴有瘙痒，全身皮肤可见大量大小不一片状红斑，部分红斑上分布有大疱，疱壁薄易破，疱液清，尼氏征阳性；住院期间给予注射用甲泼尼龙琥珀酸钠、盐酸苯海拉明注射液及枸地氯雷他定片等治疗，15 d后皮疹好转，病情稳定出院。其他发生不良反应的患者症状较轻，预防良好。别嘌醇所致不良反应的主要临床症状见表2。

2.3 HLA-B*5801等位基因与使用别嘌醇所致不良反应的相关性

149例患者中耐受组133例，其中17.29%（23/133）携带HLA-B*5801等位基因；不良反应组16例，其中93.75%（15/16）携带HLA-B*5801等位基因。发生不良反应的16例患者中以皮肤及其附件损伤为主。携带HLA-B*5801等位基因患者发生不良反应的风险显著高于不携带HLA-B*5801等位基因患者（OR：71.74，95%CI：9.02～570.55，P<0.000），其中发生皮肤及其附件损伤与HLA-B*5801等位基因也呈强相关性（OR：57.39，95%CI：7.11～463.50，P<0.000）。

3 讨论

3.1 别嘌醇不良反应与基因相关性

在过去十年中，高尿酸血症、痛风以及降尿酸治疗药物遗传学的遗传基础研究取得了重大进展，主要发现包括HLA-B*5801基因检测在降低高危人群别嘌醇所致不良反应发生率方面的影响[5]。别嘌醇是黄嘌呤氧化酶（Xanthine oxidase，XO）的抑制剂，主要机制是抑制尿酸合成發挥降尿酸作用，其自1963年上市以来，是临床治疗痛风一线降尿酸药物，人们对别嘌醇的最大安全性关注是有0.1%～0.4%的严重皮肤不良反应风险[5]，也称为别嘌醇超敏反应综合征。药物基因组研究已经证明，携带HLA-B*5801等位基因患者使用别嘌醇治疗，具有较高发生严重不良反应SJS/TEN的风险[5-10]。半抗原假说[11]认为其发生的机制可能是药物修饰抗原与主要组织相容性复合体（Major histocompatibility complex，MHC）、T细胞受体（T cell antigen receptor，TCR）相互作用有关，HLA-B分子将内源或加工的外源抗原呈递给T细胞，从而引发适应性免疫应答。被药物激活的药物特异性T细胞需要人类白细胞抗原（Human leukocyte antigen，HLA）限制。效应T细胞的T细胞受体被认为识别由抗原呈递细胞上的特异性HLA-B分子结合的药物-肽复合物，导致免疫介质的释放并导致严重的适应性免疫反应药物不良反应。据报道，使用别嘌醇所致的SJS/TEN与HLA-B*5801等位基因基于当前数据显示具有最强关联，相对风险数OR高达580[9-10]。

3.2 HLA-B*5801基因多態性

已发现HLA-B*5801基因携带率因种族/民族和地理区域而异。在美国，高加索人和西班牙裔人群的HLA-B*5801基因携带率相对较低（0.1%），而非裔美国人（3.8%）和亚洲人（7.4%）的HLA-B*5801基因携带率较高[12-13]。美国风湿病学（American college of rheumatology，ACR）指南推荐在韩国、泰国等国人群和具有汉族血统等人群使用别嘌醇之前应进行HLA-B*5801基因检测[12]。国际组织相容性工作组报告显示，汉族健康人群HLA-B*5801基因的携带率为10%左右，吴国光等[14]报道中国南方地区汉族人群HLA-B*5801基因的携带率为8.35%，北方地区汉族人群HLA-B*5801基因的携带率为5.53%。本研究结果显示，海南省汉族人群中使用别嘌醇治疗的患者HLA-B*5801基因的携带率高达25.50%，这可能与海南地域环境有关。

3.3 检测HLA-B*5801基因分型的必要性

携带HLA-B*5801是别嘌醇严重超敏反应综合征的主要危险因素，监测该基因是安全用药的重大进步。SJS/TEN严重影响患者的健康[15]。笔者还对我院SJS/TEN患者的HLA-B*5801基因进行了检测，发现我院SJS/TEN患者的HLA-B*5801等位基因携带率为100%，显示了强关联性，因此监测该基因能为临床药物的选择提供参考意见，避免携带HLA-B*5801等位基因的患者使用别嘌醇进行痛风的治疗，是降低危及生命的不良反应发生率的有效措施。

本研究初步探讨了海南省汉族人群中HLA-B*5801基因多态性与使用别嘌醇所致不良反应的相关性，结果显示，海南省汉族人群HLA-B*5801等位基因与别嘌醇所致不良反应具有强相关性，建议该地区汉族患者开始使用别嘌醇前先检测HLA-B*5801等位基因，有助于减少别嘌醇所致不良反应的发生。本研究组未来将收集海南省独有的少数民族如黎族等人群的基因数据进行研究，以期评估该地区患有高尿酸血症或痛风的少数民族患者的疾病预后，以提高其用药安全。

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（收稿日期：2017-11-06 修回日期：2018-02-11）

（编辑：邹丽娟）