白色假丝酵母菌和表皮葡萄球菌对电化学发光法检测乙型肝炎结果的影响

2018-09-04李美方芳李小宁

锦州医科大学学报 2018年2期

李美方芳李小宁

(皖南医学院弋矶山医院检验科,安徽芜湖241001)

乙型肝炎病毒造成了严重的全球卫生问题,世界上三分之一的人口感染了这种病毒,其中3.7亿是慢性携带者,每年大约有100万人死于HBV感染相关的肝衰竭、肝硬化、原发性肝癌等[1]。病毒血清学标志物检测可辅助临床早期诊断乙型肝炎,从而早期给予针对性治疗,利于疾病的康复[2]。随着医学检验技术的不断发展,检测乙型肝炎病毒 (HBV)标志物的方法不断更新,目前主要有酶联免疫吸附法 (ELISA)、固相放射免疫法、胶体金免疫层析法、时间分辨免疫荧光法、微粒子酶免疫分析法、化学发光法及电化学发光法(ECLIA)等[3]。其中ECLIA是结合生物素及链霉亲和素参与反应的方法,将钌作为标记物,通过测定光电信号对结果进行判定,敏感度显著提高[4]。研究发现实验前因素 (如标本采集和运送、标本放置时间与温度、标本离心温度与转数、抗凝剂的种类及比例等)已成为影响检测结果的主要因素[5]。因此,研究ECLIA的实验前因素对检测结果的影响,尤其是真菌和细菌对ECLIA法检测结果的影响就显得尤为重要,并且国内外目前尚无相关文献的报道。本实验就是采用ECLIA测定HB-sAg、HBeAg和HBcAb,探讨白色假丝酵母菌和表皮葡萄球菌是否影响电化学发光法检测乙型肝炎的结果,旨在提高检验质量保证结果准确,从而为临床的诊断和治疗提供理论依据。

1 资料与方法

1.1 一般资料

收集皖南医学院弋矶山医院2017年2至3月份门诊或者住院经临床诊断确诊为乙型肝炎大三阳患者的血液标本共48例。纳入标准：近1个月内无炎症、感染、菌血症病史的成年男性患者29例和女性患者19例,平均年龄35岁。

1.2 仪器与试剂

仪器电热恒温水槽DK-600型 (上海三发科学仪器有限公司),二氧化碳培养箱 (上海力申科学仪器有限公司),Roche cobas 8000系列电化学自动分析仪cobase 602(德国罗氏)。试剂乙型肝炎病毒表面抗原 (HBsAg)、e抗原 (HBeAg)、核心抗体 (HBcAb)检测试剂盒均来自罗氏诊断产品 (上海)有限公司。

1.3 检测方法

1.3.1 标本采集空腹抽取静脉血5 mL,避免溶血和脂血。静置30 min,4 000 r/min离心5 min,及时分离血清,-20℃密闭保存。

1.3.2 血清标志物检测将冷冻标本放置37℃电热恒温水槽中解冻,室温下每一例标本均设立1个对照组和6个实验组,对照组是加入200 μL血清和200 μL生理盐水,实验组是每组加入200 μL血清后,再分别依次分别加入200 μL 0.5、2.0、3.0 MCF的白色假丝酵母菌和0.5、2.0、3.0 MCF的表皮葡萄球菌,混匀,然后用电化学发光法检测标本的信号。实验前校正好仪器,机器运行状态良好,所有操作及判断结果均严格按照仪器及试剂盒说明书进行,质控和样本准确性和精密性均符合标准要求。

1.4 统计学分析

采用SPSS18.0软件包对数据进行处理,计量资料以平均值±标准差(±s)计量资料行方差齐性检测后,多组之间对比采用单因素方差分析,两两之间对比采用LSD-T检验比较用行,计数资料采用卡方检验或Fisher确切概率法对比分析。P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 不同浓度的白色念珠菌对HBsAg、HBeAg、HBcAb测量结果的比较

结果显示0.5、2.0、3.0 MCF白色假丝酵母菌分别与对照组相比,HBsAg、HBcAb检测结果差异有统计学意义 (P＜0.05),而HBeAg的结果比较无差异 (P＞0.05)。并且不同浓度的白色念珠菌组之间比较差异无统计学意义。说明白色念珠菌会影响HBsAg、HBcAb的检测结果,但与菌液浓度无关,且白色念珠菌不影响HBeAg的检测结果,见表1。

表1 不同浓度的白色假丝酵母菌对HBsAg、HBeAg、HBcAb测量结果的比较

2.2 不同浓度的表皮葡萄球菌对HBsAg、HBeAg、HBcAb测量结果的比较

结果显示0.5、2.0、3.0 MCF表皮葡萄球菌组分别与对照组相比,HBsAg、HBeAg、HBcAb检测结果无差异 (P＞0.05),并且不同浓度的表皮葡萄球菌组之间也无统计学差异。说明表皮葡萄球菌不会影响HBsAg、HBeAg、HBcAb的检测结果,见表2。

表2 不同浓度的表皮葡萄球菌对HBsAg、HBeAg、HBcAb测量结果的比较

3 讨论

3.1 研究的背景及意义

乙型肝炎血清学标志物是临床诊断乙型肝炎、判断病毒复制情况的特异性指标,其主要用于乙型肝炎感染者的动态疗效观察和病情监测。因此,寻求检测乙型肝炎血清学标志物的灵敏性和特异性好的实验方法就显得尤为重要,为早期诊断乙型肝炎及时抗病毒治疗,延缓进展为肝硬化甚至原发性肝癌具有重要临床意义。

电化学发光法 (ECLIA)是新一代标记免疫测定技术,不使用放射性物质,具有高灵敏度、高特异性、重复性好、线性宽、反应快速、影响因素少、结果准确、自动化检测等优点,近年来已广泛应用于生物医学,特别是临床医学的各个领域,从而提高了临床医学的诊断水平[6]。本实验采用ELCIA法检测乙型肝炎大三阳患者的标本 (HBsAg+、HBeAg+、HBcAb+),其中乙肝表面抗原 (HBsAg)是乙肝病毒的外壳蛋白,自身不带有传染性,但乙肝表面抗原阳性标志着乙肝的发生;乙肝e抗原(HBeAg)阳性,说明乙肝病毒正在体内复制,且传染性较强;乙肝核心抗体 (HBcAb)低滴度表明曾感染过乙肝病毒,高滴度表明乙肝病毒正活跃复制[7]。

3.2 实验室干扰乙肝两对半结果的影响因素

如何控制实验过程中的影响因素,尤其是实验前的影响因素是检验工作人员必须要重视的现实课题,也是检验质量和结果准确的基本保证。因此乙肝两对半的检验工作者本着严谨负责的态度,就必须要注意到从样本采集、试剂仪器及操作因素等每个流程对实验结果的影响,加强实验室与临床之间的沟通或转至有条件医院进行确诊,提高检测的准确性[8]。目前检验科血清标本的保存时间及方法尚无统一规定,很多医院是将分离血清标本置4℃冰箱保存,集中检测。由于自然环境中到处都有表皮葡萄球菌和白色假丝酵母菌等病原体的存在,从而会导致保存的标本或质控品容易被这些细菌或真菌的污染。

3.3 创新点及实际意义

本课题就是探讨白色假丝酵母菌和表皮葡萄球菌对电化学发光法检测乙型肝炎结果的影响,旨在提高检验质量保证检验结果的准确性等方面具有重要临床意义。实验结果显示加入白色假丝酵母菌的血清HBsAg,HBcAb的结果发生明显变化 (P＜0.05),而加入表皮葡萄球菌的血清标本结果稳定(P＞0.05),HBeAg的结果均未受到白色假丝酵母菌和表皮葡萄球菌的影响,说明可能是由于白色假丝酵母菌和表皮葡萄球菌细胞壁所特有的不同成分或分泌的酶或代谢产物不同导致检验结果的不同,具体原因不明,有待进一步研究。郭仁勇等[9]的文献报道不同乙型肝炎状态的患者肠道真菌菌群多样性较强,其优势真菌菌属为念珠菌属和酵母菌属,在研究中还发现念珠菌属和曲霉菌属是在人类胃肠道中与真菌感染密切相关的内源性菌群。在免疫功能低下时,大量服用抗菌药物等情况下会引起侵袭性真菌感染。近年来侵袭性真菌感染发病率不断增高,其中侵袭性念珠菌病和侵袭性曲霉病最常见。结合本研究的结果显示电化学发光法检测乙型肝炎病毒可能会受到白色假丝酵母菌的干扰,影响检测结果的准确性,从而提示了临床或检验科医师要及时检测血清标本,防止白色假丝酵母菌的污染。尤其要特别提示临床医生要重视可能有真菌感染的乙型肝炎患者,因患者易并发肠道的白色假丝酵母菌感染,由于白色假丝酵母菌所特有的细胞成分、分泌的酶或产生的代谢产物,可能会产生假阳性或假阴性的实验室检测结果,从而干扰甚至误导临床医生的诊断和治疗。