人参果中皂苷类化学成分研究△

2018-09-01陶丽李珂珂李东霞弓晓杰

中国现代中药 2018年8期

陶丽，李珂珂，李东霞，弓晓杰

(大连大学医学院，辽宁大连 116622)

人参果为五加科植物人参PanaxginsengC.A.Meyer 的成熟果实。近年来，随着对人参根日趋完善的研究和应用，对人参地上部分(茎、叶、花蕾、果实)的研究也引起了广大学者的兴趣。人参果作为人参地上部位的一部分，其主要有效成分为人参皂苷，并且其人参皂苷的含量约为根部的4倍[1]。人参果中的人参皂苷具有显著的抗肿瘤[2-4]、抗糖尿病[5-9]、抗心脑血管疾病[10]、抗炎[11]、抗癫痫[12]、抗氧化[13]等药理活性。基于人参果总皂苷较好的药理作用，目前已被开发成多种药物，如人参果皂苷注射液、振源口服液、振源胶囊等[14]。在课题组对人参的根、茎叶及花蕾中皂苷类化学成分和其药理学作用进行研究的基础上[15-24]，为了更全面地认识和开发利用人参果这一植物资源，我们对人参果中的皂苷类化学成分进行了比较系统的研究，从中分离并鉴定了22个化合物，其中化合物2、3、5、8、9、16、18～22为首次从人参果中分离得到。

1 仪器与材料

Bruker AV 400型核磁共振波谱仪(Bruker BioSpin AG Facilities，Fällanden，瑞典)；岛津液质联用仪(日本)：配置岛津Nexera X2型液相色谱仪(包括LC-30AD二元泵、SIL-30AC自动进样器、SPD-M30A检测器和CTO-20AC柱温箱)和8050型质谱仪；CXTH 3000型半制备高效液相色谱仪(SP-HPLC，北京创新通恒科技发展有限公司)，配置UV3000检测器、P3050二元泵、Daisogel C18色谱柱(250 mm×20 mm，10 μm)，紫外检测波长为203 nm，体积流量为5 mL·min-1；大孔吸附树脂用Diaion HP-20(日本三菱)；SBC MCI GEL反相色谱(F型，75～150 μm，成都科谱生物有限公司)；柱色谱硅胶(200～300目)和薄层色谱(TLC)硅胶板GF254(0.20～0.25 mm)，均为青岛海洋化工厂产品；三氯甲烷、甲醇、乙腈等试剂为分析纯或色谱纯。

人参果样品于2016年9月采自吉林省集安市，经弓晓杰教授鉴定为五加科人参属植物人参PanaxginsengC.A.Mey.的果实。凭证标本(2016004)存放于大连大学医学院中药研究室。

2 提取与分离

新鲜的人参果4.9 kg，去除种子得果肉浆，用甲醇加热回流提取3次，加甲醇量依次为原料量的20、15、10倍量，依次提取3、2、1.5 h。合并提取液，减压浓缩，得浸膏262 g，然后依次用环己烷和水饱和的正丁醇萃取，得到环己烷层(14.3 g)、正丁醇层(145.5 g)和水层(103.5 g)。取正丁醇层140 g，将其用水溶解后通过Diaion HP-20大孔吸附树脂柱，依次用水及20%、40%、60%、80%乙醇水溶液和乙醇梯度洗脱，得到6个流分Fr.1(3.1 g)、Fr.2(2.0 g)、Fr.3(4.5 g)、Fr.4(62.7 g)、Fr.5(57.6 g)及Fr.6(3.5 g)。

Fr.3(4.5 g)通过MCI凝胶柱色谱，经30%、40%甲醇水溶液及甲醇梯度洗脱，得到3个流分(C1～C3)。C3(0.5 g)经半制备HPLC，先后用(MeOH-H2O，10∶90)及(MeOH-H2O，20∶80)分离、纯化，得到化合物1(人参皂苷F2，10 mg)、2(越南人参皂苷R8，8 mg)、3(假人参皂苷Rc1，15 mg)。

Fr.4(42.7 g)经过反复硅胶柱色谱，CHCl3-MeOH-H2O(10∶3∶0.4→2∶3∶0.4)梯度洗脱，得到6个流分(C1～C6)。C1(10.8 g)经半制备HPLC(CH3CN-H2O，27∶73)分离，得流分C1-1(4.2 g)和C1-2(5.6 g)；C1-1再经半制备HPLC(CH3CN-H2O，20∶80)纯化，得到化合物4(人参皂苷Re，2.1 g)、5(三七皂苷R2，7.5 mg)。C1-2再经半制备HPLC(CH3CN-H2O，30∶70)纯化，得到化合物6(人参皂苷F5，2.1 g)、7(人参皂苷F3，1.5 g)、8(人参皂苷Ia，6.4 mg)、9(竹节参皂苷LM1，7.2 mg)。

Fr.5(46.5 g)通过MCI凝胶柱色谱，用60%、80%甲醇水溶液及甲醇梯度洗脱，得到8个流分(C1～C8)。C1(11.5 g)经半制备HPLC(MeOH-H2O，67∶33)反复纯化，得到化合物10[20(S)-人参皂苷Rg2，8.2 mg]、11(人参皂苷Rc，10.1 mg)、12(人参皂苷F1，6.7 mg)、13(人参皂苷Rd，12.3 mg)、14(人参皂苷Rb2，8.6 mg)、15(人参皂苷Rb1，9.1 mg)、16(人参皂苷Rh6，9.4 mg)。C6(14.1 g)经半制备HPLC(MeOH-H2O，73∶27)反复分离纯化，得到化合物17(人参皂苷Rh4，8.2 mg)、18(人参皂苷Rh5，5.1 mg)、19(绞股蓝皂苷XⅦ，10.2 mg)、20(绞股蓝皂苷Ⅸ，10.5 mg)、21(三七皂苷Fe，11.2 mg)、22(西洋参皂苷L10，12.1 mg)。

3 结构鉴定

所有22个化合物在TLC上展开后喷雾10%硫酸乙醇试液皆显紫色斑点，Libermann-Burchard反应皆呈阳性，提示它们均为三萜皂苷类化合物。

化合物1：白色无定型粉末，分子式C42H72O13。ESI-TOF-MSm/z785.5 [M+H]+。1H-NMR(pyridine-d5，500 MHz)：δH5.25(1H，t，J=7.5 Hz，H-24)，5.21(1H，d，J=8.0 Hz，H-glc-1″)，4.97(1H，d，J=8.0 Hz，H-glc-1′)；8个甲基质子：δH1.65(3H，s)，1.62(6H，s)，1.33(3H，s)，1.02(3H，s)，1.00(3H，s)，0.98(3H，s)，0.84(3H，s)。13C-NMR(pyridine-d5，125 MHz)数据见表1。参照文献[20]，鉴定为人参皂苷F2。

化合物2：白色无定型粉末，分子式C48H82O19。ESI-TOF-MSm/z985.5[M+Na]+。1H-NMR(pyridine-d5，500 MHz)：δH6.30(1H，m，H-23)，6.02(1H，d，J=15.5 Hz，H-24)，5.40(1H，d，J=7.5 Hz，H-glc-1‴)，5.22(1H，d，J=7.5 Hz，H-glc-1″)，4.95(1H，d，J=7.5 Hz，H-glc-1′)；8个甲基质子：δH1.61(3H，s)，1.56(3H，s)，1.55(3H，s)，1.32(3H，s)，1.15(3H，s)，1.03(3H，s)，0.92(3H，s)，0.87(3H，s)。13C-NMR(pyridine-d5，125 MHz)数据见表1。参照文献[25]，鉴定为越南人参皂苷R8。

化合物3：白色无定型粉末，分子式C50H84O19。ESI-TOF-MSm/z989.5 [M+H]+。1H-NMR(pyridine-d5，500 MHz)：δH5.27(1H，t，J=6.5 Hz，H-24)，5.34(1H，d，J=7.5 Hz，H-glc-1‴)，5.21(1H，d，J=8.0 Hz，H-glc-1″)，4.93(1H，d，J=7.5 Hz，H-glc-1′)；8个甲基质子：δH1.65(3H，s)，1.62(3H，s)，1.55(3H，s)，1.35(3H，s)，1.15(3H，s)，0.99(3H，s)，0.98(3H，s)，0.87(3H，s)。13C-NMR(pyridine-d5，125 MHz)数据见表1。参照文献[26]，鉴定为假人参皂苷Rc1。

化合物4：白色无定型粉末，分子式C48H82O18。ESI-TOF-MSm/z947.5 [M+H]+。1H-NMR(pyridine-d5，500 MHz)：δH6.47(1H，br s，H-rha-1″)，5.34(1H，t，J=7.4 Hz，H-24)，5.24(1H，d，J=8.0 Hz，H-glc-1′)，5.16(1H，d，J=7.8 Hz，H-glc-1‴)；8个甲基质子：δH2.11(3H，s)，1.66(6H，s)，1.61(3H，s)，1.38(3H，s)，1.19(3H，s)，0.98(3H，s)，0.96(3H，s)。13C-NMR(pyridine-d5，125 MHz)数据见表2。参照文献[20]，鉴定为人参皂苷Re。

化合物5：白色无定型粉末，分子式C41H70O13。ESI-TOF-MSm/z771.5 [M+H]+。1H-NMR(pyridine-d5，500 MHz)：δH5.76(1H，d，J=7.0 Hz，H-glc-1′)，5.35(1H，t，J=7.0 Hz，H-24)，5.33(1H，d，J=5.0 Hz，H-xyl-1″)；8个甲基质子：δH2.08(3H，s)，1.69(3H，s)，1.66(3H，s)，1.47(3H，s)，1.42(3H，s)，1.19(3H，s)，0.99(3H，s)，0.83(3H，s)。13C-NMR(pyridine-d5，125 MHz)数据见表2。参照文献[27]，鉴定为三七皂苷R2。

化合物6：白色无定型粉末，分子式C41H70O13。ESI-TOF-MSm/z771.5 [M+H]+。1H-NMR(pyridine-d5，500 MHz)：δH5.34(1H，t，J=7.0 Hz，H-24)，5.17(1H，br s，H-ara-1″)，5.13(1H，d，J=8.0 Hz，H-glc-1′)；8个甲基质子：δH1.99(3H，s)，1.65(3H，s)，1.62(3H，s)，1.60(3H，s)，1.46(3H，s)，1.12(3H，s)，1.02(3H，s)，0.98(3H，s)。13C-NMR(pyridine-d5，125 MHz)数据见表2。参照文献[23]，鉴定为人参皂苷F5。

化合物7：白色无定型粉末，分子式C41H70O13。ESI-TOF-MSm/z771.5 [M+H]+。1H-NMR(pyridine-d5，500 MHz)：δH5.35(1H，br s，H-24)，5.11(1H，d，J=8.0 Hz，H-glc-1′)，4.97(1H，br s，H-ara-1″)；8个甲基质子：δH1.98(3H，s)，1.69(3H，s)，1.65(3H，s)，1.63(3H，s)，1.45(3H，s)，1.11(3H，s)，1.02(3H，s)，0.99(3H，s)。13C-NMR(pyridine-d5，125 MHz)数据见表2。参照文献[23]，鉴定为人参皂苷F3。

化合物8：白色无定型粉末，分子式C42H72O14。ESI-TOF-MSm/z801.5[M+H]+。1H-NMR(pyridine-d5，500 MHz)：δH5.27(1H，t，J=7.0 Hz，H-24)，5.20(1H，d，J=7.5 Hz，H-glc-1′)，5.00(1H，d，J=7.5 Hz，H-glc-1″)；8个甲基质子：δH2.07(3H，s)，1.63(6H，s)，1.61(3H，s)，1.43(3H，s)，1.06(3H，s)，1.00(3H，s)，0.94(3H，s)。13C-NMR(pyridine-d5，125 MHz)数据见表2。参照文献[28]，鉴定为人参皂苷Ia。

化合物9：白色无定型粉末，分子式C41H70O13。ESI-TOF-MSm/z771.5 [M+H]+。1H-NMR(pyridine-d5，500 MHz)：δH5.33(1H，m，H-24)，5.13(1H，d，J=7.5 Hz，H-glc-1′)，4.99(1H，d，J=7.5 Hz，H-xyl-1″)；8个甲基质子：δH1.99(3H，s)，1.67(3H，s)，1.65(3H，s)，1.63(3H，s)，1.46(3H，s)，1.10(3H，s)，1.01(3H，s)，0.99(3H，s)。13C-NMR(pyridine-d5，125 MHz)数据见表2。参照文献[29]，鉴定为人参皂苷LM1。

化合物10：白色无定型粉末，分子式C42H72O13。ESI-TOF-MSm/z785.5 [M+H]+。1H-NMR(pyridine-d5，500 MHz)：δH6.50(1H，br s，H-rha-1″)，5.36(1H，t，J=7.0Hz，H-24)，5.29(1H，d，J=7.0 Hz，H-glc-1′)；8个甲基质子：δH2.13(3H，s)，1.70(3H，s)，1.66(3H，s)，1.42(3H，s)，1.38(3H，s)，1.22(3H，s)，1.00(3H，s)，0.98(3H，s)。13C-NMR(pyridine-d5，125 MHz)数据见表2。参照文献[30]，鉴定为20(S)-人参皂苷Rg2。

化合物11：白色无定型粉末，分子式C53H90O22。ESI-TOF-MSm/z1 079.6[M+H]+。1H-NMR(pyridine-d5，500 MHz)：δH5.67(1H，br s，H-ara-1″″)，5.39(1H，d，J=7.5 Hz，H-glc-1″)，5.33(1H，t，J=7.0Hz，H-24)，5.15(1H，d，J=8.0 Hz，H-glc-1‴)，4.93(1H，d，J=7.5 Hz，H-glc-1′)；8个甲基质子：δH1.69(3H，s)，1.65(3H，s)，1.64(3H，s)，1.29(3H，s)，1.12(3H，s)，0.97(6H，s)，0.82(3H，s)。13C-NMR(pyridine-d5，125 MHz)数据见表1。参照文献[31]，鉴定为人参皂苷Rc。

化合物12：白色无定型粉末，分子式C36H62O9。ESI-TOF-MSm/z639.4 [M+H]+。1H-NMR(pyridine-d5，500 MHz)：δH5.30(1H，m，H-24)，5.20(1H，d，J=6.5 Hz，H-glc-1′)；8个甲基质子：δH2.00(3H，s)，1.61(3H，s)，1.60(6H，s)，1.48(3H，s)，1.17(3H，s)，1.06(3H，s)，0.93(3H，s)。13C-NMR(pyridine-d5，125 MHz)数据见表2。参照文献[32]，鉴定为人参皂苷F1。

化合物13：白色无定型粉末，分子式C48H82O18。ESI-TOF-MSm/z947.5 [M+H]+。1H-NMR(pyridine-d5，500 MHz)：δH5.57(1H，m，H-24)，5.38(1H，d，J=7.5 Hz，H-glc-1″)，5.21(1H，d，J=7.6 Hz，H-glc-1‴)，4.91(1H，d，J=7.5 Hz，H-glc-1′)；8个甲基质子：δH1.65(3H，s)，1.62(3H，s)，1.50(3H，s)，1.31(3H，s)，1.13(3H，s)，0.98(3H，s)，0.84(3H，s)，0.79(3H，s)。13C-NMR(pyridine-d5，125 MHz)数据见表1。参照文献[31]，鉴定为人参皂苷Rd。

化合物14：白色无定型粉末，分子式C53H90O22。ESI-TOF-MSm/z1 079.6[M+H]+。1H-NMR(pyridine-d5，500 MHz)：δH5.40(1H，d，J=7.5 Hz，H-glc-1″)，5.35(1H，m，H-24)，5.15(1H，d，J=8.0 Hz，H-glc-1‴)，5.01(1H，d，J=7.5 Hz，H-ara-1″″)，4.93(1H，d，J=8.0Hz，H-glc-1′)；8个甲基质子：δH1.69(3H，s)，1.66(3H，s)，1.65(3H，s)，1.30(3H，s)，1.12(3H，s)，0.97(6H，s)，0.83(3H，s)。13C-NMR(pyridine-d5，125 MHz)数据见表1。参照文献[31]，鉴定为人参皂苷Rb2。

化合物15：白色无定型粉末，分子式C54H92O23。ESI-TOF-MSm/z1 109.6[M+H]+。1H-NMR(pyridine-d5，500 MHz)：δH5.38(1H，d，J=7.5 Hz，H-glc-1″)，5.33(1H，m，H-24)，5.14(1H，d，J=8.0 Hz，H-glc-1‴)，5.10(1H，d，J=8.0 Hz，H-glc-1″″)，4.93(1H，d，J=7.5Hz，H-glc-1′)；8个甲基质子：δH1.68(6H，s)，1.63(3H，s)，1.29(3H，s)，1.12(3H，s)，0.98(6H，s)，0.83(3H，s)。13C-NMR(pyridine-d5，125 MHz)数据见表1。参照文献[31]，鉴定为人参皂苷Rb1。

化合物16：白色无定型粉末，分子式C36H62O11。ESI-TOF-MSm/z671.4 [M+H]+。1H-NMR(pyridine-d5，500 MHz)：δH6.22(1H，m，H-23)，6.09(1H，d，J=16 Hz，H-24)，5.25(1H，d，J=8.0 Hz，H-glc-1′)；8个甲基质子：δH2.02(3H，s)，1.62(3H，s)，1.61(3H，s)，1.60(3H，s)，1.49(3H，s)，1.18(3H，s)，1.08(3H，s)，0.94(3H，s)。13C-NMR(pyridine-d5，125 MHz)数据见表2。参照文献[33]，鉴定为人参皂苷Rh6。

化合物17：白色无定型粉末，分子式C36H60O8。ESI-TOF-MSm/z621.4 [M+H]+。1H-NMR(pyridine-d5，500 MHz)：δH5.50(1H，t，J=7.0 Hz，H-22)，5.24(1H，t，J=7.0 Hz，H-24)，5.05(1H，d，J=7.7 Hz，H-glc-1′)；8个甲基质子：δH2.09(3H，s)，1.84(3H，s)，1.64(3H，s)，1.63(3H，s)，1.60(3H，s)，1.27(3H，s)，1.07(3H，s)，0.86(3H，s)。13C-NMR(pyridine-d5，125 MHz)数据见表2。参照文献[34]，鉴定为人参皂苷Rh4。

化合物18：白色无定型粉末，分子式C37H64O9。ESI-TOF-MSm/z653.5 [M+H]+。1H-NMR(pyridine-d5，500 MHz)：δH5.27(1H，t，J=7.0 Hz，H-24)，5.05(1H，d，J=7.5 Hz，H-glc-1′)；8个甲基质子：δH2.09(3H，s)，1.68(3H，s)，1.64(3H，s)，1.62(3H，s)，1.16(6H，s)，1.05(3H，s)，0.83(3H，s)。13C-NMR(pyridine-d5，125 MHz)数据见表2。参照文献[35]，鉴定为人参皂苷Rh5。

化合物19：白色无定型粉末，分子式C48H82O18。ESI-TOF-MSm/z947.5 [M+H]+。1H-NMR(pyridine-d5，500 MHz)：δH5.34(1H，m，H-24)，5.15(1H，d，J=8.5 Hz，H-glc-1″)，5.10(1H，d，J=7.0 Hz，H-glc-1‴)，4.96(1H，d，J=8.5 Hz，H-glc-1′)；8个甲基质子：δH1.68(3H，s)，1.63(3H，s)，1.33(3H，s)，1.05(3H，s)，1.02(3H，s)，1.00(3H，s)，0.98(3H，s)，0.84(3H，s)。13C-NMR(pyridine-d5，125 MHz)数据见表1。参照文献[36]，鉴定为绞股蓝皂苷XⅦ。

化合物20：白色无定型粉末，分子式C47H80O17。ESI-TOF-MSm/z917.5 [M+H]+。1H-NMR(pyridine-d5，500 MHz)：δH5.34(1H，t，J=8.0 Hz，H-24)，5.15(1H，d，J=8.5 Hz，H-glc-1″)，5.00(1H，d，J=7.0 Hz，H-glc-1′)，4.74(1H，d，J=8.5 Hz，H-glc-1‴)；8个甲基质子：δH1.68(3H，s)，1.67(3H，s)，1.60(3H，s)，1.33(3H，s)，1.02(3H，s)，1.00(3H，s)，0.98(3H，s)，0.81(3H，s)。13C-NMR(pyridine-d5，125 MHz)数据见表1。参照文献[37]，鉴定为绞股蓝皂苷Ⅸ。

化合物21：白色无定型粉末，分子式C47H80O17。ESI-TOF-MSm/z917.4 [M+H]+。1H-NMR(pyridine-d5，500 MHz)：δH5.58[1H，br s，H-ara(f)-1‴]，5.34(1H，t，J=8.0 Hz，H-24)，5.16(1H，d，J=8.5 Hz，H-glc-1″)，4.95(1H，d，J=7.0 Hz，H-glc-1′)；8个甲基质子：δH1.69(3H，s)，1.66(3H，s)，1.64(3H，s)，1.52(3H，s)，1.32(3H，s)，1.01(3H，s)，0.98(3H，s)，0.83(3H，s)。13C-NMR(pyridine-d5，125 MHz)数据见表1。参照文献[31]，鉴定为三七皂苷Fe。

化合物22：白色无定型粉末，分子式C47H80O17。ESI-TOF-MSm/z917.5 [M+H]+。1H-NMR(pyridine-d5，500 MHz)：δH5.35(1H，t，J=7.0 Hz，H-24)，5.15(1H，d，J=8.5 Hz，H-glc-1′)，5.01(1H，d，J=7.5 Hz，H-ara-1‴)，4.96(1H，d，J=7.5 Hz，H-glc-1″)；8个甲基质子：δH1.99(3H，s)，1.65(3H，s)，1.63(3H，s)，1.59(3H，s)，1.48(3H，s)，1.45(3H，s)，1.04(3H，s)，0.83(3H，s)。13C-NMR(pyridine-d5，125 MHz)数据见表1。参照文献[38]，鉴定为西洋参皂苷L10。