全自动生化仪检测高同型半胱氨酸血症大鼠血浆同型半胱氨酸及叶酸浓度

周肈魁 王 捷 时建国 闵 沛 秦庆君

在急症治疗中，生化检验发挥着极为重要的作用，包括电解质检测、肾功能检测等多个项目，检验报告能够将有效依据提供给临床的治疗工作。快速、准确的生化检验报告能够将更多的治疗时间争取给急症患者，促进临床治疗成功率的提升[1]。本研究旨在对高同型半胱氨酸(homocysteine，Hcy)血症大鼠血浆Hcy及叶酸浓度的全自动生化仪检测进行研究。

1 材料与方法

1.1 设备与材料

AU-680型全自动生化仪(美国贝克曼库尔特公司)。健康断乳Wistar大鼠24只(购自兰州大学实验动物中心)。AIN-93动物饲料和AIN-93G配方饲料均购自北京科奥协力有限公司。

1.2 实验方法

选用健康断乳Wistar大鼠24只，全部为雄性，6周龄，体质量150～170 g，平均体质量(160±10)g。进行1周的适应性喂养后依据随机数表法将24只大鼠分为研究组(高Hcy血症组)与对照组，每组12只。两组采用不同饮食饲养。研究组大鼠食用AIN-93饲料，含1.7%L-蛋氨酸，对照组大鼠食用AIN-93G配方饲料。在宁夏医科大学总医院外科实验中心封闭式饲养笼中饲养两组大鼠，控制饲养温度为18～22℃，平均(20±2)℃，让大鼠自由饮水，进行18周的连续饲养。

1.3 大鼠Hcy和叶酸浓度的测定

饲养18周后大鼠进行1 d禁食，对其进行腹腔麻醉，在此过程中将3%水合氯醛充分利用起来，取10 ml左右心脏血，对其进行10 min的离心，转速为3000 r/min，取血清分装在微量离心(Eppendorf，EP)管中，冻存在-80 ℃温度下。以较快的速度向髂动脉分叉处分离主动脉，方向为沿着主动脉弓，将主动脉取下，在10%甲醛固定液中放置胸主动脉上段1 cm左右，在液氮中放置其他主动脉部分，最后冻存在-80 ℃温度下。采用贝克曼AU-680型全自动生化仪对两组大鼠的血浆Hcy和叶酸浓度进行测定。

1.4 观察评价指标

观察记录两组大鼠血浆Hcy及叶酸浓度测定值，并进行比较分析。

1.5 统计学方法

采用SPSS 21.0统计学软件对数据进行统计分析，两组大鼠的血浆Hcy和叶酸浓度等计量资料以均数±标准差(±s)表示，采用t检验，检验水准α=0.05，以P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

研究组大鼠的血浆Hcy和叶酸浓度分别为(22.3±4.9)μmol/L和(121.3±14.1)ng/ml；对照组大鼠的血浆Hcy和叶酸浓度分别为(4.8±0.4)μmol/L和(110.3±12.2)ng/ml，研究组大鼠血浆Hcy浓度显著高于对照组，其差异有统计学意义(t=4.303，P＜0.05)，但两组大鼠的血浆叶酸浓度之间差异不显著，无统计学意义(t=1.886，P＞0.05)，见表1。

表1 两组大鼠血浆Hcy及叶酸浓度比较(±s)

表1 两组大鼠血浆Hcy及叶酸浓度比较(±s)

注：表中Hcy为同型半胱氨酸。

组别 只数 Hcy(μmol/L） 叶酸(ng/ml）研究组 12 22.3±4.9* 121.3±14.1对照组 12 4.8±0.4 110.3±12.2 t值 4.303 1.886 P值 ＜0.05 ＞0.05

3 讨论

纪铁梅[2]研究表明，心血管疾病的一个重要独立危险因素为高Hcy血症。动物模型研究结果表明，Hcy能够通过损伤内皮及其功能、提升氧化应激、对脂质代谢造成影响等各种机制致病，促使心脑血管疾病发病危险性的提升。高Hcy血症能够为血液高凝状态提供良好的前提条件，增加胆固醇合成，减少载脂蛋白A1合成，进而减少高密度脂蛋白生成，将粘附分子表达上调，对钙离子进行诱导，使其作为第二信使在平滑肌细胞中将作用充分发挥出来。高Hcy血症损伤内皮功能的机制为，为内皮细胞凋亡提供良好的前提条件，减少一氧化氮合成，增加非对称性二甲基精氨酸生成，增多内皮素释放。高Hcy血症在动物模型中能够促进动脉粥样硬化的形成。Scott等[3]研究表明，在促进动脉斑块进展速度加快、扰乱内皮功能以及促进血栓形成的过程中，高胆固醇血症与高Hcy血症具有协同作用。

近年来，临床研究中逐渐阐明了细胞内致动脉粥样硬化机制，包括内质网氧化应激、L-高半胱氨酸在细胞内金属硫蛋白上作用促进混合二硫共轭化合物的形成、金属硫蛋白同型半胱氨酸活性功能在酰化后丧失，扰乱氧化还原稳态，促进血管疾病发生速度的加快。Liu等[4]研究表明，血管内皮细胞功能紊乱可能极易在高Hcy细胞致病作用下发生。总体而言，高Hcy血症影响心血管疾病发生的机制可能为细胞内外多种机制。

He等[5]研究表明，心血管疾病的一个重要独立危险因素为血浆Hcy浓度提升，心血管风险会随着血浆Hcy浓度的提升而提升，服用0.5～5.0 mg/d叶酸能够在一定程度上降低血浆Hcy浓度。但是现阶段，临床尚未明确心血管疾病是否能够在口服叶酸的作用下得到有效预防。

目前，全自动生化分析仪、血气分析仪是临床通常采用的生化检验设备。Zhang等[6]研究表明，全自动生化分析仪不同于血气生化仪，临床可以适当调整检测标准参考范围，在参考范围内对结果进行科学合理分析。Li等[7]研究表明，在钾、钠、氯的检测中，AU-680型全自动生化仪与PL2000PLUS血气生化仪相比，具有较好的结果，发生这一现象的原因为二者具有不同的检测原理，AU-680型全自动生化仪运用间接离子选择电极法。同时，二者具有不同的检测样本[8]。此外，钾、钠、氯三种离子在细胞内外具有不同的含量[9-11]。相关医学学者[12-16]采用AU-680型全自动生化仪与ABL80型血气分析仪检测了202例急诊患者的钾、钠、氯三种离子含量，以对其电解质进行了解，发现和血气生化仪相比，AU-680型全自动生化仪的检测含量显著较高。本研究结果表明，研究组大鼠的血浆Hcy浓度显著高于对照组，但两组大鼠的血浆叶酸浓度之间的差异不显著，与上述相关医学研究结果一致。

全自动生化仪检测高Hcy血症大鼠血浆Hcy浓度提升，叶酸浓度提升不显著，临床中可以依据血浆Hcy浓度对高Hcy血症进行诊断。