胃癌组织中HMGB1和RAGE蛋白的表达及与临床病理参数的关系

耿 颖

(湖南省脑科医院,湖南 长沙 410007)

胃癌是临床上的常见疾病，患者预后较差。虽然近年来胃癌的发生率呈一定下降趋势，但是仍是全世界第4大恶性肿瘤，致死率高居恶性肿瘤第2位[1]。胃癌发生和发展分子机制尚不确切，各学者也试图寻求胃癌恶性程度、转移性的预测指标，并试图寻求治疗靶点[2]。高迁移率族蛋白B1(HMGB1)是一种非组蛋白，是高迁移率族的成员，是一种炎性因子，可能参与“炎性链”反应来引起肿瘤发生和发展。受体晚期糖基化终末产物受体(RAGE)与肿瘤发生和发展存在较大关系，可以参与肿瘤发生和发展[3]。HMGB1还可以通过与RAGE受体结合，参与肿瘤细胞的发生和生物学行为[4]。本研究旨在分析胃癌组织中HMGB1和RAGE蛋白的表达情况，并观察其与临床病理参数的关系，为临床治疗寻求新靶点提供依据。

1 临床资料

1.1一般资料 选取2013年6月—2016年6月我院收治拟行手术治疗的胃癌患者230例，均经手术病理证实为胃癌，均拟行手术治疗术前未经任何放疗和化疗，均自愿参加。排除存在免疫系统疾病者，严重损伤者，其他系统恶性肿瘤者。其中男121例，女109例；年龄35～85(63.21±1.52)岁。

1.2方法 取癌组织及癌旁≥7 cm正常组织分别纳入研究组和对照组，以4%甲醛固定，石蜡包埋。应用免疫组织化学法检测2组组织中HMGB1和RAGE蛋白表达水平，进行防脱蜡处理后将片捞出，于60 ℃温度下烤片30 min，应用二甲苯和乙醇脱蜡，将切片放置于3%H2O2中灭活内源性过氧化物酶，将切片放置于枸缘酸缓冲液中水浴，使其自然冷却。加入一抗于4 ℃环境中孵育过夜，加入二抗孵育30 min，最后进行苏木精染色。

1.3结果判断 应用Olympus光学显微镜观察结果，HMGB1蛋白以细胞核表达为主，RAGE蛋白以细胞质表达为主，呈棕黄色表示阳性信号。阳性由染色强度和阳性细胞所占百分比共同决定，染色强度可以分为无色、淡黄色、棕黄色和棕褐色，分别计为0分，1分，2分和3分；阳性细胞所占百分比≤5%为0分，6%～25%为1分，26%～50%为2分，51%～75%为3分，≥76%为4分。最后评分为两者之和。评分≥2分为阳性，≤1分为阴性[5]。

1.4统计学方法 应用SPSS 17.0软件分析数据。计数资料以%表示，应用经2检验;HMGB1和RAGE的相关性应用Spearman相关分析法分析。P<0.05表示有统计学意义。

2 结 果

2.12组HMGB1和RAGE表达比较 研究组HMGB1和RAGE阳性表达率显著高于对照组(P均<0.05)。见表1。

表1 2组HMGB1和RAGE阳性表达率比较 例(%)

2.2临床病理参数关系 HMGB1表达与TNM分期、淋巴结转移有关(P均<0.05)，RAGE表达与淋巴结转移有关(P<0.05)。见表2和表3。

2.3相关性分析 Spearman相关分析显示：HMGB1和RAGE表达呈正相关关系(r=0.629，P<0.009)。

3 讨 论

HMGB1会于多种恶性肿瘤细胞中过度表达，如鼻咽癌、大肠癌、肝癌、胰腺癌等，且与患者预后存在较大关系[6]。HMGB1会因定位不同而表现出不同的功能，但在多数细胞中，HMGB1定位于细胞核中，是DNA分子伴侣起到稳定细胞核平衡的作用，对基因转录和重组均起调节作用，也能修复DNA和维持端粒长度[7]。而在细胞质或线粒体中，HMGB1可以增加自噬作用，对凋亡具有抑制作用，也能调节线粒体的形态、功能。而细胞表面，HMGB1可以促进突触萌发，促进神经突触增长[8]。在细胞外液中，HMGB1可以与多种受体相结合，与其他共激活物成为复合物，进而调节炎性、增殖、代谢、凋亡等生理、病理反应。从多种途径参与肿瘤细胞的发生和发展[9]。因此，HMGB1是现阶段肿瘤细胞的研究重点和热点。且胃癌是属于多基因疾病，不同基因在肿瘤的发生和发展过程中发挥不同作用，针对HMGB1通路成为肿瘤靶点治疗的新热点[10]。

表2 HMGB1蛋白表达与临床病理参数关系 例(%)

表3 RAGE蛋白表达与临床病理参数关系 例(%)

晚期糖基化终末产物(AGEs)是还原糖和蛋白质相结合形成的，可以通过受体实现多种效应，AGEs受体复合物主要有AGE-R1、AGE-R2、AGE-R3，RAGE是清道夫受体，包含CD-36和SCR-Ⅱ，其与糖尿病并发症存在较大关系，也与炎性反应具有较大相关性[11]，除此之外，还参与肿瘤的发生和发展[12]。有研究证实，HMGB1可以与RAGE相结合，此通路与恶性肿瘤的发生和发展存在相关性[13]。因此，推测HMGB1-RAGE通路和胃癌也存在较大相关性。本研究显示，研究组HMGB1和RAGE阳性表达率均明显高于对照组，说明胃癌组织中会出现HMGB1和RAGE高表达，HMGB1和RAGE高表达与胃癌有关，其原因为HMGB1可以通过不同途径发挥不同作用，其与恶性肿瘤的发生和发展均存在较大关系，HMGB1也可以与RAGE相结合，通过HMGB1-RAGE通路，促进肿瘤细胞的生长和增殖，抑制肿瘤细胞凋亡[14]，因此，胃癌组织中会出现HMGB1和RAGE高表达。研究还显示，HMGB1表达与TNM分期、淋巴结转移有关，RAGE表达与淋巴结转移有关，说明HMGB1和RAGE会促进胃癌发展，均参与淋巴结转移，分析其原因为HMGB1可以调节肿瘤细胞的生长与增殖，对肿瘤细胞的浸润和侵袭存在较大影响，而TNM分期与肿瘤细胞浸润、侵袭存在较大关系，因此HMGB1与TNM分期有关，HMGB1可以与RAGE相结合，促进肿瘤细胞增殖，肿瘤细胞过度增殖容易发生淋巴结转移[15]，因此，HMGB1和RAGE均与淋巴结转移有关。本研究还显示，HMGB1和RAGE表达呈正相关关系，说明HMGB1和RAGE在胃癌发生和发展中起协同作用，推测HMGB1-RAGE轴在肿瘤的发生和发展过程中发挥重要作用，且两者之间具有相互协调、相互促进的作用。因此，临床上可以通过阻断HMGB1-RAGE通路来起到阻断肿瘤发生与发展的作用。

综上所述，胃癌组织中会出现HMGB1和RAGE高表达，且HMGB1和RAGE高表达与胃癌的浸润和转移存在关系，两者之间也存在正相关关系。临床上可以通过阻断HMGB1-RAGE通路来起到治疗肿瘤的作用。