白细胞分类人工镜检与全自动血细胞分析仪检查结果的比较

（大连大学 门诊部，辽宁 大连 116622）

0 引言

对于早期发现和诊断全身性疾病，血常规测定是不可或缺的手段之一，可以反映出骨髓造血系统、血液循环系统和贫血等相关疾病情况[1,2]。作为机体免疫细胞之一的白细胞（White blood cell，WBC），在机体发生炎症或其他疾病时，其分类计数是血液学检验的重要参考项目。报道显示，WBC分类计数结果的可靠性是临床疾病诊断和治疗的重要依据[3]。传统的人工显微镜镜检是常用的WBC分类法，但其操作费时费力、步骤繁琐，近些年已被全自动血细胞分析仪所取代，后者极大地降低了工作强度，但临床上对其结果是否准确仍有争议全自动血细胞分析仪 Sysmex XN-10[B4]融合了激光技术和电阻抗法，把核酸荧光染色和半导体流式激光技术有机结合，进行全血细胞计数和白细胞分类[4,5]，大大减轻了检验人员的工作强度，但实际工作中仪器分类干扰因素很多，使结果产生偏差。本文以此为出发点，对我部新生入学体检标本和大医三院门诊患者血常规标本的两种结果进行比较，现汇报如下。

1 材料与方法

1.1 一般材料

选取我部2017年9月新生入学体检血液标本75例用于检测。另选大医三院2017年8月至9月门诊血常规检测的患者126例，男性75 例，女性51例，二者比例1.47:1，年龄在12～68岁，平均41.4±4.5岁，选择其中MO百分率在15%～25%的血液标本43例用于检测。首诊疾病为：急性单核细胞白血病、传染性单核细胞增多症、粒细胞减少症、脾功能亢进、急性胃肠炎、流行性出血热、贫血待查、急性粒细胞白细胞病和发热待查等。

1.2 试剂与仪器

EDTA-K2真空抗凝管（德国Greiner Bio-One公司），人工镜检染色用瑞氏-姬姆萨染液（BASO珠海），Olympus CX31光学显微镜（日本Olympus公司）；Sysmex XN-10[B4]全自动血细胞分析仪（带原装配套试剂、校准物和质控品）。

1.3 检查方法

对照《全国临床检验操作规程》（第4版），以抗凝血制备血涂片，用瑞氏-姬姆萨染色。参照CLSI-H20A2文件，由两名副主任检验师，用双盲法对展开较好、颜色适中和分散均匀的体尾交接处的白细胞进行分类检测。取2张血片，每张分类100个白细胞取均值，镜下注意辨别NE、LY、BA、EO和MO等各种细胞，同时观察是否存在异常、幼稚细胞和其它非正常细胞。

用EDTA-K2真空抗凝管采集2ml静脉血（防止溶血、凝集等发生），轻轻颠倒混匀8次后置室温存放，用Sysmex XN-10[B4]全自动血细胞分析仪进行检测，全部检测在2hr内完成。Sysmex XN-10[B4]血细胞分析仪报警内容有：原始细胞、原始淋巴细胞、幼稚细胞、异形淋巴细胞、有核细胞和核左移等[6]。人工显微镜复检标准：2.0×109/L＜WBC＜2.5×109/L、NE＞85%、LY＞65%、BA＞1.5%和EO＞6.5%。

1.4 观测指标

①新生入学体检血标本两种分类方法WBC结果比较。血涂片用人工显微镜分类和Sysmex XN-10[B4]血细胞分析仪分类。

②门诊血常规MO为15%～25%的血标本两种分类方法WBC结果比较。对MO百分率在15%～25%的血液标本43例进行人工镜检分类和血细胞分析仪分类，把二者WBC分类结果进行比较。

③人工镜检结果和仪器报警提示的比较。计算公式：灵敏度=真阳性/真阳性+假阴性，特异度=真阴性/真阴性+假阳性；假阴性率=1-灵敏度，假阳性率=1-特异度。按仪器报警内容进行人工显微镜复检，得出仪器检测的阴性率、阳性率和特异度、灵敏度[7,8]。

1.5 质量控制

Sysmex公司提供的高、中和低值e-Check配套质控品进行室内质控，原装配套试剂。同时参加大连市临床检验中心室间质控，均取得较好的成绩，从而确保了本次研究结果的准确性和可靠性。

1.6 统计学处理

统计学分析用SPSS17.0软件进行。正态分布的计量资料用X±S表示，非正态分布的资料用秩和检验，频数比较用X2检验，组间比较用t检验，用单因素方差进行多组间均数比较，P＜0.05被认为有显著性差异。

2 结果

2.1 新生入学体检标本人工镜检与仪器法WBC分类的比较

新生入学体检标本人工镜检与仪器法检测的中性粒细胞、淋巴细胞和单核细胞的百分率比较，均无显著性差异（P＞0.05）；嗜酸粒细胞、嗜碱粒细胞两组比较，有显著性差异（P＜0.05）（表1）。

表1 75例新生入学体检标本人工镜检与仪器法WBC分类的比较

2.2 门诊患者MO为15%～25%的标本人工镜检与仪器法WBC分类的比较

门诊血常规检查的患者126例中单核细胞占15%～25%的标本43例，用人工镜检和仪器法检测的中性粒细胞、单核细胞和嗜酸粒细胞的百分率比较，均无显著性差异（P＞0.05）；仪器法检测的淋巴细胞和嗜碱粒细胞百分率高于人工镜检法，二者比较有显著性差异（P＜0.05）（表2）。

表2 43例门诊血常规MO为15%～25%的标本人工镜检与仪器法WBC分类的比较

2.3 人工镜检结果与仪器报警的比较

以人工镜检法作为白细胞分类的金标准，对126例门诊患者的血常规结果进行比较。结果显示：Sysmex XN-10[B4]测定的结果报警53例，经人工显微镜复查确定真阴性为64例、真阳性为41例。计算得出：仪器白细胞分类计数的特异度为78.95%，假阳性率为21.05%，灵敏度为82.36%，假阴性率为17.64%（表3）。

表3 人工镜检结果与仪器报警的比较（例数）

3 讨论

据报道，全自动血细胞分析仪目前可以完成每小时150例标本的检测[9]。这一速度对提高检验结果的准确性和疾病的诊断效率、为患者争取黄金治疗时间意义重大，成为各医疗机构检验科必备的检测仪器。Sysmex全自动血细胞分析仪XN-10[B4]，融合了半导体激光、电阻抗和流式细胞等技术。光源采用半导体激光，具有消耗功率小、启动快和寿命长的特点。白细胞计数采用先进的核酸荧光染色和流式激光原理，使白细胞计数不受巨大血小板、血小板簇、难溶红细胞和细胞碎片的干扰。在检测低值白细胞样本时，仪器可自动或人工转换至低值白细胞模式，使白细胞检测颗粒数比普通检测模式增加3～5倍，使检测结果更加准确。这一设备还可以对胸腹水、脑脊液和关节腔积液等体液进行白细胞和红细胞计数。白细胞分类采用的是激光光源、流式原理和细胞核酸荧光染色技术。这些先进技术的运用，在很大程度上降低了检验人员的工作强度。然而，日常工作中尤其在标本量大的新生体检时，对于异常标本，完全依靠仪器检测而忽视白细胞的人工显微镜镜检，会引起疾病的漏诊和误诊。这是因为，血细胞分析仪在进行白细胞分类计数和全血细胞分析时，在原始细胞、幼稚细胞、单核细胞、巨大血小板、有核红细胞和异型淋巴细胞等的形态分辨方面存在缺陷，从而无法对它们进行准确的分类，导致结果的假阴性或假阳性，造成镜检结果与仪器结果的差别大，相关性低。

本研究显示，75例新生入学体检标本人工镜检分类和仪器分类测得的NE、LY和MO的百分率，均无显著性差异，而BA和EO的百分率有显著性差异，这可能是由于BA在大多数标本中所占百分比较低，对分类的结果影响有限造成的。说明在新生体检工作中，白细胞分类的人工镜检和XN-10[B4]检查的结果同样准确可靠。对门诊血常规检查的患者126例中单核细胞占15%～25%的标本43例，分别进行人工镜检分类和仪器分类，测得NE、MO和EO的百分率比较，均无显著性差异（P＞0.05），但是仪器法测得LY和BA的百分率却高于人工镜检法（P＜0.05）。上述结果形成的原因是：MO百分率为15%～25%多见于粒细胞缺乏症恢复期、多发性骨髓瘤和传染性单核细胞增多症等疾病，这类患者标本中的原始、幼稚和异常细胞在溶血素的作用下，其细胞浆颗粒大小、染色质疏松程度和细胞体积等特征均与单核细胞相似，仪器测定时会把这样特点的细胞误认作淋巴细胞[10]。同时，一些特殊疾病如活动性肺结核和急性感染恢复期、长期服用药物等，其细胞表面电荷发生改变，这样的细胞与正常血液标本的细胞相比体积会增大，也是造成上述结果的原因。有报道显示，造成假阴性的细胞常为嗜酸和嗜碱性粒细胞[11,12]。导致假阳性的细胞常有：幼稚白细胞和异型淋巴细胞等。通过与人工镜检分类法比较，得出Sysmex XN-10[B4]白细胞分类计数特异度为78.95%，假阳性率为21.05%，灵敏度为82.36%，假阴性率为17.64%。

综上，用Sysmex全自动血细胞分析仪XN-10[B4]进行白细胞分类测定时，对仪器报警结果应重新采集标本进行复检，尤其对血液病患者和WBC总数异常者，更要进行人工显微镜复检。而人工镜检是血细胞形态学检查的金标准，只有把人工镜检和仪器测定相结合，才能为临床诊断提供准确的检验结果。