丹桔合剂的稳定性研究

孟思思

【中图分类号】R282.1 【文献标识码】A 【文章编号】2095-6851（2018）06--01

丹桔合剂是江苏省名中医谢昌仁主任的经验方。由丹参、橘皮、制首乌、决明子、山楂五味药组成。丹桔合剂通过防治血栓形成和溶解血栓对中风有很好的预防和治疗效果。稳定性是不仅是评价药物制剂质量的重要指标之一，而且是确定药物制剂使用期限的主要依据，这关系到患者的健康及用药安全，故丹桔合剂的稳定性研究有着非常重要的意义。

1 仪器与试药

1.1 仪器

KQ-500型超声波清洗器：昆山市超声仪器有限公司；ZF-2型三用紫外分析仪、TDL-40B型低速大容量离心机：上海安亭电子仪器厂；电子天平：梅特勒-托利多仪器（上海）有限公司；Agilent 1200 infinity series型高效液相色谱仪。

1.2 试药

丹桔合剂由南京市中医院药剂科制剂室自制（批号是：20130114、20130115、20130116）。丹参对照药材：批号120923-201113；丹酚酸B：批号111562-201212；陈皮对照药材：批号120969-201109；橙皮苷：批号110721-201115；决明子对照药材：批号111623-201207；橙黄决明素：批号111900-201202；以上均来自中国药品生物制品检定所。

2 稳定性考察-长期试验方法

长期试验是在接近药品的实际贮存条件下进行，为制订药品的有效期提供依据。本实验主要考察丹桔合剂长期试验中第3个月的稳定性。

3 丹桔合剂稳定性实验应该对下面项目进行考察[1 ]：

3.1 性状：

成品合剂为棕色澄清液体，贮存有摇之易散的沉淀。

3.2 鉴别：

3.2.1 丹参的薄层鉴别：

取本品3ml于离心管中，加6ml甲醇后混匀，超声提取15分钟后，以4500r/min离心10分钟，上清液作供试品溶液；取丹酚酸B对照品，加75%甲醇制成每2g/L的对照品溶液；取丹参对照药材0.2g，加25ml的75%甲醇，加热回流1h，滤过得滤液浓缩至1ml，作丹参对照药材溶液；取3ml丹参的阴性合剂，按供试品法制备法制成阴性溶液。分别吸取以上三种溶液5μl，点在硅胶GF254板上，以甲苯-三氯甲烷-乙酸乙酯-甲醇-甲酸（2：3：4：0.5：2）为展开剂展开，于紫外光灯（254m）下检视。供试品色谱中，在与对照品及对照药材色谱相应的位置上，斑点显相同颜色，阴性制剂无干扰。如图1。

3.2.2 陈皮的薄层鉴别：

取以上供试品溶液作陈皮供试品溶液；取橙皮苷對照品，加甲醇制成饱和溶液，作对照品溶液；取0.3g陈皮对照药材，加10ml甲醇，加热回流20分钟后滤过，取滤液5ml浓缩至1ml，作陈皮对照药材溶液；取3ml陈皮的阴性合剂，按丹参供试品溶液的制备方法制成阴性溶液。分别吸取2μl上述三种溶液，点在硅胶G板上，以乙酸乙酯-甲醇-水-浓氨水（30：5：1：2）为展开剂展开，于紫外光灯（365nm）下检视。供试品色谱中，在与对照药材和对照品色谱相应的位置上，斑点显相同颜色，阴性制剂无干扰。如图2。

3.2.3 决明子的薄层鉴别：

取本品12.5ml于锥形瓶中，加25ml甲醇后混匀，超声提取15分钟后，以4500 r/min离心15分钟，取上清液，置水浴上蒸干后，加20ml水使残渣溶解后加盐酸2ml，置水浴上加热半小时，立即冷却，用乙醚提取2次，每次40ml，合并乙醚液并蒸干，加1ml三氯甲烷使残渣溶解，作供试品溶液；取橙黄决明素对照品，加无水乙醇-乙酸乙酯（2：1）制成1g/L对照品溶液；另取1g决明子对照药材，同法制得对照药材溶液；取12.5ml决明子的阴性合剂，按供试品溶液的制备方法制成阴性溶液。分别吸取2μl上述三种溶液，点在硅胶H板上，以石油醚（30～60℃）-丙酮（2：1）为展开剂展开，供试品色谱中，在与对照药材和对照品色谱相应的位置上，斑点显相同颜色，阴性制剂无干扰，如图3；置氨蒸气中熏后，斑点变为亮黄色，阴性制剂无干扰。如图4

3.3 检查

3.3.1 相对密度 用韦氏比重秤法测丹桔合剂的相对密度[2]，结果见表1。

3.3.2 PH值 用酸度计测丹桔合剂的PH。

3.4.含量测定：

3.4.1 橙皮苷的含量测定：用高效液相色谱法测定。

3.4.2 色谱条件与系统适应性试验 用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；流动相如表2；流速：1.0ml/min；检测波长：284nm；柱温：30℃；进样量：10μl。

3.4.3 对照品溶液的制备 精密称取4.989mg橙皮苷对照品到10ml容量瓶中，以甲醇定容刻度，摇匀，得橙皮苷对照品溶液。

3.4.4 供试品溶液的制备 精密量取0.5ml丹桔合剂后加4.5ml水，再精密加甲醇5ml，混匀；超声15分钟后混匀；以5000r/min离心15分钟，得上清液作供试品溶液。

3.4.5 测定法 分别精密吸取10μl对照品溶液与供试品溶液，注入液相色谱仪，测得结果见表3。

3.5 线性关系考察 取上述对照品溶液，分别稀释成0.01996mg/ml、0.04989mg/ml、0.09978mg/ml、0.24945mg/ml、0.4989mg/ml对照品溶液，分别精密吸取上述浓度的橙皮苷对照品溶液10μl，在以上色谱条件下测定峰面积，结果见表4。

以各对照品溶液的浓度为横坐标X，峰面积为纵坐标Y，进行线性回归，得：Y=16655X+89.954，R≈0.9993，橙皮苷在0.01996mg/ml～0.4989mg/ml范围内线性关系良好，见图5：

3.6 精密度试验 精密吸取10ul橙皮苷对照品溶液，按上述色谱条件连续进样6针，测定峰面积，得橙皮苷的RSD=0.35%（<3%），结果表明在此条件下精密度良好。

3.7 重复性试验

制备供试品液5份，吸取已制备的供试品溶液，进样测定橙皮苷峰面积，得RSD=1.9%（<3%），结果表明此测定方法重复性良好。

3.8 稳定性试验

吸取已制备的供试品溶液，在0、2、4、6、12、18、24h分别进样，测定橙皮苷峰面积，得RSD=0.39%（<3%），结果表明在此条件下样品在24h内稳定。

3.9 加样回收率试验

精密量取已知橙皮苷含量的同一批合剂5份，精密加入等量的橙皮苷对照品，测定橙皮苷峰面积，计算橙皮苷的含量，按以下公式分别计算回收率（应为95%～105%）和平均回收率，结果如表5（橙皮苷），表明此测定方法回收率良好。回收率=（测得量-已知样品量）/加入的标准品量

结论：由以上实验数据可知，在长期试验中，丹桔合剂的性状，相对密度，PH值，有效成分含量（以橙皮苷计算）都有变化，但是都在规定限度以内，因此均符合要求，结果见表6。

5 讨论

薄层色谱在展开过程中也需要注意溶剂的饱和度、温度、湿度。溶剂的饱和度对分离效果影响较大，在饱和情况下，展开时间要比不饱和时的时间短，分离效果好，且可消除边缘效应。

在展开过程中最好保持温度和湿度的恒定，因为这两种因素的改变会影响Rf值和分离效果，降低重现性。

在薄层鉴别中，根据2015版《中国药典》陈皮药材项下鉴别方法选择展开剂，但是结果不是太理想，斑点不是很清晰。后来依据溶剂的极性、溶剂对被分析物的溶解性，以及被分析物的结构，通过查阅大量文献和反复实验，重新选择了展开剂。

确定以乙酸乙酯-甲醇-水-浓氨水（30：5：1：2）为展开剂，结果薄层板上的斑点清晰，阴性制剂无干扰。

参考文献

李文；左科友.四妙颗粒的质量标准[J].中国药师.2010，13（10）：1433-1434

郭琪.血府逐疲口服液稳定性实验研究[J].山东医药，1992，11（4）：39