儿童外周血单个核细胞EB病毒DNA载量检测在病情评估中的临床意义

蔡勉珊 方炳雄 黄丽旋 游丽莎 秦泽鸿 谢 城

1.广东省普宁市人民医院儿科，广东普宁 515300；2.广东省普宁市人民医院检验科，广东普宁 515300

EB 病 毒（Epstein-barr virus， EBV）为 双 链DNA病毒，是一种嗜人B淋巴细胞病毒。EBV感染是儿科比较常见的一类病毒性传染病，感染时，症状轻重不一，多以扁桃体炎、淋巴结肿大、肝脾肿大为主要临床特征[1-2]。儿童多数语言表达困难，增加了EBV感染患儿的诊断难度。临床特征结合实验室辅助检查，有助于病情评估，预测临床转归情况。外周血单个核细胞（Peripheral blood mononuclear cell， PBMC）EB 病毒载量检测，可准确、灵敏地反映患儿EBV感染情况，较早期提示预测病情的程度[3]。

本研究运用荧光定量聚合酶链反应法（Fluorescent quantitative polymerase chain reaction，FQ-PCR）检测儿童PBMC中EBV载量，统计2016年1月～ 2017年12月本院儿科收治的1171例发热患儿， 不同年龄段EBV检测阳性率。

将符合纳入标准的146例EBV阳性患儿，以EBV载量中位数，分为高病毒载量组和低病毒载量组，分析不同组患儿的临床资料和实验室指标。旨在探讨儿童外周血单个核细胞EB病毒DNA载量检测在病情评估中的临床意义，以供临床实践参考。

1 资料与方法

1.1 一般资料

（1）2016年1月～2017年12月本院儿科收治的1171例发热儿童，其中男729例，女442例；年龄0～14岁。（2）146例患儿EBV检测阳性，并且符合纳入标准。根据病毒载量检测结果中位数：1.13×104copy/mL（1.13×104拷贝 /mL），分为高病毒载量组和低病毒载量组。低病毒载量组有73例患儿，其中男49例，女24例，年龄（3.54±2.28）岁；EBV 载 量：6.06×103±1.67×103copy/mL；高病毒载量组有73例患儿，其中男47例，女26例，年龄（3.49±2.57）岁；EBV载量：2.30×105±7.72×105copy/mL。两组患儿年龄和性别比较，差异无统计学意义（P ＞0.05）。

排除标准：（1）证实为肺炎支原体、巨细胞病毒、腺病毒、肝炎病毒、风疹病毒、肠道病毒71型、柯萨奇病毒等病毒感染；（2）有血液系统、免疫系统基础疾病；（3）临床资料或实验室指标不齐全。

1.2 研究方法

采用cobasz 480全自动荧光PCR仪检测发热患儿的外周血单个核细胞EBV载量；采用瑞氏染色法，检测患儿的外周血异常淋巴细胞比例；采用SYSMEX-5000全自动血细胞分析仪检测患儿血常规；采用贝克曼AU5821生化分析仪检测患儿相关生化指标。

1.3 观察指标

（1）检测发热患儿EBV载量，分析不同年龄组的EBV阳性检测率。（2）记录高、低病毒载量组患儿的咳嗽、扁桃体炎、淋巴结肿大、眼睑水肿、肝脏肿大、脾脏肿大等临床特征的发生率。（3）抽取高、低病毒载量组患儿的静脉血置于乙二胺四乙酸二钾（EDTA-K2）抗凝的试管中，瑞氏血细胞染色，显微镜下，计数外周血中200白细胞，统计异常淋巴细胞的比例，同时检查白细胞总数（WBC）、淋巴细胞计数（LYMPH#）、淋巴细胞比例（LYMPH%）、单核细胞计数（MONO#）、单核细胞计数（MONO%）、血红蛋白含量（HGB）和血小板计数（PLT）。（4）抽取高、低病毒载量组患儿的静脉血置于无抗凝剂真空试管中，检查血清中谷丙转氨酶（ALT）、谷草转氨酶（AST）、总胆汁酸（TBA）、乳酸脱氢酶（LD）、乳酸脱氢酶同工酶（LDH）、肌酸激酶同工酶（CKMB）和C-反应蛋白（CRP）水平，比较两组差异；（5）分析高、低病毒载量组患儿热退时间、住院天数等临床转归情况。

1.4 统计学分析

采用SPSS19.0统计学软件多数据进行统计分析，计数资料采用百分率（%），计量资料用（±s）表示，计数资料采用χ2检验比较，正态分布资料采用方差分析，以P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 发热患儿的EBV载量检测结果

1171例发热患儿中，238例患儿EBV检测阳性，总阳性检测率为20.32%。不同年龄段儿童EBV阳性检测率，如表1所示。

发热儿童中，男童为729例，EBV阳性检测率为20.16%；EBV女童为442例，EBV阳性检测率为20.59%，不同性别比较，差异无统计学意义（P＞0.05），如表2所示。

发热患儿中， ≤7岁儿童的EBV阳性检测率为22.06%，＞7岁儿童为8.61%，两组比较，差异有统计学意义（P＜0.05），如表3所示。

933例EBV检测阴性的发热患儿，临床诊断为传染性单核细胞增多症（IM）有5例；238例EBV检测阳性的发热患儿，疾病诊断为IM有23例。EBV检测阳性与IM存在相关性，如表4所示。

表1 不同年龄段儿童EBV阳性检测率

表5 高、低病毒载量组患儿的临床特征[n（%）]

表6 高、低病毒载量组患儿的外周血常规指标

表2 不同性别EBV阳性检测率比较

表3 ≤7岁和＞7岁儿童EBV阳性检测率比较

表4 EBV与IM相关性比较

2.2 高、低病毒载量组患儿的临床特征

EBV高病毒载量组患儿的扁桃体炎、淋巴结肿大发生率比低病毒载量组患儿高，差异有统计学意义 （P＜0.05） 。两组患儿的咳嗽、眼睑水肿、肝脏肿大和脾脏肿大临床特征发生率比较，差异无统计学意义（P＞0.05）。如表5所示。

2.3 高、低病毒载量组患儿外周血常规指标

EBV高病毒载量组患儿的外周血中异常淋巴细胞的比例、淋巴细胞计数（LYMPH#）和淋巴细胞比例（（LYMPH%）均比低病毒载量组患儿高，差异有统计学意义 （P＜0.05） 。

两组患儿的白细胞总数（WBC） 、单核细胞计数（MONO#）、单核细胞计数（MONO%）、血红蛋白含量（HGB）和血小板计数（PLT）比较，差异无统计学意义（P＞0.05）。如表6所示。

2.4 高、低病毒载量组患儿生化指标

EBV高病毒载量组患儿血清中的总胆汁酸（TBA）、乳酸脱氢酶（LD）、乳酸脱氢酶同工酶（LDH）和肌酸激酶同工酶（CK-MB）水平均比低病毒载量组患儿高，差异有统计学意义（P＜0.05）。 两组患儿血清中谷丙转氨酶（ALT）、谷草转氨酶（AST）和C-反应蛋白（CRP）水平比较，差异无统计学意义（P＞0.05）。如表7所示。

表7 高、低病毒载量组患儿生化指标

2.5 高、低病毒载量组患儿临床转归情况

EBV载量高低与临床转归情况相关，高病毒载量组患儿的热退时间和住院天数均比低病毒载量组患儿长，差异有统计学意义 （P＜0.05） 。如表8所示。

表8 高、低病毒载量组患儿临床转归情况（d）

3 讨论

临床上，发热是儿科最常见的首发临床表现。儿童发热的原因，大多为感染引起，其中EBV病毒感染是儿科常见的感染性疾病，临床症状多变，病情轻重不一，评估困难。我国制定EB病毒-IM诊断标准，需要满足发热、咽扁桃体炎、淋巴结肿大，肝脏肿大等临床指标，还需要实验室指标辅助证据[2]。目前多种方法用于检测EBV感染，存在检测率低，假阳性率高等缺点[3]。

牟文凤[4]发现外周血单个核细胞EBV载量检测结果均比血浆DNA和血清学结果阳性率高，该方法更加适合于怀疑EBV感染的婴幼儿及免疫异常患者。选择合理、有效的检测方法，是目前研究的重点。

荧光定量PCR技术是检测EBV-DNA，比较可靠、准确、灵敏的检测技术，能较好地反映患儿的感染情况，根据病毒载量的高低，可作为临床医生判断患儿病情评估的指标[5]。本研究，通过采取患儿外周血于乙二胺四乙酸二钾（EDTA-K2）抗凝管中，用密度梯度离心法分离外周血单个核细胞，使用荧光定量PCR方法，检测患儿外周血单个核细胞EBV-DNA载量。

我国儿童EBV感染以4～6岁年龄段为最高[6]。郑炜琨等[7]经过筛选条件：反复或间断发热≥2周等条件，得出可疑EBV感染患儿阳性检测率为24.08%。洪洁玲[8]发现201例发热患儿，EBV阳性率为18.9%。本研究，儿科1171例发热患儿中，238例患儿外周血单个核细胞的EBV检测阳性，总阳性检测率为20.32%。表明发热患儿中20.32%是由EBV感染或合并感染引起，男童和女童EBV检测阳性率比较，差异无统计学意义（P＞0.05），≤7岁儿童的EBV阳性检测率为22.06%，比＞7岁儿童高（P ＜0.05）。

根据我国IM临床判断标准[2]，本研究中，933例EBV检测阴性的患儿中，有5例患儿符合IM诊断标准；而238例患者EBV检测阳性的患儿，疾病诊断为IM有23例。因此，外周血单个核细胞EBV病毒DNA载量检测，可作为儿童病情评估的临床指标。

中华医学会儿科分会感染学组和全国儿童EB病毒感染协作组报道，儿童非肿瘤性EBV感染疾病主要包括传染性单核细胞增多症（IM），慢性活动性EBV感染（CAEBV）和EBV相关噬血细胞性淋巴组织增生症（EBV-HLH）[2]。

EBV感染临床症状特点和实验室指标结果，要注意鉴别肺炎支原体、巨细胞病毒、肝炎病毒等相关病毒的影响[2]。本研究排除合并支原体、或其他已知的非EB病毒的患儿，符合纳入标准，同时EBV检测阳性的患儿有146例。根据病毒载量检测结果中位数：（1.13×104）copy/mL，分为高病毒载量组和低病毒载量组。

EBV感染患儿存在发热、咽峡炎、扁桃体炎、淋巴结肿大等的临床特征[9]。本研究，高病毒载量组患儿的扁桃体炎发生率为45.21%、淋巴结肿大发生率为50.68%，均比低病毒载量组患儿高。EBV患儿出现外周血异常淋巴细胞比例增加的检查结果[7，10]。徐福胜[11]发现，发热患儿出现血清腺苷酸及异型淋巴细胞比例升高，提示有可能EBV病毒感染。本研究，高病毒载量组患儿的外周血中异常淋巴细胞的比例为6.55%、淋巴细胞计数6.14×109/L和淋巴细胞比例为47.71%，均比低病毒载量组患儿高，差异有统计学意义（P＜0.05）。随着EBV载量的增加，患儿的临床特征更加明显，能在外周血常规指标体现出来。

EBV感染患儿后，异常淋巴细胞及病毒浸润相应脏器，导致全身脏器发生病理学改变，表现出各种临床特征和相应的实验室指标[12-13]。本研究，高病毒载量组患儿血清中的总胆汁酸（TBA）、乳酸脱氢酶（LD）、乳酸脱氢酶同工酶（LDH）和肌酸激酶同工酶（CK-MB）水平均比低病毒载量组患儿高，差异有统计学意义（P＜0.05）。EBV载量增加，患儿的肝功能、心脏功能生化指标水平随之升高，提示脏器受损程度加重。

李海峰[14]发现，干扰素联合更昔洛韦治疗患儿EBV感染比单用更昔洛韦疗效更加显著。本研究，按照指南[2，15]标准治疗EBV感染患儿，高病毒载量组患儿的热退时间为4.67d和住院天数为8.80d，均比低病毒载量组患儿长（P＜0.05）。因此，EBV载量高低在患儿临床转归中，起到重要影响因素。

综上所述，儿童外周血单个核细胞EB病毒DNA载量与患儿的疾病的严重程度成正相关，表现在患儿的临床特征和实验室指标，影响患儿的临床转归情况。因此外周血单个核细胞EB病毒DNA载量检测在儿童病情评估和预后判断有一定的临床意义，可为临床医生的诊疗提供参考。