新型设备组合快速测定唾液中毒品含量

文/陈建立 &宋伦 &郝红元 &姚劲挺 &孙友宝 &黄涛宏

使用岛津ATLAS-USIS自动液液萃取与LCMSMS联用测定唾液中5种毒品含量 // 本文建立了一种使用岛津ATLAS-USIS自动液液萃取装置与岛津超快速三重四极杆液质联用仪LCMS-8045联用测定唾液中甲基苯丙胺、甲卡西酮、3,4-亚甲基二氧甲基苯丙胺、美沙酮和阿普唑仑含量的方法。该方法具有自动化程度高、分析速度快、灵敏度高、重现性好的特点，可用于唾液中这5种毒品含量的测定。

近年来毒品的滥用呈明显增长的趋势，其中，甲基苯丙胺(MAMP)，甲卡西酮，3,4-亚甲基二氧甲基苯丙胺(MDMA)，美沙酮和阿普唑仑属于常见的毒品种类，由于其严重的社会和个人危害性，各国政府已经采取了许多措施来打击吸毒、贩毒等活动。尿液、汗液、唾液、精液及毛发等生物样品均可作为检测的目标，这些样品中的毒品含量检测是确认是否吸毒的重要司法依据，其鉴定结果的准确性至关重要。这些样品基质组成通常比较复杂，干扰成分多，待检测组分含量较低，通常需要对样品进行必要的前处理，常见的前处理方法有固相萃取、固相微萃取、液-液萃取等，其步骤复杂且耗时费力。因此开发自动化程度高、快速、准确、高效的前处理和检测方法具有重要意义。

岛津ATLAS-USIS自动前处理装置可对唾液、尿液、血液等样品自动进行液-液萃取制备样品，复溶后可以进行液质联用分析或气质联用分析，自动化程度高，大量节省人力物力。本文利用岛津ATLAS-USIS自动前处理装置，结合岛津超快速三重四极杆液质联用仪LCMS-8045建立了唾液中5种毒品含量的高自动化、高灵敏度的快速检测方法。

图1 岛津ATLAS-USIS系统（左）和LCMS-8045（右）

实验部分

仪器

本实验使用ATLAS-USIS自动前处理装置及岛津超高效液相色谱仪LC-30A与三重四极杆质谱仪LCMS-8045联用系统（如图1所示）。具体配置为LC-30AD×2输液泵、DGU-20A5在线脱气机、SIL-30AC自动进样器、CTO-30A柱温箱、CBM-20A系统控制器、LCMS-8045三重四极杆质谱仪，LabSolutions Ver. 5.86色谱工作站。Column（2.1 mm I.D.×100 mm L., 2 μm）

流 动 相：A相-0.2%甲酸水溶液，B相-甲醇

流速：0.35 mL/min

柱温：40℃

进样量：10 μL

洗脱方式：梯度洗脱，B相初始浓度为10%, 洗脱程序见表1.

表1 梯度洗脱程序

2.质谱条件

离子化模式： ESI(+)

DL温度 ： 250℃

接口温度： 300℃

加热气：空气 10.0 L/min

加热模块温度：400℃

雾化气：氮气3.0 L/min

干燥气：氮气10.0 L/min

碰撞气：氩气

扫描模式：多反应监测(MRM)

驻留时间：30 ms

MRM参数：见表2

图2 0.5ng/mL标准样品MRM色谱图

表2 MRM优化参数

表3 校准曲线参数（权重1/C2）

表4 检出限和定量限

分析条件

1. 液相条件

色谱柱：Shim-pack GIST C18

标准溶液的配制

将1 mg/mL标准样品（甲醇溶解）储备液以流动相逐级稀释得到浓度分别为 0.01、0.02、0.05、0.10、0.50、1.00、5.00、10.00、50.00ng/mL的标准溶液。

样品前处理方法

（1）取准确体积的1 mg/mL标样储备液，加到空白唾液中，依次配制得到浓度分别为10.00、1.00、0.10ng/mL的基质加标溶液，每个浓度平行取样6份，用ATLAS-USIS自动前处理装置的MainSeq 2程序进行前处理，将前处理得到的样品用流动相定容到5 mL，0.22 μm滤膜过滤后上机分析（注：ATLAS-USIS的MainSeq 2程序处理样品时，取3 mL唾液，用4 mL乙酸乙酯萃取，然后取3 mL上清液进行烘干处理，最后手动用流动相将烘干剩余物定容到5 mL）；

（2）取准确体积的1 mg/mL标样储备液，加到经ATLAS-USIS处理过的空白唾液中，依次配制得到浓度分别为10.00、1.00、0.10 ng/mL的基质加标溶液，0.22 μm滤膜过滤后上机分析以考察基质效应。

图3 校准曲线

结果与讨论

标准样品的MRM色谱图

标准样品的MRM色谱图如图2所示。

线性范围

将浓度为 0.02、0.05、0.10、0.20、0.50、1.00、2.00、5.00、10.00、20.00、50.00 ng/mL5 种目标物标准工作液，按1.2中的分析条件上机分析，以浓度为横坐标，峰面积为纵坐标，外标法建立校准曲线，结果如图3所示，线性方程、线性范围和相关系数见表3。

检出限和定量限

对浓度为0.02 ng/mL溶液进样分析，以ASTM法计算噪声，以噪声的3倍作为最低检出限（即S/N=3，LOD表示），以噪声的10倍作为最低定量限（即S/N=10，LOQ表示），则仪器对5种目标物的LOD和LOQ结果如表4所示。

精密度实验

将ATLAS-USIS前处理装置处理得到的样品用1.2的方法进行分析，考察仪器的重复性，目标物在不同浓度下的保留时间和峰面积的相对标准偏差分别在0.02～0.13% 和 0.73～7.84% 之 间，结果表明仪器具有良好的精密度如表5所示。

表5 ATLAS-USIS处理样品的保留时间和峰面积重复性结果（n=6）

表6 ATLAS-USIS前处理装置回收率结果

回收率实验

在空白唾液中添加5种目标物，按照1.4-(2)用ATLAS-USIS对样品处理后进样分析，计算回收率，结果如表6所示，在不同浓度下5种目标物的回收率在68.9～93.1%之间。

基质效应

分别配制低、中、高三份不同浓度的标准溶液和样品加标液，以相同浓度样品加标液所得峰面积同标准溶液所得峰面积的比值换算成百分比作为基质效应进行考察。实验结果见表7，由表7可知在不同浓度下5种目标物基质效应结果在90.2～113.7%之间，表明基质效应对目标物检测的干扰较小。

表7 基质效应考察

结论

本文建立了一种使用ATLASUSIS自动前处理装置及岛津超高效液相色谱仪LC-30A和三重四极杆质谱仪LCMS-8045联用测定唾液中甲基苯丙胺(MAMP)、甲卡西酮、3,4-亚甲基二氧甲基苯丙胺(MDMA)、美沙酮和阿普唑仑含量的方法。以外标法定量，校准曲线线性良好，线性相关系数不低于0.9979。对低、中、高不同浓度的样品平行测试6次，保留时间和峰面积的相对标准偏差分别在0.02～0.13%和0.73～7.84%之间，仪器精密度良好，检出限和定量限分别为0.001-0.006 ng/mL和0.003-0.020 ng/mL。该方法具有自动化程度高、分析速度快、灵敏度高、重现性好的特点，可用于唾液中这5种毒品含量的测定。