不同禽群免疫H5+H7N9二价苗抗体比较

陈肇源，陈盛文，万庆文，陈桂霞

（1.广东省东莞市万江农业技术服务中心，广东 东莞 523050；2.东莞市长安镇农业技术服务中心，广东 东莞 523846）

禽流感是由禽流感病毒（avian influenza virus，AIV）引起的高度接触性传染病。其中，H7N9亚型流感是A型流感中的一种，2013年3月31日首先在中国上海和安徽发现了3例人感染H7N9流感病例。为遏制H7N9流感疫情，2017年7月开始，东莞市进行了H5+H7N9二价苗试点免疫，以掌握疫苗对家禽的保护效果和抗体水平消涨情况。

1 材料与方法

1.1 样品采集

来自东莞市2个种鸡场、2个肉鸡场、1个肉鹅场。在免疫当天(0d)以翅静脉采血，采集全血样品2mL，以3500r/min离心15min分离获得待检血清，-20℃保存备检作为免疫前对比。用哈尔滨维科生物技术开发公司提供的重组禽流感病毒（H5+H7）二价灭活疫苗(H5N1 Re-8株+H7N9 H7-Re1株，批号为20180603)免疫21d后，采集血清待检。

1.2 试剂与方法

表1 不同禽群免疫21d后H5N1 Re-8株抗体水平比较

表2 不同禽群免疫21d后H7N9 H7-Re1株抗体水平比较

1.2.1 1%鸡红细胞悬液

采集实验室饲养的3只禽流感和新城疫非免疫的健康公鸡的血液与阿氏液等体积混合，用pH值7.2的0.01mol/L PBS液洗涤3次，每次以1000r/min离心10min，洗涤后用PBS液配成体积分数1%鸡红细胞悬液，4℃保存备用。

1.2.2 检测试剂

抗体检测试剂禽流感H5N1 Re-8株和H7N9 H7-Re1株抗原及阳性血清，由中国农业科学院哈尔滨兽医研究所提供。

1.2.3 主要耗材和仪器

96孔“V”型反应板，离心机，8道移液器，微量震荡器。

1.2.4 检测方法

按照《高致病性禽流感诊断技术》(GB/T18936-2003)规定的血凝与血凝抑制方法操作。以完全抑制4单位抗原的血清最高稀释倍数作为HI的滴度。HI效价小于或等于31og2判阴性，HI效价大于或等于41og2判阳性,判定为抗体合格。

2 结 果（见表1.2）

2.1 种鸡场群体抗体水平

两个种鸡场免疫前H5N1 Re-8株整体抗体水平为100%，H7N9 H7-Re1株抗体水平为24.14%，免疫21d后，H5N1 Re-8株为100%，H7N9 H7-Re1株为91.38%。

2.2 肉鸡场群体抗体水平

2个肉鸡场免疫前H5N1 Re-8株整体抗体水平为96.67%，H7N9 H7-Re1株抗体水平为0，免疫21d后，H5N1 Re-8株为100%，H7N9 H7-Re1株为78.57%。

2.3 肉鹅场群体抗体水平

免疫前H5N1 Re-8株整体抗体水平为96.15%，H7N9 H7-Re1株抗体水平为 0，免疫 21d后，H5N1 Re-8株为100%，H7N9 H7-Re1株为96.43%。

3 讨论

3.1 试验禽在免疫H5+H7N9二价苗前已有免疫H5亚型疫苗的基础，在免疫该二价苗后H5N1 Re-8株抗体水平基本未受到H7N9 H7-Re1株的影响，同时仍有较大增幅，抗体阳性率均达到100%。

3.2 试验禽在免疫后，H7N9 H7-Re1株抗体水平基本能达到70%以上，甚至95%以上，证明该二价苗在H7N9 H7-Re1株上有较好的保护力，肉鸡场A抗体为69.23%，送样的15份血清中有2份发生溶血，对检测结果造成了一定影响。另外，种鸡场在免疫前已检到一定的抗体，据调查，种鸡场A和种鸡场B在农业部试点免疫H5+H7N9二价苗前已私下购买使用其他厂家的H5+H7N9二价苗，也不排除存在其他可能因素，目前，该两个种鸡场已因畜禽养殖污染整治被清理，当时抽检的鸡群也已宰杀销售，具体原因暂未能查明。

3.3 肉鹅场在免疫一次H5+H7N9二价苗后，抗体水平能够达到96.43%，说明H7N9 H7-Re1株对水禽也能产生明显的免疫应答反应，这和相关研究也是相吻合的。