脑得康口服液对脑卒中后昏迷患者8-iso-PGF2α及Apelin-13蛋白水平的影响

金延飞 范静静 宋德文 徐增良

(胶州市人民医院神经外科，山东 胶州 266300)

脑卒中患者常在术后出现昏迷或意识障碍，大脑及神经功能受损，严重影响预后〔1〕。Apelin-13蛋白首次于牛胃分泌物中提取，在人体中枢神经系统中分布广泛〔2〕。据报道〔3〕，Apelin-13蛋白水平与缺血所致的大脑损伤存在相关性。此外，由于脑卒中患者在血供恢复后会诱导体内氧化应激反应。异前列腺素(8-iso-PG)F2α为近年来发现的新的氧化应激反应因子，能够反映体内氧化应激反应水平〔4〕。为进一步探讨脑得康口服液恢复神经功能的机制，本研究对不同组脑卒中患者治疗前后血清8-iso-PGF2α及Apelin-13蛋白水平进行监测，旨在为临床治疗提供参考。

1 对象和方法

1.1研究对象 选取2014年8月至2016年8月在胶州市人民医院就诊的脑卒中后昏迷患者102例，其中男 58例,女 44例，平均年龄(53.5 ±11.4)岁。诊断标准参照1996年中华神经学会和中华神经外科学会制定的《各类脑血管疾病诊断要点》〔5〕：(1)首次出现脑卒中；(2)从发病至入院治疗时间不超过10 h；(3)术后患者间清醒后再次昏迷，或昏迷不醒；(4)无言语能力或言语不清；(5)大小便失禁；(6)脑卒中量表(NIHSS)评分为4～11分，格拉斯哥昏迷量表(GCS)评分为5～11分；(7)对本研究知情，且自愿签署知情同意书。开始试验前对患者一般生命体征等进行检查，排除有严重颅内出血、有恶性肿瘤、严重血液系统疾病、感染性疾病、心力衰竭以及重大手术史患者。

采用随机分组方法将患者分为观察组与对照组，每组患者51例。对照组男29例，女 22 例； 年龄41～76 岁，平均(52.7 ± 7.1) 岁；NIHSS 评分(13.7 ± 1.1)分，GCS 评分(9.3 ± 2.7)分。观察组男30例，女21 例； 年龄42 ～ 74岁，平均(54.8 ± 8.4) 岁；NIHSS 评分(13.5 ± 1.3)分，GCS 评分(9.5 ± 2.4)分。各组中性别、年龄、NIHSS 评分、GCS 评分等差异均无统计学意义(P>0.05)，具有可比性。以上研究经医院伦理委员会批准。

1.2研究方法 两组患者均采用术后基础治疗，主要以控制病情发展，改善脑血管循环、预防术后感染为治疗目的。对照组在手术后24 h内，基础治疗外，静脉滴注浓度为16 mg/L的盐酸纳洛酮注射液(厂家：北京华素制药股份有限公司，批号：090021)。配置方法为：一支4.0 mg盐酸纳洛酮注射液溶解至250 ml 5%葡萄糖溶液内。1次/d，以7 d为1个疗程，在患者接受4个疗程治疗后对各指标进行检测。

观察组患者在基础治疗上采用院内自制脑得康口服液进行治疗。该方组成：生地30 g，黄连15 g，夏枯草15 g，赤芍30 g，当归15 g，地龙10 g，川芎15 g，人参10 g，钩藤15 g，石菖蒲15 g，伸筋草15 g，僵蚕15 g，冰片0.3 g。患者每日一剂，水煎至200 ml，每次服用100 ml，2次/d。以7 d为1个疗程，在患者接受4个疗程治疗后对各指标进行检测。

1.3评价方法 对所有患者入院时及治疗4个疗程后以下各指标进行评价。

(1)脑卒中治疗及昏迷情况评价：采用NIHSS进行评分。主要对患者神经功能包括意识水平、凝视、面瘫、上下肢体运动等的15个项目进行考察，并记录各组患者不同时间段NIHSS评分情况。昏迷情况包括神经功能和意识损伤程度采用GCS评分评价。

(2)运动能力评价：采用 Fugl-Meyer(FMA)法〔6〕对患者治疗前以的运动功能进行评估，满分100分，对各部位运动能力进行打分，患者对测评的运动完成情况越好分值越高，上肢最高占总分66%，下肢占总分34%，其中上肢的评价包括对患者上肢反射活动、屈肌共同运动、伸肌共同运动、分离运动以及手触腰椎运动等评价，下肢评价则是对患者膝关节、髋关节等进行下肢反射活动、屈肌共同运动、伸肌共同运动、分离运动等评价。

(3)血清指标检测：于患者晨醒10 min取3 ml静脉血，3 000 r/min，离心15 min，离心半径10 cm，获得血清，采用ELISA法测定8-iso-PGF2α及Apelin-13蛋白。8-iso-PGF2α及Apelin-13蛋白试剂盒购置于上海凯基生物科技有限公司。具体操作步骤依照说明书进行：96孔空白微孔板，加入浓度为0.8 μg/ml 的8-iso-PGF2α包被抗体(或Apelin-13蛋白)包被过夜后用0.1% PBS洗液洗涤3次；加入1% BSA封闭液封闭1 h后再用PBS清洗3次。加入标准品或样品血清，37℃孵育30 min，PBS清洗酶标板；加入0.4 μg/ml 8-iso-PGF2α(或Apelin-13蛋白)检测抗体,37℃孵育120 min，PBS清洗液清洗3次后，加入1∶200稀释的链酶亲和素的辣根过氧化物酶，37℃孵育30 min，PBS清洗液清洗3次；用四甲基联苯胺室温避光显色20 min后，采用1 mol/L的硫酸终止液终止反应；于酶标仪450 nm下检测。

1.4统计学方法 应用SPSS19.0统计软件行t检验。

2 结 果

2.1两组NIHSS及GCS评分比较 治疗前两组患者NIHSS及GCS评分比较差异无统计学意义(P>0.05)。治疗后两组患者NIHSS评分明显下降，GCS评分明显升高，与治疗前相比差异均有统计学意义(均P<0.05)。观察组NIHSS评分明显低于对照组，GCS评分明显高于对照组(P<0.05)。见表1。

表1 两组NIHSS及GCS评分比较分,n=51)

2.2两组患者各阶段运动功能评分比较 治疗前两组患者上下肢运动能力评分指标差异无统计学意义(P>0.05)。治疗后两组患者上下肢运动能力评分均明显提高，与治疗前相比差异均有统计学意义(均P<0.05)。观察组上下肢运动能力评分明显高于对照组(P<0.05)。见表2。

表2 两组患者各阶段运动功能评分比较分，n=51)

2.3患者治疗前后8-iso-PGF2α及Apelin-13蛋白变化 治疗前，两组患者血清中8-iso-PGF2α及Apelin-13蛋白水平差异无统计学意义(P>0.05)，经不同方法治疗后，两组8-iso-PGF2α较治疗前显著降低(P<0.05)，Apelin-13蛋白水平较治疗前显著升高(P<0.05)，且观察组8-iso-PGF2α水平明显低于对照组，Apelin-13蛋白水平明显高于对照组(P<0.05)。见表3。

表3 两组患者8-iso-PGF2α及Apelin-13蛋白变化比较

3 讨 论

本研究中采用的脑得康口服液中生地为君药，有清热凉血、生津养阴之功效。《千金要方》中曾指出，“内有瘀血”者应以生地水煎，分三次服用。此外，方剂中川芎、僵蚕与地龙又能息风止痉，祛风止痛，行血中之气。血通则脉通，三者合用进而提高药材活血补气疗效〔7〕。当归可补血活血，与川芎、僵蚕、地龙的行血中之气相辅相成。夏枯草、钩藤主治肝火上升或肝阳所致的头晕目眩，二者合用可协同作用治疗肝阳上亢及血热上涌。此外，黄连的泻火解毒、苦寒泄降之效更能有助于祛除肝火。石菖蒲主化痰湿、开窍闭，对因痰湿引起的蒙闭心窍症效果显著。人参为滋补药材，除了可以安神益智，还能够提高人体免疫力，对患者具有补气补中之功效。故脑得康口服液全方诸药合用，共奏活血行气，止痉定惊，平息肝阳，开窍醒脑之效。本研究提示观察组患者治疗后脑部神经功能、运动能力及昏迷程度较治疗前明显改善，且改善程度明显高于对照组。

进一步探讨脑得康口服液作用机制后发现，脑得康口服液可能通过下调8-iso-PGF2α水平，上调Apelin-13蛋白水平发挥疗效。由于8-iso-PGF2α为评价氧化应激状态指标，当机体氧化应激反应系统受到激发时，体内8-iso-PGF2α水平就会随之上升〔8〕。而脑卒中患者恢复血供时，其体内氧化应激系统得到激活，进而触发了8-iso-PGF2α的生成，破坏脑部神经细胞。人参中人参皂苷能够有效清除氧化自由基，抑制高氧化状态及氧化应激反应，进而发挥降低8-iso-PGF2α水平的作用，有效改善脑部神经〔9〕。Apelin-13蛋白与缺血性脑卒中的发生发展关系密切。据报道〔10〕，动脉闭塞的小鼠脑室内注射不同剂量Apelin-13蛋白，小鼠脑梗死面积降低程度不同，其中脑梗死面积随着注射剂量的提高而降低。说明Apelin-13蛋白有助于缓解脑梗死面积。Yang等〔11〕发现，脑卒中患者体内Apelin-13蛋白水平影响患者预后。Apelin-13蛋白能够对脑卒中患者的脑部神经细胞起到保护作用；Apelin-13蛋白水平高，患者预后好。本研究显示，自制的脑得康口服液有提高Apelin-13蛋白水平的作用。进一步证实脑得康口服液中地黄、人参、川芎中成分能够上调室旁核小细胞Apelin受体mRNA表达，进而提高体内Apelin-13蛋白水平，发挥脑神经保护作用〔12〕。