丁香枝枯病病原菌的分离和测定

杨小萌

(山西省水利经济事业管理中心,山西 太原 030002)

紫丁香(SyringaoblateLindl.)，木樨科丁香属落叶灌木或小乔木，高达5 m，枝条粗壮无毛。叶广卵型，宽可达5 cm～10 cm，通常宽大于长；先端锐尖，基部心型或截形，全缘。圆锥花序，长6 cm～15 cm；花冠白色或紫色，先端4裂，开展；雄蕊生于花筒中部或中上部。蒴果长圆形，顶端尖，平滑。花期4月至5月，果期9月。丁香抗病性较强，常见病害有花瓣斑病、白粉病、炭疽病和枝枯病。笔者对山西农业大学校园内的紫丁香进行了调查，发现枝枯病发病率为30%.枝枯病病原菌侵染丁香后形成枯枝，枯死段有黑褐色微突起小点，感病枝与健康枝之间有明显的分界线，感染部位以上全部枯死。此类病原菌在病部越冬，降雨多的年份易发病。

1 材料与方法

1.1 研究地概况

研究地位于山西省中部的晋中市，地理坐标东经111°25′～114°05′，北纬36°40′～38°06′.东依太行山与河北省比邻，西傍汾河水与吕梁地区搭界，东北与阳泉相连，西北距太原25 km，东南、西南分别与长治市、临汾市接壤。市界总长度809.2 km，东西最宽处约165 km，南北最长处约128 km.海拔1 000 m～2 500 m.属温带大陆性季风气候，年平均气温9.8 ℃，1月均温-6 ℃，7月均温23 ℃.年均降水量405 mm～573 mm，平均无霜期150 d.

1.2 标本采集

选择山西农业大学校园内的紫丁香，用剪刀在病害部分与健康部分的交界处剪取一小段作为试验标本。

1.3 样品处理

采集好标本后，制作PDA培养基，同时为病原菌的分离准备平面培养基。取6个无菌培养皿，分别标计：酒精—水—升汞—无菌水1—无菌水2—无菌水3，并放入相应的溶液。依次放入灭过菌的超净工作台中。

1.3.1 取材

1)将标本上的病害部分切成4节，每节2 mm.

2)将标本病害部分和健康部分交界处切成8节，每节2 mm.

1.3.2 病原菌分离

取1个培养皿，将病害部分的4节标本灭菌3次后，呈对角线接种到平面培养基上，如图1所示。之后将培养皿倒置，在培养皿背面做标记DX-1.

图1 标本放置

将病害部分和健康部分交界处切下的8节标本用同样的方法接种到另外2个培养基上，标记为DX-2，DX-3.

将DX-1，DX-2，DX-3置入生化培养箱中，盖上报纸遮光，3 d后长出灰绿色绒毛状菌落。7 d后，3个培养基中的菌丝覆盖了整个培养基。之后对其进行纯化，让每1个培养基上只生长1种菌落。

通过培养对比，选取具有代表性的DX-2进行观测。每天下午4点对DX-2培养皿中菌落的生长量进行测量，通过计算菌落平均直径体现菌落的生长速度，见图2.

图2 菌落直径

1.4 病原菌的观察与测量

1.4.1 显微标本的制作

将DX-2白色菌落中灰黑色部分挑出一小块放到载玻片上的colley试剂中，盖上盖玻片，然后在标定了刻度的显微镜下观察菌丝和孢子的性状，并测量孢子的大小和菌丝的粗度。

1.4.2 病原菌孢子的测量

052028号显微镜目镜测微尺在10倍物镜下刻度为6.5 μm，40倍物镜下刻度为1.6 μm.在40倍物镜下测量的20个孢子的大小如表1.

表1 孢子测量数据 μm

40倍物镜下10个菌丝菌粗的测量结果见表2.

表2 菌丝测量数据 μm

病原菌孢子长与宽、菌丝粗的平均值、标准差、标准误的计算方法如下。

病原菌孢子长与宽的平均值分别为16.48 μm，10.7 μm，病原菌菌丝粗度的平均值为4.20 μm；病原菌孢子长与宽的标准差分别为5.2 μm，2.0 μm，病原菌菌丝粗度的标准差为0.82 μm；病原菌孢子长与宽的标准误分别为1.2 μm，0.45 μm，病原菌菌丝粗度的标准误为0.26 μm；病原菌孢子长与宽的变异范围分别为11.28 μm～20.00 μm，8.70 μm～12.08 μm，病原菌菌丝粗度的变异范围为3.33 μm～4.87 μm；孢子的大小为(11.28～20.00)μm×(8.70～12.08)μm.

2 菌种鉴定

根据《真菌鉴定手册》记载，细交链孢霉的形态特征为：分生孢子梗直立，分枝或不分枝，淡榄褐色至绿褐色，有屈曲，顶端长扩大而具有多个孢子痕；分生孢子形成长达10个左右孢子所组成的孢子链，孢子有喙或无喙，形状变化极大，椭圆形、卵形，有横隔膜、纵隔膜(7.0～70.5)μm×(6.0～22.5)μm，喙大(1.0～58.5)μm×(1.5～7.5)μm.此菌的寄生性一般不强，但寄主范围很广。

在载玻片上观察到的病原菌形态特征为：分生孢子梗淡榄褐色，分枝，顶端长扩大而具有多个孢子痕，形状椭圆形、卵形，有横隔膜，纵隔膜，孢子有喙或无喙。根据《真菌鉴定手册》记载，可以确定分离出来的病原菌为细交链孢霉(AlternariatenuisNees)，属半知菌亚门丛梗孢目交链孢霉属(AlternariaNeesexWallr)，是引起枝枯病的病原菌。

3 结论与讨论

笔者只对校园内的紫丁香进行了调查，不能准确反映出晋中市丁香的整体发病情况。作者所查阅的资料显示，细交链孢霉(AlternariatenuisNees)很可能是引起丁香枝枯病的病原菌。但要确定还应该在健康植株上进行感病试验。在生产实践中，防治方法建议如下：

1)发现病枝及时剪除烧毁，以防病原菌传播。

2)加强栽培管理，提高植株抗病能力，尽量避免各种机械创伤。剪口可用1%硫酸铜溶液消毒，再涂以160倍等量式波尔多液。

3)药剂防治。休眠期可喷洒3～5波美度石硫合剂，生长期可喷洒160倍等量式波尔多液、70%甲基托布津可湿性粉剂500倍～1 000倍液等。着重喷洒枝干，预防病菌侵染。