烟碱对脂多糖诱导的孕鼠胎儿生长受限的保护作用研究

鲍俊杰 刘媛媛 兰天云 袁理 张国正 刘慧姝

胎儿生长受限(FGR)是指胎儿体质量低于其孕龄平均体质量第10百分位数或低于其孕龄平均体质量的2个标准差，是严重危害胎儿生存质量的产科并发症。FGR增加胎儿围生期缺氧、窒息、酸中毒等风险，其围生儿病死率为正常胎儿的4～6倍，约占我国围生儿死亡总数的40%[1]。FGR患儿体格、智力发育均比正常胎儿慢，其成年后则易发生心血管、COPD、肾脏和内分泌功能障碍等疾病[2]。虽然FGR的病因复杂多样，但胎盘作为介于胎儿与母体之间的重要器官，在其发生、发展中无疑起着重要的作用[3]。本研究通过脂多糖的腹腔注射诱导孕鼠FGR，并继而探讨烟碱在减少脂多糖引起的胎盘病理损伤及保护胎儿生长中的作用，现报告如下。

对象与方法

一、实验动物

SPF级Sprague Dawley(SD)大鼠(10～12周龄，200～240 g)， 购于广东省实验动物中心，自由摄食及饮水，光照时间为上午7点至下午7点， 室温23～26 ℃，相对湿度30%～80%，定期紫外线消毒，通风良好。动物实验遵循相关伦理原则及动物福利法。

二、实验方法

1.动物的分组与处理

SD大鼠隔离检疫并适应性喂养1周后按照雌雄小鼠4∶1合笼，次晨阴道涂片，镜检下发现精子则标记为妊娠第1日。随机选择24只孕鼠，按随机数字表法分为4组： 脂多糖组，于妊娠第16日腹腔注射脂多糖(Sigma Aldrich，25 μg/kg，溶于0.3 ml生理盐水)；脂多糖+烟碱组，于妊娠第14、15日皮下注射烟碱[Sigma Aldrich，1 mg/(kg·d)，溶于0.3 ml生理盐水]进行预处理，再于妊娠第16日腹腔注射脂多糖；正常妊娠对照组，分别于相同时间点注射生理盐水；烟碱对照组，仅第14、15日皮下注射烟碱。

2.胎儿结局评估

于妊娠第18日将各组大鼠麻醉处死，观察记录脂多糖和(或)烟碱对胚胎吸收率、成活胎儿数量及体质量等的影响。无胚胎、仅剩残余胎盘组织或肉眼观为一凝血块者为胚胎吸收，胚胎吸收率=被吸收胚胎个数/(被吸收胚胎个数+未被吸收胚胎个数)×100%。

3.胎盘重量及病理评估

收集妊娠第18日的胎盘，称重并记录后，于中央纵切，10%甲醛溶液固定，石蜡包埋，4 μm厚度切片后进行苏木素-伊红(HE)染色，评估胎盘病理改变。

三、统计学处理

结 果

一、脂多糖及烟碱对SD大鼠胚胎吸收率及活胎数量的影响

与正常妊娠对照组相比，SD大鼠脂多糖组胚胎吸收率增加(P<0.008)，成活胎儿数减少(P<0.008)；与脂多糖组相比，脂多糖+烟碱组成活胎儿数增加(P<0.008)；脂多糖+烟碱处理组成活胎儿数与正常妊娠对照组及烟碱对照组比较差异均无统计学意义(P均>0.008)，见表1。

二、脂多糖及烟碱对妊娠第18日孕鼠胎儿体质量的影响

妊娠第18日脂多糖组的胎儿体质量低于正常妊娠对照组(P<0.01)， 且低于正常妊娠对照组胎儿体质量第10百分位数，即诱导了孕SD大鼠FGR；而脂多糖+烟碱组胎儿体质量降低有明显改善，与脂多糖组比较差异有统计学意义(P<0.01)，见表1。

三、脂多糖及烟碱对SD大鼠胎盘质量及胎盘病理的影响

1.胎盘质量

妊娠第18日脂多糖组孕鼠的胎盘质量低于正常妊娠对照组(P<0.01)，其余组间比较差异无统计学意义(P均>0.05)，见表1。

2.HE染色结果

脂多糖组孕鼠胎盘出现了明显的病理改变，包括炎性细胞在发育不良的绒毛间的浸润、绒毛间隙的减少及绒毛血管的减少，炎性细胞在蜕膜的浸润，胎膜的炎性坏死；在正常妊娠对照组、烟碱对照组和脂多糖+烟碱组均未发现胎盘组织结构的损伤及大量炎性细胞的浸润，见图1。

表1 不同组别SD大鼠胎儿结局及胎盘质量的比较

注：与脂多糖组比较，aP<0.008，bP<0.01

图1 脂多糖及烟碱对SD大鼠胎盘病理的影响(HE染色)

讨 论

FGR是产科常见的并发症之一，也是围生儿死亡的第二大原因，其近期可增加胎儿围生期缺氧、窒息、酸中毒等风险，远期将影响神经行为发育，并增加成年疾病如心血管疾病、代谢紊乱综合征、肥胖等疾病的发生风险[4-5]。FGR的病因复杂多样，胎盘因素在其中起重要作用[1]。

本研究参照其他研究组的方法，通过向孕SD大鼠腹腔注射脂多糖建立了炎性诱导的FGR模型[6]。结果显示，伴随着胎盘质量及胎儿体质量的减轻、活胎数量的减少，胎盘组织存在着诸如炎性细胞浸润、绒毛间隙减少和绒毛血管减少等病理改变。胎盘尤其是胎盘末梢绒毛是母胎间进行物质和气体交换的重要场所，绒毛血管的减少影响着胎盘自身的正常发育和营养物质自母体向胎儿的传输，绒毛间隙的减少和炎性细胞对正常胎盘组织结构的破坏意味着母胎营养物质交换面积的减少及交换效率的降低。这些胎盘的病理改变无疑成为导致胎儿氧和营养供应不足而发生FGR的重要原因[7-8]。

烟碱，又名尼古丁，作为一种存在于多种植物(如烟叶、番茄、枸杞子等)的生物碱，国内外研究显示其作为胆碱能抗炎通路的激动剂在败血症、自身免疫性关节炎、心血管疾病、多发性硬化病及缺血再灌注损伤等多种疾病中发挥着重要的抗炎作用[9-10]。

本研究运用烟碱对孕鼠进行预处理，继而再给予脂多糖腹腔注射，探讨烟碱对脂多糖诱导FGR的保护作用。结果显示，烟碱预处理虽然未能增加胎盘质量，但是可能通过激活胆碱能抗炎通路保护了胎盘组织结构免受脂多糖造成的严重炎性病理损伤，从而保证胎盘正常的分泌及营养输送等功能，保护胎儿的正常生长，使脂多糖处理的孕鼠活胎数量及胎儿体质量都得到明显改善。本研究为炎性诱导FGR的防治提供新思路，而烟碱对胎儿出生后行为学等的影响有待进一步的研究探讨。