痰热清对内毒素诱导致急性肺损伤肺微血管通透性的保护作用

肖仲祥，郑海珍，赵乐萍

(乐清市人民医院 药剂科，浙江 乐清 325600)

急性肺损伤(acute lung injury, ALI)是以肺内弥漫性炎症细胞浸润、肺组织循环障碍、肺毛细血管通透性增加以及低氧血症为特征的常见临床综合征，可迅速发展为急性呼吸窘迫综合征(acute respiratory distress syndrome, ARDS)[1]。由于急性肺损伤的高病死率和致病因素的多样性，一直以来都是研究的热点与难点。目前临床上治疗急性肺损伤主要依赖于支持性治疗，治疗手段主要包括采用抗生素、肾上腺皮质激素、机械通气及吸氧等措施[2]，寻找更安全有效的ALI治疗和预防药物是临床急危重病研究领域急需解决的难题[3]。痰热清注射液具有清热、解毒和化痰的功效，是一种纯中药注射液，由黄岑、金银花、熊胆粉、山羊角、连翘制备而成[4]。本研究采用内毒素建立急性肺损伤模型，通过观察痰热清注射液对大鼠肺微血管通透性和肺含水量的变化，分析痰热清注射液对内毒素所致大鼠肺损伤血管通透性的影响。

1　材料与方法

1.1动物96只成年健康清洁级SD大鼠，雄性，体重250±50 g，由温州医科大学动物实验中心提供。动物实验前适应性喂养2～3 d，实验前8 h禁食。

1.2主要试剂与仪器痰热清注射液(10 mL/支，上海凯宝药业股份有限公司)，甲基泼尼松龙注射液(40 mg/瓶，辉瑞投资有限公司)，大肠杆菌内毒素(美国Sigma公司)，伊文思蓝(evans blue，EB)(美国Sigma公司)，甲酰胺(美国Amresco公司)，KH-45BA实验用烤箱(吉首市中诚制药机械厂)，UV-2802H型紫外分光光度计(日本岛津公司)，AB204-A分析天平(梅特勒-托利多上海仪器公司)。

1.3大鼠ALI模型的制备[5]腹腔注射10 %水合氯醛(5 mL/kg)麻醉大鼠后，经尾静脉注射内毒素(6 mL/kg)，然后禁食12 h，自由饮水。

1.4分组及给药将96只SD大鼠随机分为四组：正常对照组、内毒素组、痰热清组和甲基泼尼松龙组，每组各24只。除正常对照组外，其余各组均建立ALI模型。正常对照组：尾静脉注射6 mL/kg生理盐水后腹腔注射10 mL/kg生理盐水；内毒素组：尾静脉注射内毒素建模后立即腹腔注射10 mL/kg生理盐水；痰热清组：尾静脉注射内毒素建模后后立即腹腔注射痰热清注射液2.5 mL/kg；甲基泼尼松龙组：尾静脉注射内毒素建模后后立即腹腔注射甲基泼尼松龙20 mg/kg。各组加生理盐水配齐至10 mL/kg进行腹腔注射。每组24只大鼠分别于术后2、6、12 h分批处死，每个时间点各8只，取右肺组织测定肺微血管通透性，左肺组织测定肺含水量。

1.5肺微血管通透性测定15 mg/mL EB在各时间点前20 min经舌下静脉注射(50 mg/kg)，注射EB后15min由颈动脉处放血处死动物，打开胸腔并经左心室灌注300 mL生理盐水将血液及器官中残存的EB冲出。然后取肺组织，定位称取右下肺叶组织0.1～0.3 g，剪去周围组织后放入甲酰胺内(甲酰胺的用量按照组织重量给予，1 mL/100 mg)，置37℃温箱中温育72 h，待肺组织中的色素全部浸出以后取出，4 000 r/min离心5 min后取上清液，采用分光光度计选择波长为620 nm进行比色，根据标准曲线计算组织中EB含量，EB含量越高代表肺微血管通透性越大。

1.6肺含水量检测在各时间点处死大鼠后，准确称量整个左肺组织的湿重，放入90 ℃烤箱中72 h后称量干重，计算含水量。肺组织含水量(%)=(湿重-干重)湿重×100%。

1.7统计学分析应用SPSS19.0统计软件处理数据，多组间比较采用单因素方差分析，两两比较采用SNK-q检验，P<0.05为差异有统计学意义。

2　结果

2.1肺微血管通透性的改变建立大鼠ALI模型后，经内毒素处理的各组肺微血管通透性增加，6 h时达到峰值。内毒素组、痰热清组、甲基泼尼松龙组各时间点的EB含量均高于正常对照组，差异有统计学意义(P<0.05)；痰热清组和甲基泼尼松龙组各时间点的EB含量均低于内毒素组，差异有统计学意义(P<0.05)；2 h时，痰热清组与甲基泼尼松龙组比较，EB含量差异有统计学意义(P<0.05)，见表1。

表1　各组大鼠伊文思蓝含量比较±s, mg/L)

注：*与正常组比较，△与内毒素组比较，▲与甲基泼尼龙组比较，均P<0.05；下同。

2.2肺含水量变化建立大鼠ALI模型后，经内毒素处理的各组肺含水量增加，6 h时达到峰值。内毒素组、痰热清组、甲基泼尼松龙组各时间点的肺含水量均高于正常对照组，差异有统计学意义(P<0.05)；痰热清组和甲基泼尼松龙组各时间点的肺含水量均低于内毒素组，差异有统计学意义(P<0.05)；2 h时，痰热清组与甲基泼尼松龙组比较肺含水量差异有统计学意义(P<0.05)，见表2。

表2　各组大鼠肺含水量比较±s, %)

3　讨论

由于革兰氏阴性菌感染的败血症患者越来越多，败血症导致的ALI日益成为临床医生关注的焦点[6]。革兰阴性菌细胞壁主要成分是内毒素，研究证实[7]，动物静脉输注内毒素可复制ALI模型，内毒素作用于肺泡毛细血管膜引起肺损伤，造成肺毛细血管通透性增加，肺脏内血管与组织之间液体交换功能紊乱，使肺间质和肺泡内聚积大量水分甚至蛋白质，导致肺含水量增加，液体在肺脏内潴留和气体交换发生障碍，肺顺应性下降，通气/血流比例失调，导致低氧血症，最终发展成为呼吸衰竭。肺血管的通透性改变是ALI病理生理变化的基础，有效预防和控制肺微血管通透性的改变对ALI患者的治疗非常重要。

痰热清注射液是我国研制的二类新药，具有独家知识产权，是采用中药指纹图谱检测标准生产的中药注射液，由中药材黄芩、山羊角、熊胆粉、连翘、金银花等提取精制而成[8]。黄芩具有抗病毒、抗炎、降压、镇静和解热的功效；山羊角、熊胆粉具有清热解毒、平肝息风、化痰解痉的作用；金银花、连翘具有清热解毒、宣肺化痰、疏风散结的功效。诸药配伍，可增强清热解毒、化痰止咳、镇惊安神的作用，通过注射途径给药，可以达到高效、速效的治疗效果[9]。痰热清注射液目前已被广泛应用于临床，研究表明[10]，痰热清能有效改善血液循环、清除体内自由基、提高血氧饱和度，减轻喘憋症状，加速炎症的吸收，但尚未见有关痰热清对肺损伤肺微血管通透性影响的研究。

本研究以内毒素建立大鼠ALI模型，模拟临床急性肺损伤的发展进程，建模的同时注射痰热清，观察痰热清对肺损伤大鼠肺微血管通透性的影响。本研究结果显示，大鼠经内毒素建模后肺含水量和EB含量增加较快，6 h时达到最高，与文献报道相一致[11]，表明大鼠肺损伤后6 h时肺通透性增加最多，随后的肺通透性下降可能与肺损伤后大鼠的自身免疫恢复有一定关系。注入痰热清和甲基泼尼松龙后2、6、12 h，急性肺损伤大鼠的肺含水量和EB含量明显低于内毒素组而高于正常对照组，表明痰热清和甲基泼尼松龙均可降低内毒素所致的急性肺损伤大鼠的肺微血管通透性。2 h时，甲基泼尼松龙组的肺微血管通透性小于痰热清组，其余时间点无差异，可能与甲基泼尼松龙的起效时间比痰热清快有关，痰热清属中药注射液，半衰期相对较长，而随着痰热清的逐渐起效，其保护肺损伤肺微血管通透性的作用与甲基泼尼松龙相当。

综上所述，痰热清注射液可降低内毒素诱导的大鼠急性肺损伤肺微血管通透性和肺含水量，对内毒素所致的急性肺损伤有保护作用。