巴戟天寡糖对大鼠子宫缺血再灌注损伤的抗氧化作用*

程亮星

(郑州大学第一附属医院《肿瘤基础与临床》编辑部，河南 郑州 450052)

妇科肿瘤的手术、外伤，以及子宫移植均可能出现子宫缺血再灌注损伤，这一生物学现象可能会对子宫造成严重的不可逆性损伤[1]。如何减轻子宫缺血再灌注损伤、研发保护性药物成为妇产科学的研究热点。巴戟天寡糖(morinda officinalis oligose，MOO)提取自中药巴戟天的肉质根，具有抗氧化、抗炎和抗凋亡的作用[2]。本研究采用线栓法制备大鼠子宫缺血再灌注损伤模型，探讨巴戟天寡糖对子宫缺血再灌注损伤的抗氧化作用。

1 材料与方法

1.1 动 物

50只SPF级健康雌性Wistar大鼠，均为6月龄，体质量(378±23)g，购自河南省实验动物中心，并饲养于该中心，动物合格证号为SCXK(豫)2010-0002。

1.2 药品、试剂与仪器

巴戟天寡糖由河南大学药学院提取，具体方法参考文献[2]。超氧化物歧化酶(superoxide dismutase，SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(glutathione peroxidase，GSH-Px)、过氧化氢酶(catalase，CAT)和丙二醛(malondialdehyde，MDA)、过氧化脂质(lipid peroxides，LPO)及考马斯亮兰试剂盒，均购自南京建成生物工程研究所，批号分别为20150723，20150715，20150713，20150720，20150728，20150717；其他试剂均为国内分析纯。

1.3 动物分组与给药方法

将50只大鼠随机分为假手术组，模型对照组，巴戟天寡糖低、中、高剂量组5组，每组10只。巴戟天寡糖低、中、高剂量组按体质量依次给予质量分数70，140，280 g/L巴戟天寡糖液10 μL/g灌胃，假手术组和模型对照组按体质量给予10 μL/g双蒸水灌胃，1 d 1次，连用7 d。

1.4 大鼠子宫缺血再灌注损伤模型的建立

各组大鼠末次给药后1 h采用线栓法制备大鼠子宫缺血再灌注损伤模型[2]：以质量分数10 g/L的戊巴比妥钠(0.4 μL/g)腹腔注射麻醉，腹部正中切口，经大隐静脉注射50 u/kg肝素钠后，钝性分离腹主动脉，在髂总动脉分叉处上0.5 cm处结扎腹主动脉(假手术组大鼠仅穿线，不结扎)，结扎30 min后，解除结扎线，复灌60 min，经戊巴比妥钠过量麻醉致死，取出子宫于-80 ℃冰箱中保存。

1.5 检测指标

每例子宫标本称取100 mg制成生理盐水匀浆，4 ℃、4 000 r/min离心15 min，取上清液，检测其SOD、GSH-Px、CAT、MDA、LPO水平。SOD用黄嘌呤氧化酶法，GSH-Px用5,5-双硫代对硝基苯甲酸显色法，CAT用钼酸铵法，MDA和LPO用硫代戊巴比妥法，总蛋白量检测用考马斯亮兰法。

1.6 统计学方法

2 结 果

与假手术组对比，模型对照组SOD、GSH-Px、CAT水平降低，MDA、LPO水平升高，差别有统计学意义(P<0.05)。与模型对照组对比，巴戟天寡糖3个剂量组SOD、GSH-Px、CAT水平升高，MDA、LPO水平降低，差别有统计学意义(P<0.05)。巴戟天寡糖3个剂量组SOD、GSH-Px、CAT、MDA、LPO水平两两对比，差别均有统计学意义(P<0.05)。见表1。

组 别SOD/(u·mg-1)GSH-Px/(u·mg-1)CAT/(u·mg-1)MDA/(nmol·mg-1)LPO/(nmol·mg-1)假手术组172.86±6.85 62.96±3.32 107.01±4.491.99±0.293.32±0.45模型对照组127.73±3.05**38.10±3.04**75.92±3.68**3.89±0.37**7.90±0.54** 巴戟天寡糖高剂量组156.02±7.17##53.79±2.27## △△97.40±3.45## △△2.46±0.23##△△4.47±0.36##△△ 巴戟天寡糖中剂量组145.38±3.63##△△48.92±2.80##89.11±2.57##2.855±0.16##5.04±0.39## 巴戟天寡糖低剂量组137.01±5.84##△△ **43.89±2.35##△△ **85.62±3.59##△△ **3.17±0.70##△△ **6.09±0.75##△△ **F98.449116.537106.95966.396112.752P<0.001<0.001<0.001<0.001<0.001

注：与假手术组对比，**P< 0.01；与模型对照组对比，##P< 0.01；与巴戟天寡糖高剂量组对比，△△P< 0.01；与巴戟天寡糖中剂量组对比，＊＊P< 0.01

3 讨 论

子宫缺血再灌注损伤常见于妇科肿瘤切除术、子宫移植术和子宫受外伤后。有研究[3-4]证实，氧化损伤、钙超载、细胞凋亡、免疫功能异常等均参与了其整个病理生理过程，任一环节被干预或阻止均有可能减轻子宫缺血再灌注损伤的程度。巴戟天寡糖已经被证实能够通过减轻过氧化损伤、清除自由基、减轻细胞凋亡，以及改善其能量代谢等来保护缺血再灌注损伤的脑、心脏、肾脏组织[5-6]。这提示巴戟天寡糖也可能对子宫缺血再灌注损伤具有保护作用。SOD、GSH-Px、CAT均为抗氧化酶类，正常机体内具有一定水平的SOD、GSH-Px、CAT，发挥着保护生物膜完整性的作用，对体内过氧化具有对抗作用，在自由基过剩时能够通过清除自由基来保护正常机体组织免受过氧化损伤的影响。SOD、GSH-Px、CAT水平高低可以一定程度上反映机体抗氧化能力[7-8]。MDA和LPO均是脂质过氧化反应的产物，可用于机体脂质过氧化程度的评估，其水平越高，证实机体脂质过氧化程度越严重，在缺血再灌注过程中发现MDA和LPO水平升高则证实组织已经受到了损伤[9]。

本研究结果显示：与假手术组对比，模型对照组SOD、GSH-Px、CAT水平降低，而MDA、LPO水平升高(P<0.05)，证明造模成功。与模型对照组比较，巴戟天寡糖低、中、高剂量组SOD、GSH-Px、CAT水平升高，而MDA、LPO水平降低(P<0.05)，提示巴戟天寡糖具有较强的抗氧化能力。3个巴戟天寡糖组SOD、GSH-Px、CAT、MDA、LPO水平两两对比，差别均有统计学意义(P<0.05)；且随着巴戟天寡糖质量分数的增加，SOD、GSH-Px、CAT水平升高，而MDA、LPO水平降低，证实巴戟天寡糖的抗氧化作用随其质量分数的增加而增强。

综上所述，巴戟天寡糖对子宫缺血再灌注损伤具有抗氧化作用，可能通过抗氧化作用来减轻子宫组织的损伤，且作用具有一定的剂量依赖性。

4 参考文献

[1] 杨娥，殷红岩，陈都红, 等. 丹参提取液对大鼠子宫缺血再灌注损伤的保护作用[J]. 中国中医急症,2016,25(8):1515-1517.

[2] 王志红，程亮星，王武亮，等. 巴戟天寡糖抗大鼠子宫缺血再灌注损伤作用的观察[J]. 郑州大学学报(医学版), 2017, 52(4):467-470.

[3] KISU I,UMENE K,ADACHI M,et al.Allowable warm ischemic time and morphological and biochemical changes in uterine ischemia/reperfusion injury in cynomolgus macaque: a basic study for uterus transplantation[J].Hum Reprod,2017,32(10):2026-2035.

[4] ATALAY YO,AKTAS S,SAHIN S, et al. Remifentanil protects uterus against ischemia-reperfusion injury in rats[J]. Acta Cir Bras,2015,30(11):756-761.

[5] 杨景柯, 冯国清,于爽，等. 巴戟天寡糖促进鸡胚绒毛尿囊膜血管生成研究[J]. 中国中药杂志, 2010, 35(3):360-363.

[6] 郭爱民，曹建民，周海涛. 巴戟天配伍维生素C对大鼠运动性肾脏缺血再灌注的保护作用[J]. 天然产物研究与开发, 2013，25(10): 1352-1356.

[7] ÖZKAN N, ERSOY ÖF,ÖZSOY Z, et al. Melatonin exhibits supportive effects on oxidants and anastomotic healing during intestinal ischemia/reperfusion injury[J].Ulus Travma Acil Cerrahi Derg,2018,24(1):1-8.

[8] WANG J, YAN B.A polysaccharide (PNPA) from Pleurotus nebrodensis ameliorates hepatic ischemic/reperfusion (I/R) injury in rats[J].Int J Biol Macromol,2017,105(Pt 1):447-451.

[9] BAO Z, CHEN W, PAN F, et al.Role of mitofusin 2 in the protective effect of breviscapine against hepatic ischemia/reperfusion injury in rats[J].Exp Ther Med,2018,15(4):3582-3588.

[10] DODO K, SHIMIZU T, SASAMORI J, et al.Indolylmaleimide Derivative IM-17 Shows Cardioprotective Effects in Ischemia-Reperfusion Injury[J].ACS Med Chem Lett,2018,9(3):182-187.