不同临床标本实时荧光定量PCR诊断结核分枝杆菌的检出率差异探究
2018-07-02张燊璐肖盼盼
张燊璐 肖盼盼
【摘 要】目的:探讨不同临床标本实时荧光定量 PCR诊断结核分枝杆菌的检出率差异。方法:2014年8月~2017年7月,随机选择我院收治的疑似结核病患者219例作为研究对象,收集其呼吸道、体液标本,进行荧光定量PCR检测,观察对比不同类型临床标本检出率情况。结果:经由实验室诊断确诊为肺结核患者67例,其中支气管灌洗液检检出率为54.76%(23/42),支气管刷物检出率为38.46%(15/39),尿液检出率为27.91%(12/43),痰液检出率为21.05%(8/38),胸腔积液检出率为17.14%(6/35),腹腔积液检出率为13.64%(3/22),各标本之间检出率对比差异存在统计学意义,P<0.05。结论:在结核分枝杆菌诊断过程中,实时荧光定量 PCR诊断具有较高的应用价值,且不同临床标本检出率存在明显差异,临床诊断操作应有所侧重。
【关键词】结核分枝杆菌;实时荧光定量 PCR诊断;标本;检出率
【中图分类号】R521 【文献标识码】B 【文章编号】2095-6851(2018)04-0-02
结核病属全球范围内高发疾病,日渐成为威胁人类健康的主要公共卫生问题,我国为结核病高发区,结核病发病人数众多,严重威胁我国居民身体健康[1]。针对结核病患者早诊断早治疗意义重大,而常规实验室诊断阳性率较低,很难满足临床实际需求,因此找寻一种高效、便捷的诊断方式尤为重要,其中实时荧光定量 PCR诊断优势明显,为后续治疗提供有效依据。本次研究基于上述背景,探讨了不同临床标本实时荧光定量 PCR诊断结核分枝杆菌的检出率差异,现详述如下。
1 资料与方法
1.1 一般资料
2014年8月~2017年7月,随机选择我院收治的疑似结核病患者219例作为研究对象,年龄28~62岁,平均(45.64±2.37)岁,收集其呼吸道、体液标本,其中支气管灌洗液42例,支气管刷物39例,尿液43例,痰液38例,胸腔积液35例,腹腔积液22例。本次研究经由我院伦理委员会批准,上述患者临床资料齐全,且全部自愿参与。
1.2 检测方法
样本采集:支气管灌洗液、支气管刷物、腹腔积液、胸腔积液:严格遵守临床操作规定,由同一医师操作完成;尿液:给予患者无菌试管,要求其留取中段尿液;痰液:患者晨起需漱口,用力咳嗽,咳出气管深处痰液,收集于无菌袋盖标本盒中。
样本检测:全部标本行实时荧光定量PCR检测,使用我院实时荧光定量PCR仪检测,试剂由广州东盛生物科技有限公司提供,DNA提取过程严格按照试剂说明操作,循环要求:93℃ 30s,55℃45s,设定30个循环;93℃ 2min,55℃60s,设定10个循环。
1.3 观察指标
阳性判断标准:Ct值小于30则判断为阳性,参考阳性结果计算各项指标检出率。
1.4 统计学处理
采用SPSS24.0统计软件对本次数据进行分析处理,计数资料以例数(率)表示,卡方检验。对比有统计学意义参照P<0.05。
2 结果
确诊为肺结核患者67例,支气管灌洗液检出人数最多为23例,检出率为54.76%,支气管刷物检出15例,检出率为38.46%,尿液检出12例,检出率为27.91%,痰液检出率8例,检出率为21.05%,胸腔积液检出6例,检出率为17.14%,腹腔积液检出人数最少为3人,检出率为13.64%,各标本之间检出率对比差异存在统计学意义,P<0.05。
3 讨论
现阶段,我国结核病发病率较高,其属呼吸道传染疾病,由结核分枝杆菌引起,主要经由血液或淋巴传播,到达肺外脏器后致病,严重影响患者身体健康,且近年来我国肺结核发病人数不断增加,对临床诊治工作提出了较高要求[2]。
通常情况下,结核病患者多开展实验室结核分枝杆菌诊断,但传统检查方式敏感性较低,且特异性较差,无法满足临床诊断实际需求,临床日渐重视 检测方式的创新与发展,而实时荧光定量PCR诊断具有操作简便、可重复操作、全封闭扩增等优势,日渐被广泛应用于结核病患者诊断中,为后续治疗提供了科学的依据[2]。本次研究选择疑似肺结核患者作为研究对象,给予其实时荧光定量PCR诊断,对不同临床标本检出率差异进行了对比分析,结果显示:确诊为肺结核患者67例,其中支气管灌洗液检检出率为54.76%(23/42),支气管刷物检出率为38.46%(15/39),尿液檢出率为27.91%(12/43),痰液检出率为21.05%(8/38),胸腔积液检出率为17.14%(6/35),腹腔积液检出率为13.64%(3/22),各标本之间检出率对比差异存在统计学意义,P<0.05。具体原因分析如下:支气管灌洗液、支气管刷物检出率较高,二者源于深部病灶,经由支气管镜直接收集,其中细菌浓度较高,切实提高了诊断阳性率。而尿液、痰液、腹腔积液和胸腔积液均来源于脱落的病灶,会出现细菌浓度降低等问题,从而影响检测的准确性,因此针对肺结核患者,在实时荧光定量PCR诊断过程中,工作人员明确各项样本的特异性和敏感性,制定综合检查方案,以此切实提高临床诊断准确性,为临床治疗提供科学依据。
综上,在结核分枝杆菌诊断过程中,实时荧光定量 PCR诊断具有较高的应用价值,且不同临床标本检出率存在明显差异,临床诊断操作应有所侧重。
参考文献:
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孟凤珍,郭铭,周立,等.TaqMan实时荧光定量PCR检测动物组织中结核分枝杆菌的研究[J].中国病原生物学杂志,2016,29(9):769-774.