不同厂家盐酸小檗胺片溶出度的比较研究

成都中医药大学，四川 成都 611137

盐酸小檗胺(Berbamine Hydrochloride)是从小檗科植物甘肃小檗(BerberiskansuensisSchneid.)[1]同属植物中分离得到的一种天然来源的化合物，是一种双苄基异喹啉类生物碱，也是一种天然来源的钙调素拮抗剂[1]，在临床上常被用于治疗各种原因引起的白细胞减少症。前期研究表明，盐酸小檗胺具有辅助盐酸小檗碱降低四氧嘧啶小鼠空腹血糖的增效作用[2]，糖尿病患者发生青光眼[3]、白内障[4]的比例显著增高，有研究表明盐酸小檗胺具有青光眼视神经保护作用[3]，外用小檗胺滴眼液对糖尿病性白内障具有显著的防治作用[5]，表明盐酸小檗胺在治疗糖尿病眼病的新药研发方面具有重大的意义。

目前，盐酸小檗胺上市剂型仅有片剂，有薄膜衣片、糖衣片两种规格，其溶出行为可能因为包衣材料的差异而不同[6-7]，由于盐酸小檗胺对青光眼视神经保护作用具有剂量依赖性[3]，与血药浓度有关，在体外又与溶出度相关。但是，有关盐酸小檗胺片的溶出度试验却鲜有报道，为了了解盐酸小檗胺在胃肠道的溶出行为，预测其生物利用度，在前期对盐酸小檗胺的溶解度和油水分配系数试验结果的基础上，本研究模拟体外胃、肠道环境，对盐酸小檗胺片的溶出度进行测定，为盐酸小檗胺片的包衣工艺选择提供依据。

1 仪器与材料

1.1 仪器 Rcz-6B3型药物溶出度仪(上海黄海药检仪器有限公司)；UV-1800型紫外可见分光光度计(上海美谱达仪器有限公司)；pHS-3C型酸度计(成都世纪方舟科技有限公司)；BSA124S型电子天平(北京赛多利斯科学仪器有限公司，d=0.1 mg)；BP121S十万分之一电子天平(德国赛多利斯科学仪器有限公司, d=0.01 mg)；TDZ5-WS台式低速离心机(湖南湘仪实验室仪器开发有限公司)；ULUP-I-10T超纯水机(成都超纯科技有限公司)。

1.2 试药 胰蛋白酶(国药集团化学试剂有限公司，批号：20141203)；胃蛋白酶(如吉生物科技有限公司，批号：150622)；盐酸小檗胺对照品(成都曼斯特生物科技有限公司，批号：MUST- 2015011304，纯度：98.55%)；氢氧化钠、磷酸二氢钾、浓盐酸等试剂均为分析纯。

1.3 实验原料 购买市售4个厂家生产的盐酸小檗胺片，其来源信息见表1。

表1 盐酸小檗胺片来源信息表

2 实验方法

2.1 人工胃液和人工肠液的配制 根据《中国药典》2015版四部通则0921“崩解时限检查法”[8]118-119的方法配制实验用相关溶出介质体外模拟的人工胃、肠液，根据说明使用相关试药配制成人工胃液(加酶/不加酶)和人工肠液(加酶/不加酶)作为溶出介质，备用。

2.2 盐酸小檗胺储备液的配制 取盐酸小檗胺对照品适量，精密称定，加入甲醇并定容制成每1 mL溶液含盐酸小檗胺4.02 mg的溶液，作为对照品储备液。

2.3 标准曲线的绘制 分别吸取适量盐酸小檗胺储备液，分别用新配制的人工胃液(不加酶)和人工肠液(不加酶)制成浓度为12.06、16.08、24.12、32.16、40.20、44.22 μg/mL盐酸小檗胺对照品溶液(人工胃液)和盐酸小檗胺对照品溶液(人工肠液)，以相应的溶出介质作空白溶液，于282 nm波长[2]处测定其紫外吸光度。

2.4 溶出度的测定 根据《中国药典》2015年版四部0931“溶出度与释放度测定方法”的“桨法”[8]121-122进行盐酸小檗胺的溶出度测定。按照药典的规定，分别将新鲜配置并经过通过微孔滤膜-超声的脱气处理之后的人工胃、肠液(加酶/不加酶)四种溶液各1000 mL作为溶出介质，保持溶出度仪转桨的运转速度为50 r/min，溶出介质温度设定为(37±0.5)℃，分别在试验开始后5、10、15、20、25、30、40、50、60 min间隔内取样4 mL(同时加入等量相应溶出介质)，立即经0.45 μm微孔滤膜滤过，以相应的溶出介质为空白溶剂，在282 nm处测定吸光度，分别计算4个批次盐酸小檗胺片各个时间点的溶出百分数并绘制相应的累计溶出度。

2.5 不同厂家盐酸小檗胺片在不同介质中的溶出曲线相似的评价 对不同厂家的盐酸小檗胺片的溶出曲线进行相似因子拟合，当50≤f2≤100时，认为两条溶出曲线相似，小于50则认为不相似[9]，计算公式为：

2.6 统计方法 主成分分析法(Principal Components Analysis，PCA)是在不丢掉原来主要信息的前提下，利用多个变量之间的关系，采用降维的思想将原来多个变量组合成少数几个互不相关的新的综合变量的统计方法。现主成分分析法已被广泛应用于药物色谱、光谱分析以及药效学相关数据的处理分析之中[10-11]。分层聚类分析(Hierarchical Cluster Analysis，HCA)是以“物以类聚”为原则，将不同分组变量降维处理分类到不同的类，同类对象具有很大的相似性、不同类对象有很大的相异性[12]。因此，PCA和HCA可以很好地处理本文中的数据，挖掘出影响不同厂家溶出度结果的主要因素。

3 实验结果

3.1 标准曲线的绘制 按照“2.3”项下操作，于282 nm波长处测定其不同浓度的盐酸小檗胺对照品溶液的紫外吸光度，得到相应的回归方程：在人工胃液中y=0.0547x，R=0.9999；在人工肠液中y=0.0546x+0.0015，R=0.9997。结果表明盐酸小檗胺溶液在12.06～44.22 μg/mL范围内吸光度与浓度线性关系良好，且两条标准曲线具有等效性。

3.2 溶出度的测定 按照“2.4”项下操作，得到4个批次盐酸小檗胺片各个时间点的相应的累计溶出度结果见表2、3和图1、2。

时间/min溶出百分数/%XBAP-1XBAP-2XBAP-3XBAP-450.02±0.0610.60±5.260.00±0.0016.86±4.651011.92±4.1723.88±8.400.69±1.5138.54±3.421535.39±4.5233.68±3.5111.93±4.7944.27±1.112040.68±4.1339.59±3.1534.31±7.1445.52±1.742543.19±3.9940.25±1.3743.73±2.2145.01±1.633044.27±3.7540.52±1.4045.91±1.3646.21±2.564045.51±3.6640.72±1.2547.13±2.2145.36±1.415045.89±3.8840.69±1.1446.84±1.5945.45±1.706045.76±3.4240.83±1.7747.45±1.9845.71±2.20

时间/min溶出百分数/%XBAP-1XBAP-2XBAP-3XBAP-450.98±0.654.30±1.740.00±0.0020.76±5.04103.96±1.3821.41±4.380.00±0.0038.70±2.401523.25±8.7532.88±4.594.27±2.7242.51±1.162037.70±3.6440.34±3.4224.29±7.6043.32±1.492541.58±2.9043.50±2.8440.74±4.0343.30±1.273043.10±2.9643.92±1.3943.01±2.8843.28±1.134043.36±3.0243.79±0.3444.59±3.0942.19±1.235044.73±3.2244.09±2.1745.45±2.6442.41±1.366044.67±2.9246.55±6.1745.36±3.3142.81±0.66

3.3 不同厂家盐酸小檗胺片在不同介质中的溶出曲线相似的评价 将表2、3的结果带入f2的计算公式，得出4批盐酸小檗胺片的溶出曲线相似因子拟合结果，见表4、5。

表4 不同厂家盐酸小檗胺片在人工胃液中(不加酶)的溶出曲线相似因子拟合结果

表5 不同厂家盐酸小檗胺片人工肠液中(不加酶)的溶出曲线相似因子拟合结果

由相似因子拟合结果可以看出，人工胃液(不加酶)和人工肠液(不加酶)中，同种包衣种类的盐酸小檗胺片间的溶出曲线相似，例如糖衣片XBAP-1和XBAP-3，薄膜衣片XBAP-2和XBAP-4的溶出曲线相似；而不同种包衣种类的盐酸小檗胺片间，糖衣片XBAP-3与薄膜衣片XBAP-2和XBAP-4、薄膜衣片XBAP-4与糖衣片XBAP-1和XBAP-3的溶出度曲线不相似。

3.4 主成分分析(PCA)和分层聚类分析(HCA)结果 在对表2、3的数据进行反正切标准化处理后，采用Unscrambler 9.7软件，分别对四批盐酸小檗胺片在两种溶出介质中的溶出度进行PCA分析，结果如图3、4、5和6所示。

4 讨论

4.1 盐酸小檗胺片溶出介质的确定 实验前期的数据表明：盐酸小檗胺片在溶出介质人工胃液(加酶)和人工胃液(不加酶)、人工肠液(加酶)和人工肠液(不加酶)中的溶出效果相差不大，因此本实验在正式试验阶段均采用的是不加酶的人工胃液和人工肠液作为溶出介质。

4.2 盐酸小檗胺片不同介质中的溶解度 由表2、3可以得出盐酸小檗胺片在人工胃液(不加酶)人工肠液(不加酶)中的溶解度均在40%～50%之间，可能是因为片剂中的辅料和制备工艺的不同会在一定程度上影响溶出效果，另外，片剂中的水分和标示量也会一定程度上影响最终计算结果。国家药品监督管理局药品标准盐酸小檗胺项下规定了本品干燥失重不得超过10%[13]，实验时以检验符合规定的盐酸小檗胺片投料，实际每片片剂中含有28 mg的盐酸小檗胺按干燥失重折算后应为25.2 mg,以标示量的90%～110%折算[14]，盐酸小檗胺片含量限度为每片片剂以盐酸小檗胺计算不低于22.68 mg。

4.3 盐酸小檗胺薄膜衣片和糖衣片的比较 溶出度的测定结果结合PCA和HCA的分析可以看出：在人工胃液(不加酶)中，糖衣片XBAP-1和XBAP-3与薄膜衣片XBAP-2和XBAP-4有不同的溶出行为，差异主要表现在前15 min的溶出，且糖衣片XBAP-3样品间呈离散状态；在人工肠液(不加酶)中，糖衣片XBAP-3与薄膜衣片XBAP-2和XBAP-4有不同的溶出行为，糖衣片XBAP-1介于两者之间， 且样品间呈离散状态。所以，在相同的溶出条件下，盐酸小檗胺薄膜衣片比盐酸小檗胺糖衣片更加稳定，可见盐酸小檗胺薄膜衣片规格的工艺较糖衣片更加合理。

[1]徐海波,张晓维,孙超,等. 甘肃小檗枝、叶化学成分的分离与鉴定[J]. 中国药房,2012,23(43):4493-4495.

[2]张燕,孟宪丽,岳丽珺,等. 藏药小檗皮对糖尿病模型小鼠血糖水平影响的初步研究[J]. 现代生物医学进展,2013,13(19):3619-3622.

[3]唐建明,吴迺川,夏风华,等. 糖尿病性新生血管性青光眼的综合治疗[J]. 临床眼科杂志,2009,17(6):508-510.

[4]王媛媛. 糖尿病性白内障的综合治疗[J]. 河北医药,2010,32(18):2579-2582.

[5]何浩,孙旭光,张家萍,等. 小檗胺滴眼剂防治糖尿病性白内障的研究[J].北京医科大学报,1997,29(4):326-328.

[6]肖松,郑若纯,赖锐娟. 氯芬黄敏片糖衣片和薄膜衣片溶出曲线的建立和比较[J]. 汕头大学学报(自然科学),2012,27(4):33-36.

[7]安斯扬,胡芳,蒋坤,等. 不同包衣维C银翘片中对乙酰氨基酚体外溶出度比较研究[J]. 药物与临床,2015,12(6):35-39.

[8]国家药典委员会编.中华人民共和国药典(四部)[S]. 2015年版.北京：中国医药科技出版社,2015:118-119，121-122.

[9]张琳,刘葵葵,李欣,等. 相似因子法评价雷美替胺片自研制剂与原研制剂溶出曲线的相似性[J]. 中国药房,2016,27(30):4307-4310.

[10]黄娇.指纹图谱和主成分分析法评价不同海拔高度的桔梗药材质量[J].食品工业科技，2015，36( 13) : 309-313.

[11]杨莹莹,王晓燕,冯夏珍,等. 主成分分析和聚类分析法研究刺玫果黄酮类成分HPLC 指纹图谱[J].食品工业科技,2017,38(24):231-237.

[12]赖先荣,周邦华,杜明胜,等. 6 种黄连饮片中 6 种生物碱的 RP-HPLC 含量测定及与“治消渴”药效学的谱-效关系分析[J].中国中药杂志,2016,41(24): 4579-4586.

[13]国家药品监督管理局. 国家药品监督管理局药品标准:盐酸小檗胺[M].北京:化学工业出版社,2012.

[14]国家药品监督管理局. 国家药品监督管理局药品标准:盐酸小檗胺片[M].北京:化学工业出版社,2012.