匙萼金丝桃化学成分研究

刘 健，肖朝江，2，张盼盼，崔淑君 ，李 阳，姜 北，2*

（1.大理大学药学与化学学院，云南大理 671000；2.大理大学药物研究所，云南大理 671000）

匙萼金丝桃（Hypericum uralum Buch.-Han.ex D.Don）又名土连翘、芒种花、金丝桃等，为藤黄科金丝桃属植物，主要分布于西藏、云南西北部。该植物为灌木，高0.3～2 m，丛状，有直立而拱弯、通常多叶的茎，花期7～9月，果期9～11月〔1〕。该植物全株可用于治疗肝炎、痢疾、淋病、咽喉肿痛、口腔炎、疮痈、跌打损伤、鼻咽癌、喉癌、扁桃体癌、肺癌、膀胱癌、前列腺癌等〔2-3〕。在前期开展的大规模滇西地区特色性植物镇痛活性筛选研究中，发现匙萼金丝桃提取物具有显著的镇痛活性。为深入了解认识该植物的化学成分，本文采用硅胶和凝胶柱层析等手段，对采自云南大理地区的匙萼金丝桃95%乙醇提取物乙酸乙酯部位进行了化学成分研究，从中分离得到了6个化合物，分别鉴定为：β-谷甾醇（1）、豆甾醇（2）、胡萝卜苷（3）、桦木酸（4）、槲皮素（5）、表儿茶素（6）。见图1。

1 仪器与材料

图1 化合物1～6的结构

1.1 实验仪器 AL-204电子天平［梅特勒-托利多（上海）有限公司］；Bruker AvanceⅢ-400核磁共振仪（德国布鲁克公司），四甲基硅烷（TMS）为内标；柱层析硅胶和薄层层析硅胶板GF254（青岛海洋化工厂）；RE-52AA旋转蒸发仪（上海亚荣生化仪器厂）；Sephadex LH-20（Amersham Biosciences）；石油醚、氯仿、乙酸乙酯、丙酮、甲醇等均为工业级有机溶剂，经重蒸后使用。

1.2 实验材料 本实验所用样品于2017年7月采自云南省大理市苍山，由大理大学张德全博士鉴定为匙萼金丝桃（Hypericum uralum Buch.-Ham.ex D.Don），植物样本（20170705-1A）存放于大理大学药物研究所姜北教授研究组。

2 提取方法

匙萼金丝桃全植株9.34 kg，用95%乙醇冷浸提取9次，合并提取液，减压浓缩所得总浸膏（1.26 kg）以水分散，依次用石油醚、乙酸乙酯、正丁醇萃取，得到相应萃取物。乙酸乙酯萃取物（322 g）经300～400目硅胶柱，氯仿-丙酮洗脱系统（1：0→0：1）梯度洗脱，得到9个流分（A～I）；B段经300～400目硅胶柱色谱，石油醚-丙酮（1：0→0：1）梯度洗脱，得到化合物1（9 mg）和2（15 mg）；B3段经300～400目硅胶柱色谱，石油醚-乙酸乙酯（10：1）等度洗脱，得到化合物4（23 mg）和5（35 mg）；C段经两次凝胶（Sephadex LH-20，甲醇）柱色谱，得到化合物6（40 mg）；G段经两次凝胶（Sephadex LH-20，甲醇）柱色谱分离纯化，得到化合物3（15 mg）。

3 实验结果

化合物1：无色针晶（氯仿）。1H-NMR（400 MHz，CDCl3）δ：5.36（1H，brs，H-6），3.53（1H，m，H-3α），1.01（3H，s，Me-19），0.92（3H，d，J=6.5 Hz，Me-21），0.85，0.82，0.81（各3H，overlap，Me-26，27，29），0.68（3H，s，Me-18）；13C-NMR（100 MHz，CDCl3）δ：37.4（t，C-1），31.8（t，C-2），72.0（d，C-3），42.4（t，C-4），140.9（s，C-5），121.9（d，C-6），31.8（t，C-7），32.0（d，C-8），50.3（d，C-9），36.6（s，C-10），21.2（t，C-11），39.9（t，C-12），42.5（s，C-13），56.2（d，C-14），24.5（t，C-15），28.4（t，C-16），56.9（d，C-17），12.1（q，C-18），19.5（q，C-19），36.3（d，C-20），18.9（q，C-21），34.1（t，C-22），26.2（t，C-23），46.0（d，C-24），29.3（d，C-25），20.0（q，C-26），19.2（q，C-27），23.3（t，C-28），12.0（q，C-29）。上述数据与文献〔4〕报道基本一致，故鉴定化合物1为β-谷甾醇。

化合物2：无色针晶（氯仿）。1H-NMR（400 MHz，CDCl3）δ：5.35（1H，brs，H-6），5.15（1H，dd，J=15.5，8.6Hz，H-23），5.01（1H，dd，J=15.5，8.6Hz，H-22），3.53（1H，m，H-3α），1.01（3H，s，Me-19），0.92（3H，d，J=6.5Hz，Me-21），0.84，0.82，0.80（各3H，overlap，Me-26，27，29），0.70（3H，s，Me-18）；13C-NMR（100 MHz，CDCl3）δ：37.4（t，C-1），31.8（t，C-2），72.0（d，C-3），42.5（t，C-4），140.9（s，C-5），121.9（d，C-6），32.1（t，C-7），32.0（d，C-8），50.3（d，C-9），36.6（s，C-10），21.2（t，C-11），40.7（t，C-12），42.4（s，C-13），56.1（d，C-14），24.5（t，C-15），28.4（t，C-16），57.0（d，C-17），12.0（q，C-18），19.5（q，C-19），40.6（d，C-20），21.4（q，C-21），138.5（d，C-22），129.4（d，C-23），51.4（d，C-24），32.0（d，C-25），21.4（q，C-26），19.1（q，C-27），25.6（t，C-28），12.1（q，C-29）。上述数据与文献〔5〕报道基本一致，故鉴定化合物2为豆甾醇。

化合物3：白色粉末。1H-NMR（400MHz，C5D5N）δ：5.37（1H，brs，H-6），5.14（1H，d，J=7.4 Hz，H-1′），5.08（1H，d，J=7.7 Hz，H-1′），4.59（1H，dd，J=11.8，2.4 Hz，H-6′a），4.43（1H，dd，J=11.8，5.2 Hz，H-6′b），4.33（1H，overlap，H-4′），4.31（1H，overlap，H-5′），4.08（1H，m，H-3α），4.00（1H，overlap，H-2′），3.96（1H，overlap，H-3′），1.00（3H，overlap，Me-21），0.96（3H，s，Me-19），0.95（3H，overlap，Me-26），0.91（3H，overlap，Me-27），0.89（3H，overlap，Me-29），0.68（3H，s，Me-18）；13C-NMR（100MHz，C5D5N）δ：37.8（t，C-1），30.6（t，C-2），78.9（d，C-3），40.3（t，C-4），141.3（s，C-5），122.3（d，C-6），32.5（t，C-7），32.4（d，C-8），50.7（d，C-9），37.3（s，C-10），21.7（t，C-11），39.7（t，C-12），42.8（s，C-13），57.2（d，C-14），24.9（t，C-15），28.9（t，C-16），56.6（d，C-17），12.3（q，C-18），19.8（q，C-19），36.7（d，C-20），19.4（q，C-21），34.6（t，C-22），26.7（t，C-23），46.4（d，C-24），29.8（d，C-25），19.8（q，C-26），20.4（q，C-27），23.8（t，C-28），12.5（q，C-29），102.9（d，C-1′），75.7（d，C-2′），78.5（d，C-3′），72.1（d，C-4′），79.0（d，C-5′），63.2（t，C-6′）。上述数据与文献〔6〕报道基本一致，故鉴定化合物3为胡萝卜苷。

化合物4：白色粉末。1H-NMR（400MHz，C5D5N）δ：4.94（1H，brs，H-29a），4.76（1H，brs，H-29b），3.53（1H，td，J=10.9，5.0 Hz，H-3α），3.45（1H，dd，J=9.1，7.1 Hz，H-19），1.78（3H，s，H-30），1.21（3H，s，H-27），1.05（3H，s，H-26），1.04（3H，s，H-23），1.00（3H，s，H-25），0.80（3H，s，H-24）；13C-NMR（100 MHz，C5D5N）δ：38.9（t，C-1），28.6（t，C-2），78.5（d，C-3），39.9（s，C-4），56.2（d，C-5），19.1（t，C-6），35.2（t，C-7），41.4（s，C-8），51.3（d，C-9），37.8（s，C-10），21.5（t，C-11），26.4（t，C-12），38.9（d，C-13），43.2（s，C-14），30.6（t，C-15），33.2（t，C-16），57.0（s，C-17），48.1（d，C-18），50.1（d，C-19），151.7（s，C-20），31.5（t，C-21），37.9（t，C-22），29.0（q，C-23），16.8（q，C-24，C-26），16.7（q，C-25），15.2（q，C-27），179.2（s，C-28），110.3（t，C-29），19.8（q，C-30′）。上述数据与文献〔7〕报道基本一致，故鉴定化合物4为桦木酸。

化合物 5：黄色粉末。1H-NMR（400 MHz，CD3COCD3）δ：12.1（1H，s，5-OH），7.80（1H，d，J=2.1 Hz，H-2′），7.67（1H，dd，J=8.4，1.9 Hz，H-6′），6.97（1H，d，J=8.4 Hz，H-5′），6.50（1H，brs，H-6），6.24（1H，brs，H-8）；13C-NMR（100 MHz，CD3COCD3）δ：146.9（s，C-2），136.7（s，C-3），176.5（s，C-4），162.3（s，C-5），99.1（d，C-6），164.9（s，C-7），94.4（d，C-8），157.7（s，C-9），104.1（s，C-10），123.7（s，C-1′），115.7（d，C-2′），145.8（s，C-3′），148.3（s，C-4′），116.2（d，C-5′），121.4（d，C-6′）。上述数据与文献〔8〕报道基本一致，故鉴定化合物5为槲皮素。

化合物6：黄色粉末。1H-NMR（400 MHz，CD3COCD3）δ：7.05（1H，d，J=2.0 Hz，H-2′），6.83（1H，dd，J=8.1，1.8 Hz，H-6′），6.78（1H，d，J=8.1，H-5′），6.02（1H，d，J=2.3 Hz，H-6），5.92（1H，d，J=2.3 Hz，H-8），4.87（1H，s，H-2b），4.20（1H，m，H-3b），2.86（1H，dd，J=16.6，4.6 Hz，H-4a），2.74（1H，dd，J=16.6，3.3 Hz，H-4b）；13C-NMR（100 MHz，CD3COCD3）δ：79.5（d，C-2），67.1（d，C-3），29.1（t，C-4），157.6（s，C-5），96.3（s，C-6），157.7（s，C-7），95.8（d，C-8），157.2（s，C-9），99.9（s，C-10），132.3（d，C-1′），115.4（d，C-2′），145.4（s，C-3′），145.5（s，C-4′），115.6（d，C-5′），119.5（d，C-6′）。上述数据与文献〔9〕报道基本一致，故鉴定化合物6为表儿茶素。

4 讨论

本实验从匙萼金丝桃95%乙醇提取物的乙酸乙酯部位分离得到6个化合物，均为首次从该植物中分离得到〔10-14〕，其主要涉及甾体类、黄酮类及萜类。前人研究表明黄酮类及萜类化合物具有丰富的药理活性。文献报道，槲皮素可显著降低多种动物模型的痛阈值〔15〕。另外，阮洪生等〔16〕研究表明表儿茶素可以抑制对脂多糖诱导小鼠单核巨噬细胞炎症反应，具有抗炎作用。徐先祥等〔17〕研究表明桦木酸可以通过活化糖皮质激素受体、抑制花生四烯酸代谢途径、抑制一氧化氮生成等多种途径发挥抗炎作用。由于镇痛常与抗炎作用密切相关，从本研究所分离得到的化学成分及其相关研究报道，可初步推断前期研究过程中所发现的匙萼金丝桃提取物显示镇痛作用具有一定的合理性。本研究为系统了解匙萼金丝桃的化学成分、更好地开发与利用该植物资源奠定了一定基础。

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