苔干抑菌活性探讨

□ 卢 臣 孙会刚 卞路遥 陈学红 李同祥 徐州工程学院（中心校区）

苔干，又名响菜、贡菜，为植物系菊科莴苣属茎用莴苣，是我国江苏邳州市和安徽涡阳县义门的名优特产蔬菜，迄今已有两千多年的种植历史[1]。苔干中含有丰富的氨基酸、果胶、多糖、黄酮类、酚类物质以及各种无机盐，具有健胃、利水、清热解毒等功能，在室温内长时间放置而不易腐烂，有“天然保健品、植物营养素”之称[2]。

张雪香等人分析测定了苔干中含有大量糖类、酚类、生物碱及黄酮类物质[3]；甄清等对贡菜抗菌作用进行了实验研究，得出贡菜85 ℃的醇提取液具有抑菌性质，结果分析苔干的醇提取液中含黄酮类物质[4]。同时，甄清等利用丙酮对苔干进行浸提、萃取等工艺，结果表明苔干提取液中存在抗真菌有效成分，并初步定性分析为酚类化合物质[5]。杨京霞等以正交实验法优化了苔干中黄酮含量，结果得出70%乙醇浓度，70 ℃，45min，料液比1∶30，得到2.8%的黄酮含量[6]。

根据以上研究，可以得出苔干具有良好的抑菌作用，但是目前对于苔干的研究及相关抑菌实验进行较少，研究还不够深入和广泛，其抑菌活性物质的提取没有较好的工艺方案。

1 材料

1.1 实验材料

苔干，购于邳州占城；乙醇、丙酮、乙酸乙酯均为分析纯。

1.2 试验菌株

金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、单增李斯特菌、枯草芽孢杆菌均为徐州工程学院食品（生物）实验室分离所得，菌液浓度控制为105～106CFU／mL。

1.3 仪器与设备

高速粉碎机（CS-700）、超声清洗器（Julabo TW1）、HZ-III型循环水真空泵、RE-2000B型旋转蒸发仪、电子天平FA2140N、恒温恒湿箱、SW-CJ-1FD型单人单面净化工作台、BCD-539WT电冰箱、立式高压蒸汽灭菌锅、烘箱。

2 实验方法

2.1 原材料处理

苔干复水洗净后，放入恒温干燥箱内，于60 ℃烘干至恒重，用高速粉碎机粉碎，过60目筛，用无菌袋收集，放于4 ℃冰箱中备用。

2.2 菌种活化及菌悬液制备

将金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、蜡样芽孢杆菌、单增李斯特菌、枯草芽孢杆菌接种于相应的培养基进行活化 ，细菌于37℃培养24h，真菌于28℃培养48h。

菌种活化好后，用无菌生理盐水洗脱，摇匀。用无菌吸管取 1mL菌液于试管中，加入 9mL无菌水，制成菌悬液，再取 1mL充分混合的菌悬液于试管中，加入 9mL无菌水，用显微镜直接记数法测菌体个数，用无菌生理盐水调整浓度为含菌体为 105～106CFU/mL的菌悬液，放于4 ℃冰箱中备用[7]。

2.3 苔干提取液的制备

本实验采用超声波辅助提取法[8]，用不同极性的溶剂来提取苔干中的抑菌活性物质。

准确称量4份20g苔干粉，分别置于4个锥形瓶中，再分别量取200mL的80%乙醇、丙酮、乙酸乙酯和水加入锥形瓶。充分混匀后，将4个锥形瓶放入超声清洗器中，于45 ℃下密封浸提1h。

浸提完成后，将提取液进行抽滤，并将滤液于旋转蒸发仪中在45 ℃下浓缩成10mL。

3 体外抑菌试验

本文的抑菌实验采用牛津杯法，以金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、枯草芽孢杆菌、单增李斯特菌为指示菌，在超净工作台上将已融化的LB固体培养基倒入无菌培养皿中，待培养基冷却凝固后，用移液枪吸取100 μL指示菌悬液放于培养基中，用涂布棒涂布均匀。

用烧过的镊子夹取已灭菌的牛津杯放在培养皿中，使牛津杯在培养皿中自然下垂。在其浸沉5min之后，向牛津杯中轻轻注入200 μL提取液，并注明标记，水平移至37 ℃培养箱中，恒温培养12h，再用电子游标卡尺测量抑菌圈直径[9]。

将浓缩提取液分别以金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、枯草芽孢杆菌、单增李斯特菌为指示菌进行抑菌实验，每个实验重复三次，并设置空白对照组。

4 结果

各溶剂的苔干浓缩提取液对金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、枯草芽孢杆菌、单增李斯特菌有不同程度的抑菌效果。其中对大肠杆菌的具体抑菌情况如图1所示。

具体抑菌圈见表1。

从上述表格中可以得出，用不同提取剂通过超声波辅助提取得到的苔干提取液有不同的抑菌效果，其中苔干的丙酮提取液的抑菌性最强，活性大小为：大肠杆菌＞金黄色葡萄球菌＞枯草芽孢杆菌＞单增李斯特菌，乙醇提取液的抑菌性次之，水与乙酸乙酯的提取液抑菌活性相对较小，各提取液对大肠杆菌的整体抑菌性都很强。

图1 苔干提取液对大肠杆菌的抑菌情况

表1 苔干提取液对指示菌的最大抑菌圈直径（mm）

5 讨论

本文采用的超声波低温提取，用时较短，相对其他的提取方法节约原料，更能保留更多的活性物质，可以有效提高苔干中抑菌物质的提取率。

苔干的抑菌性较好，本文用不同极性的提取剂得到的苔干浓缩提取液有不同的抑菌效果，其中丙酮提取液最佳，乙醇提取液次之。但是目前对于苔干植物的抑菌性研究较少，因此可对苔干进行深入的探讨，加强分离纯化其有效抑菌物质的活性的研究。

[1]商学兵.营养贡菜说苔干[J].农产品加工,2009(9):46-47.

[2]郭 文 场,杨 松 涛,吕 忠宁.古来“贡菜”话苔干[J].植物杂志,2001(1):27-28.

[3]张雪香,张桂英,陈月.苔干有效成分的提取与分析[J].吉林中医药,1998(4):54.

[4]甄 清 ,黎 明 兰 ,李 勇 .贡 菜抗菌作用的实验研究[J].食品科学,1999(5):42-44.

[5]甄清,李勇,陈月,等.贡菜提取液的抗病原性真菌活性研究[J].天然产物研究与开发,2005(4):448-449.

[6]杨京霞,韩帅,李文雍,等.正交试验法优化苔干中黄酮含量[J].吉林农业大学学报,2010(S1):40-42.

[7]陈学红,会刚,唐仕荣,等.绿芦笋皮黄酮的抑菌性能研究[J].农业机械,2011(14):170-172.

[8]李 萍 ,舒 展 ,胡 矗 垚 ,等 .姜辣素的超声波法提取及其抑菌活性研究[J].中国调味品,2017(10):160-164,175.

[9]马利华,秦卫东,陈学红,等.牛蒡提取物抑菌活性的研究[J].食品科学,2009 (21):24-27.