2017年山东省猪瘟病毒病原及抗体检测与分析

王宏宇，马梓承，孟凡亮，刘照虎，刘思当

（山东农业大学动物科技学院，山东 泰安 271000）

猪瘟（Classical swine fever,CSF），是由猪瘟病毒（Classical swine fever virus,CSFV）引起的一种高度接触性热性传染病。以全身性出血和发热为主要特征，并引起妊娠母猪流产、免疫抑制、继发或并发感染等临床表现，呈急性或慢性，是一种对我国养猪业危害极大的传染病。1984年被世界动物卫生组织（OIE）列为A类传染病。因此猪瘟的诊断防治历来是全世界猪瘟存在国家极为重视的课题，我国每年都投入大量人力、物力进行猪瘟的免疫防控及科研工作。疫苗免疫防控是控制猪瘟的重要的手段，使该病在很大程度上得到了控制，但因种种原因，近年来仍有猪瘟发生。因此，定时进行猪瘟病原和抗体检测，不仅可以了解猪场的感染状态及免疫效果，实时监测群体免疫状况，而且能够及时发现免疫存在的问题及潜在风险，以便更好地做好猪瘟的防控工作。

1 材料与方法

1.1 试验材料

1.1.1 样品来源与处理 2017年 2月至 2018年1月，从山东泰安、济宁、青岛、临沂、烟台、莱芜和潍坊等地送检的579份检测猪瘟病原的病料及4 554份检测猪瘟抗体的血清。于山东农业大学动物科技学院临床病理学研究室进行检测前处理，将病料研磨后9 000 r/min，离心3 min，置于-20℃待检；血清置于 1.5 mL 离心管中，6 000 r/min，离心 5 min，吸取上清液至新的离心管中，-20℃待检。

1.1.2 主要仪器与试剂 EasyPure Viral DNA/RNA Kit和 EasyScript One-Step RT-PCR SuperMix均购自北京全式金生物技术有限公司，猪瘟病毒（CSFV）抗体检测试剂盒购自韩国MEDIAN公司，Eppendorf移液器，酶标仪等。

1.2 试验方法

1.2.1 检测方法 病原检测参照 EasyPure Viral DNA/RNA Kit说明书对组织研磨液进行RNA提取，PCR扩增体系按照One Step RT-PCR试剂盒的说明书进行，用PCR仪进行扩增，将扩增产物用1%的琼脂糖凝胶检测；抗体严格按照抗体检测试剂盒的说明书进行，酶标仪检测样品的OD450，按照说明书中的计算公式进行计算。

1.2.2 结果判断 本实验室猪瘟特异性引物扩增的序列长度为599 bp，琼脂糖凝胶上在599 bp处有条带的为猪瘟阳性；猪瘟抗体检测的标准：阻断率≥40%为阳性，阻断率＜40%为阴性。

2 检测结果

2.1 病原检测结果

经琼脂糖凝胶检测，在579份样品中，43份猪瘟阳性，检出率为7.43%，全年检出率按月份分布如图1。5份同时检出猪圆环病毒2型（PCV2），1份与猪蓝耳病病毒（PRRSV）共感染，1份CSFV、PRRSV、PCV2三重感染，另1份CSFV、PRRSV、伪狂犬病病毒（PRV）三重感染，分别占阳性检出数的11.63%、2.33%、2.33%、2.33%。

图1 猪瘟病毒年检出率月份分布

2.2 抗体检测结果

经检测，CSFV抗体的总体阳性率为76.46%，其分群的抗体检测数、阳性率及抗体免疫水平结果汇总如表1。

表1 猪瘟抗体分群结果汇总

3 结果分析

3.1 病原检测结果分析

经检测，本实验室2017年在579份送检病料中猪瘟阳性检出率为7.43%，阳性检出率较高，检出月份主要集中在1月、5月和7月，分别占年总检出的15.00%、12.73%和14.63%。同时，猪瘟作为免疫抑制病，与圆环病毒2型感染、蓝耳病和伪狂犬病的混感现象较为普遍，尤其是存在二重或三重感染，使病情复杂化。目前，我国猪瘟的免疫防控和监测净化工作仍面临不少困难和挑战。

3.2 抗体检测结果分析

2017年猪瘟抗体的总体阳性率为76.46%，据《2018年国家动物疫病强制免疫计划》指示，存栏猪群猪瘟的抗体阳性率大于70%为免疫合格，总体而言山东省猪瘟免疫水平尚属合格。如表1所示，种公猪、经产母猪、后备母猪的阳性率分别为88.92%、88.01%、76.20%，免疫效果较好；而哺乳仔猪和肥育猪的阳性率分别为69.10%和67.71%。对于哺乳仔猪，母源抗体水平较高，仍能持续给予仔猪一定的免疫保护，但对于肥育猪而言，整体阳性率不高，阻断率较低，怀疑免疫程序、免疫操作或疫苗质量等可能存在问题，问题猪场需要筛查原因，选取高质量疫苗，优化免疫程序，加强免疫监测评估，提高猪瘟免疫效果。

4 讨论

当前，我国猪场的疾病防控现象依然严峻，猪瘟暴发的现象时有发生，尤其是中小规模的猪场。根据病原检测及抗体检测结果分析，对造成这种现象的主要因素提出几条建议：第一，选择高效的猪瘟疫苗，根据猪场的实际情况制定科学的免疫程序并严格执行，避免因操作失误而造成免疫失败现象的出现；第二，及时做好哺乳仔猪的疫苗免疫，在其抗体下降期及时免疫，重视肥育猪的疫苗免疫情况；第三，定期抽取一定比例的血清样品进行猪瘟抗体检测，这样不但能实时监控猪瘟抗体的免疫动态，而且能够对其免疫效果进行评估，不断地优化猪瘟免疫程序，取得良好的免疫效果；第四，加强猪场的饲养管理，改善养殖环境，完善生物安全措施，尤其要做好其他疫病的免疫检测工作。