金沙江和长江长薄鳅人工繁殖及胚胎发育

张运海 丁瑶 顾正选 黄学潇 余泽文 舒敏

摘要：2017年6-7月分别对采集于金沙江攀枝花江段和长江泸州江段的长薄鳅（Leptobotia elongata）进行人工繁殖试验，同时对金沙江攀枝花江段的长薄鳅进行胚胎发育的观察。结果表明，共催产长薄鳅4组，共获得鱼苗1.8万尾，长薄鳅雌性亲本成熟较雄鱼早，雌雄發育同步期在6月底。在水温24 ℃条件下对胚胎进行观察，发现受精卵发育为原肠胚的时间为5.0 h，平均出膜时间为31.0 h，出膜仔鱼平均长度为5.2 mm，出膜前鱼体长度与卵膜直径相当，在卵膜内能够伸直鱼体自由游动，这与其他鳅科鱼类以及多数鲤科鱼类有所不同。

关键词：长薄鳅（Leptobotia elongata）；金沙江；长江；人工繁殖；胚胎发育

中图分类号：S917 文献标识码：A 文章编号：0439-8114（2018）08-0104-04

DOI：10.14088/j.cnki.issn0439-8114.2018.08.026

Artificial Propagation and Embryonic Development Observation of Leptobotia elongata from Jinsha River and Yangtze River

ZHANG Yun-hai，DING Yao，GU Zheng-xuan，HUANG Xue-xiao，YU Ze-wen，SHU-Min

（Wuhan Sinoeco Ecological Science and Technology Co.， Ltd.， Wuhan 430083， China）

Abstract： Artificial propagation of Leptobotia elongata collected from the Panzhihua section of Jinsha river and Luzhou section of Yangtze river were studied from June to July in 2017. At the same time the embryonic development of Leptobotia elongata from Panzhihua section of Jinsha River were observed. In the experiment of artificial inducing spawning of 4 parents 18 000 fries were received，the study indicated that the females matured earlier than the males，The time they both reach sexual maturity may be in the end of June. Gastrula began in 5.0 h at 24 ℃，and the average hatching time was 31.0 h，the average length of the larvae was 5.2 mm. Before hatching the length of larvae and the diameter of egg membrane was about equal. the fish was able to stretch and swim freely in the egg membrane. This was different from other Cobitidae and most of Cyprinidae.

Key words： Leptobotia elongata； Yangtze river； Jinsha river； artificial propagation； embryonic development

长薄鳅（Leptobotia elongata）隶属于鲤形目鳅科沙鳅亚科薄鳅属，别名花鱼、花斑鳅、花泥鳅、红沙鳅钻、火军、花鳅等，是中国长江中上游特有珍稀鱼类，也是目前已知的鳅科鱼类中体型最大的一种[1]。长薄鳅主要摄食底层小型鱼类及底栖动物。近年来，水生态系统遭受严重威胁，特别是长江上游江段及金沙江江段，由于水电站的梯级开发，使得野生鱼类生境发生剧烈变化；加之过度捕捞，使长薄鳅的野生种群受到严重威胁。目前长薄鳅在《中国物种红色名录》《中国濒危动物红皮书 鱼类》中均被列为易危（VU）等级。为了对水电影响江段野生鱼类资源进行补偿，中国多个水电站采取人工增殖放流的方式对流域渔业资源进行修复。2017年分别在四川省乐山的安谷水电站鱼类增殖放流站和四川攀枝花的观音岩水电站鱼类增殖放流站进行长薄鳅的人工繁殖，并取得成功。

1 材料与方法

1.1 材料

所用的试验材料为天然水域人工采集的野生亲本，其中观音岩水电站鱼类增殖放流站的长薄鳅亲本采集于金沙江攀枝花江段，采集时间为2016年5月27日，采集后对鱼体进行消毒处理，消毒后将亲本暂养于循环水养殖系统中，催产时间为2017年6月14日；安谷水电站鱼类增殖放流站的长薄鳅采集于长江泸州江段，采集时间为2017年7月11日，由于亲本发育良好，采集后立即运回增殖放流站进行人工催产。

1.2 方法

1.2.1 亲本选择 选择体表无伤，活力较强的个体作为亲本，通常繁殖季节雌性长薄鳅腹部柔软膨大，可见明显的卵巢轮廓，雄鱼腹部轮廓不明显，生殖孔微红，轻压雌鳅腹部有乳白色精液流出，并且遇水即溶解。

1.2.2 人工催产 采用PG、HCG、LHRH-A3 3种催产药物进行催产，其中第一针所用的催产剂为LHRH-A3，注射剂量为2 μg/kg，雄鱼不注射。第二针采用混合催产剂，其中PG用量为8 mg/kg，LHRH-A3用量为15 μg/kg，HCG用量为800～1 000 IU/kg，雄鱼视发育情况（精子遇水扩散快则发育好，慢则发育一般）注射剂量为雌鱼的1/3～1/2，针距6 h，催产水温23～25 ℃。注射催产剂后将亲本放入催产池，开流水刺激，密切观察亲本动态，若出现追逐，可将雌鱼捞起，轻轻挤压腹部，若有卵粒流出便可进行人工授精。

1.2.3 人工授精 由于长薄鳅精子量较少，挤出的精液很容易黏连在体壁上难以落入采卵盆中，因此采集精液时，一人将雄鱼抓起，腹部朝上，一人配合擦干生殖孔周围水分，轻压雄鱼腹部，用干燥的吸管吸取精液，吸取精液后将精液滴入预先配置好的精子保存液中，保存液参照丁淑荃等[2]的精子保存液配方。

将雌鱼抓起，并擦干生殖孔及尾部的水分，一只手從背部抓住雌鱼，一只手从尾部抓住，同时将尾部略朝背侧弯曲，以免造成鱼卵沿尾部流下造成鱼卵损失，注意从头向尾部方向慢慢推压腹部，将鱼卵挤入干燥的白瓷盆中，可连续推压多次，直到挤不出鱼卵为止，避免用力过度造成雌鱼损伤。

精卵采集完成后将保存液中的精子加入鱼卵中，用羽毛沿一个方向轻轻搅拌均匀，加入充分曝气的洁净清水激活精子完成受精，加入的水量为鱼卵量的2倍左右，缓慢搅拌1 min让精卵充分结合，然后将用清水将鱼卵带水漂洗干净。

1.2.4 人工孵化及胚胎发育观察 受精完成后将鱼卵倒入孵化桶进行孵化，刚开始水流适当加大，每隔15～20 min取样观察受精卵发育情况，拍照并记录发育时期，待原肠胚中期统计受精率。鱼苗破膜前期减小孵化桶的水流直到鱼苗完全出膜，观察鱼苗形态并统计出苗率。发育时期的划分参照文献[3]，有一半以上个体达到特定时期发育特征方可记录发育时间。

2 结果与分析

2.1 人工繁殖效果

分别于2017年6月14日和2017年7月11日对金沙江攀枝花江段和长江泸州江段采集的长薄鳅亲本进行人工催产（表1）。催产金沙江攀枝花江段采集的长薄鳅亲本2组，催产水温25 ℃，效应时间7 h，催产率100%，获得鱼卵3万粒，受精率50%左右，出苗1万尾左右，平均出苗率33%；催产长江泸州江段采集的长薄鳅亲本2组，催产水温24 ℃，效应时间7.5 h，催产率100%，其中第一组受精率65%，第二组受精率95%，第一组由于鱼卵过熟没有出苗，第二组出苗率80%，获得鱼苗8 000尾左右。

2.2 胚胎发育观察

长薄鳅卵受精后吸水膨胀，吸水后平均卵径约4.1 mm，比重与水相当，鱼卵无黏性，属典型漂流性卵。受精后约40 min动物极逐渐隆起形成胎盘。此后进入卵裂期，每隔20 min左右卵裂一次，3.0 h后卵裂期进入尾声，细胞逐渐变得很小以至于难以分辨，逐渐隆起，形成最初的胚层，3.5 h后胚层逐渐抬高，形似西洋绅士帽，覆盖于卵黄囊上方，此后胚层逐渐降低并向卵黄囊顶部靠近，随着囊胚层与卵黄囊的界限逐渐模糊，胚层下包开始意味着囊胚期的结束。受精后5.0 h，胚层逐渐下包至卵黄囊的1/2处，标志着原肠胚期的开始，受精后7.0 h胚层下包至卵黄囊的2/3处，进入原肠胚中期，受精后9.5 h胚层下包距卵黄囊底部约1/4，进入原肠胚晚期，此时胚层不对称，表明胚体分化开始。受精后11.0 h卵黄囊几乎完全被胚层包住，胚体逐渐形成，似一条粗线，神经板开始发育。受精后12.0 h胚层完全包裹卵黄囊，胚孔封闭，胚体清晰可见。受精后13.0 h胚体中部开始出现肌节。受精后14.0 h胚体近脑端开始出现椭圆形眼囊。受精后15.0 h眼囊后方出现一卵圆形的耳囊，脊索已经非常明显。受精后16.5 h胚体末端逐渐脱离卵黄囊，形成独立的尾牙。受精后22.5 h，鱼苗脊索伸直，开始出现耳石，此时鱼苗开始扭动身体。受精后28.0 h，鱼苗开始通过头部撞击和尾部摆动使得卵膜破裂，进而变成出膜仔鱼，出膜后鱼体平卧，身体透明，出膜仔鱼平均全长5.2 mm，具体发育时期及特征见表2。

3 小结与讨论

3.1 长薄鳅人工繁殖季节

6月14日催产的金沙江攀枝花江段的雌性亲本发育较好，雄性亲本催产后精子量少，遇水扩散状况不佳，因此该批鱼卵受精率低；7月11日长江泸州江段的雄性亲本发育达到最佳，但雌性亲本出现鱼卵过熟现象，过熟鱼卵流动性过强，部分鱼卵开始坍塌，受精后胚胎发育止于囊胚期，之后受精卵逐渐消融。由2次人工繁殖试验可以看出，长薄鳅雌雄发育不同步，雌性成熟较雄性早。5月底金沙江攀枝花江段雄性亲本还未达到最佳成熟期，加之长薄鳅精巢呈现细长的分支装结构，不易挤出精子，难以满足干法授精的操作要求，采用适当的精子保存液稀释后再进行授精能够解决这一问题，由2次繁殖结果推测，长薄鳅最佳繁殖季节应该在6月底，此时长薄鳅雌雄亲本发育较为同步，具体时间还需要通过进一步试验来验证。

3.2 亲本暂养

研究发现5月27日采集于金沙江攀枝花江段的长薄鳅亲本，在增殖放流站循环水系统中暂养17 d后，很大程度上亲本出现性腺退化现象。原因可能是野生鱼类亲本从天然水域过度到循环水养殖系统中时，由于养殖环境发生变化，引起鱼类的应激反应，使得性腺退化[4-8]。这种现象在其他鳅科鱼类中也有出现[9]，因此笔者推测，这可能与大多数鳅科鱼类的生活习性较其他游泳性鱼类不同有关，常规养殖环境很难模拟自然状态下鳅科鱼类的生活环境。因此通过野外生态调查，了解长薄鳅的生活及生态习性，进而模拟长薄鳅自然状态下的生活环境是阻止长薄鳅人工养殖条件下性腺退化的可行途径。

3.3 长薄鳅胚胎发育特点

长薄鳅卵没有黏性，属于漂流性卵，这一点类似于中华沙鳅[10]，而与大多数产黏性卵的高原鳅不同[11-13]；本研究长薄鳅受精卵吸水后卵膜径相较于梁银铨等[14]研究结果略大，这可能与长薄鳅个体大小、成熟情况或采样点不同有关。其次长薄鳅胚体长度在出膜前小于卵膜径，能够自由摆动身体，这一点与其他鳅科鱼以及多数鲤科鱼类有所差异。本研究长薄鳅胚胎发育时间较梁银铨等[14]研究结果有所提前，这可能与研究胚胎发育时水温略高有关。

参考文献：

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[4] 王志坚，殷江霞，张耀光.长薄鳅的精巢发育和精子发生[J].淡水渔业，2009，39（1）：3-7.

[5] 王志坚，殷江霞，张耀光.长薄鳅的卵巢发育和卵子发生[J].淡水渔业，2011，41（4）：32-37.

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[13] 洪 斌.长江紫薄鳅亲本培育及人工繁殖技术[J].安徽农学通报，2016，22（10）：123-129.

[14] 梁银铨，谢从新，胡小建，等.长薄鳅胚胎发育的观察[J].水生生物学报，1999，23（6）：631-635.