外周血hs-CPR、CD11b阳性细胞和CD64阳性细胞对早产儿早期感染的诊断价值

李 晨，姬静璐，王 玉，魏继红，李朝英，李少华，安 娜

近年来，早产儿发生率逐年上升，发达国家发生率可达5%～7%，我国早产儿发生率也日渐接近欧美国家水平[1]。早产儿由于出生体重低、免疫功能发育不完全，较正常婴儿更容易发生感染。低出生体重儿就有可能出现住院时间的延长，慢性肺部疾病的发生和神经系统发育的异常状况[2]。然而，新生儿的感染发病情况难以察觉，且发展迅速，患儿可迅速出现脓毒性休克和弥散性血管内凝血等。早产儿感染防治是早产儿管理的重要环节。目前，血液细菌培养为早产儿感染的金标准，但其有显著的缺陷，如阳性率低、费时、结果滞后等[3]，因此筛查出一种灵敏、快速的感染指标具有重要意义。本研究中采用流式细胞仪检测早产儿感染取得一定成果。

1 对象与方法

1.1 对象 选择我院儿科的早产儿共72例，性别分布为：男早产儿47例，女早产儿25例，胎龄平均为(31.06±0.73)周，平均出生体重为(1683±366)g。根据诊断标准将所有新生儿分为感染组和非感染组，其中感染组早产儿34例，非感染组为38例。在感染组的34例早产儿中，包括了15例败血症，14例细菌性肺炎和5例坏死性小肠结肠炎。新生儿的败血症诊断是参照《新生儿败血症诊疗方案》2003年版，坏死性小肠结肠炎与感染性肺炎的诊断是参照《实用新生儿学》第 3 版[4]。

1.2 主要仪器和试剂 SYSMEX XT-2000i 全自动五分类血细胞分析仪(日本希森美康公司)；全自动生化分析仪日立7600-20；FACS Calibur流式细胞仪；-80 ℃低温冰箱；全自动酶标仪(KHB ST-360)(上海科华生物有限公司) ；hs-CRP测定试剂盒(迈克生物公司)；CD11b、 CD64抗体(美国BD公司)。

表1 两组早产儿一般资料比较 (n；%)

1.3 方法 早产儿有疑似感染时，24 h内取外周全血3 ml，0.5 ml用于血常规检查，1 ml分离血清用于血清C-反应蛋白的检测，0.5 ml抗凝血用于流式检测，采用FACS Calibur流式细胞仪检测CD11b和CD64，免疫比浊分析法测定hs-CPR，光化学染色检测血小板，全自动五分类血细胞分析仪检测白细胞。

2 结 果

2.1 两组检测指标比较 两组在WBC和PLT无统计学差异(P>0.05);感染组CD11b、Hs-CRP和CD64显著高于非感染组(t=8.88,P<0.01；t=22.62,P<0.01；t=24.79,P<0.01，表2)。

表2 两组早产儿检测指标比较

注：与非感染组比较，①P<0.01

2.2 两组CD11b、Hs-CRP、CD64三项指示物的最佳截断值、AUC、敏感性、特异性、阳性预测值、阴性预测值和95%置信区间 AUC曲线下面积CD11b>CD64>Hs-CRP；敏感性CD11b>CD64>Hs-CRP；特异性CD11b>CD64>Hs-CRP；阳性预测值CD11b>Hs-CRP>CD64；阴性预测值CD11b>Hs-CRP>CD64。见表3和图1。

表3 两组患者CD11b、Hs-CRP、CD64三项指示物的最佳截断值、AUC、敏感性、特异性、阳性预测值、阴性预测值和95%置信区间

图1 CD11b、Hs-CRP和CD64的ROC曲线

3 讨 论

由于孕周32后，胎儿才逐步接受母亲的免疫球蛋白，因此，早产儿一般表现为免疫力低下，血清缺乏调理素，细胞吞噬功能差，表皮屏障功能比较差，患儿非常容易受到各种病原体的侵袭，导致许多不良结果的发生，比如坏死性肠炎、感染性肺炎或者败血症[5]。早产儿细菌早期感染无明显特征，诊断较困难。但是感染一旦发生，病情进展相当快速，有可能在几小时内出现休克和弥散性血管内凝血等恶性反应[6]。因此，对早产儿感染快速而准确的检测具有非常重要的临床意义。

本研究分别检测了患儿的WBC、PLT、CD11b、Hs-CRP和CD64，发现WBC和PLT在感染组和对照组无差异(P>0.05)。WBC是最常用的实验室感染指标，但据国外研究显示对严重细菌感染患儿进行WBC计数，感染组和非感染组无统计学差异[7]，本研究取得一致结果，这可能是由于许多非感染性疾病都可导致白细胞的计数增高。血小板(PLT)在伤口愈合、炎性反应、血栓形成等生理过程种都扮演着重要角色，25%的新生败血症PLT会减少，且随病情加深而增加减少率[8]，但本研究感染组和非感染组PLT无统计学差异，可能是由于多种疾病，如呼吸窘迫综合征、窒息、NEC、DIC 等情况中PLT均会减少，导致PLT检测的特异性较差。

本研究感染组CD11b、Hs-CRP和CD64显著高于非感染组(t=8.88,P<0.01；t=22.62,P<0.01；t=24.79,P<0.01)。近年来CRP得到越来越广泛的应用。CRP是一种急性时相蛋白，识别和激活某些影响炎症和防御机制的物质，在炎症状态下，CRP会发生数十倍的急剧增加，常作为细菌感染的早期指标。由于受到检测下限的影响,常规检测难以发现低水平的CRP变化，通过hs-CRP技术可提高CRP检测能力提高到0.15 mg/L，因而增强了其临床使用价值[9]，本研究发现感染组hs-CRP显著高于对照组。目前，不同研究中对于hs-CRP检测灵敏度各不相同，如以3 mg/L为诊断阈值时，诊断敏感性在49.3%～96%，其检测敏感性达64.0%。新生儿感染具有显著的低治疗风险和高风险漏诊特点，检测的敏感性尤为重要，而hs-CRP对新生儿的检测敏感性不足，因此不可将hs-CRP作为新生儿检测的唯一指标。

在正常人群中，CD64主要在单核、巨噬细胞和树突状细胞表面表达，在中性粒细胞的表达很低。但是，当细胞受到感染时，CD64在中性粒细胞的表面就会产生高表达的现象。临床上把CD64的高表达作为早产儿出现感染的指标。在一项白血病研究中，研究者认为，CD64具有良好的敏感性和特异性。本研究CD64的敏感性和特异性分别为0.84和0.90。CD11b是中性粒细胞表面含量最多的一种细胞表面抗原，接触到细菌后即可迅速增加，被认为是细菌感染的早期检测指标。围生期高危感染患儿可见中性粒细胞CD11b表达增高，在对四种白细胞表面标记物CD25、CD45RO、CD11b和CD64的研究结果中显示，对于极低出生体重儿而言，CD11b在晚发性败血症时同时拥有较高的敏感性和特异性[10]，在最佳临床诊断界值时中性粒细胞CD11b敏感性和特异性分别为91%和87%。本研究发现，CD11b敏感性和特异性分别为0.90和0.98，均高于CD64，这对于早产儿感染具有最高的敏感性和特异性。

综上所述，外周血CD11b阳性细胞对早产儿早期感染的诊断价值高于hs-CPR和CD64阳性细胞，检测仅需要少量检测样品，检测时间短。但在进一步的研究中应建立统一的临床检测标准，为今后推广使用提供理论基础。

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