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HPLC法测定香麻寒喘贴中盐酸麻黄碱的含量

2018-05-25姚其胜孙永喜陈仁燕

中国当代医药 2018年6期

姚其胜 孙永喜 陈仁燕

[摘要]目的 建立HPLC法测定香麻寒喘贴所含盐酸麻黄碱的含量。方法 采用Thermo C18色谱柱,以0.01 mol/L磷酸二氢钾(用磷酸调节pH值至2.5)-甲醇(96︰4)为流动相,检测波长为210 nm,柱温为25℃,进样量为5 μl。结果 盐酸麻黄碱在15.20~91.17 μg/ml范围内呈良好的线性关系(r=0.9997),盐酸麻黄碱平均回收率为98.78%,RSD为0.59%。测定3批香麻寒喘贴,平均含量为3.20 mg/100 cm2,RSD为0.31%。结论 本方法简单方便、准确率高、专属性强,可以作为检测盐酸麻黄碱含量的有效方法。

[关键词]香麻寒喘贴;HPLC;盐酸麻黄碱

[中图分类号] R927.2 [文献标识码] A [文章编号] 1674-4721(2018)2(c)-0017-04

[Abstract]Objective To establish a HPLC method in the determination of ephedrine hydrochloride in Xiangma Hanchuantie.Methods 0.01 mol/L potassium dihydrogen phosphate (adjusted to pH 2.5 with phosphoric acid)-methanol (96︰4) was used as the mobile phase with a Thermo C18 column and the detection wavelength was 210 nm.The column temperature was 25℃ and the sampling amount was 5 μl.Results A good linear relationship of ephedrine hydrochloride was shown in the range of 15.20-91.17 μg/ml (r=0.9997).The average recovery of ephedrine hydrochloride was 98.78% and the RSD was 0.59%.Determination of 3 batches samples,the total content of ephedrine hydrochloride was 3.20 mg/100 cm2 and the RSD was 0.31%.Conclusion The results show that this method is simple,convenient and accurate.It can be employed as an effective method for the determination of ephedrine hydrochloride content.

[Key words]Xiangma Hanchuantie;HPLC;Ephedrine hydrochloride

香麻寒喘貼是由麻黄、芥子、丁香、细辛、矮地茶、生姜六味中药材制成的贴膏剂,具有宣肺平喘、化痰止咳的作用,用于儿童轻、中度哮喘急性发作期寒饮停肺证的辅助治疗[1-2]。近年来,贴剂以其独特的优势逐渐得到人们的重视,其不仅具有良好的靶向和性价高的生物利用度,而且还可随时给药,简单方便[3-4],人们不断地对贴剂进行改进,在研究如何促进其渗透吸收、制备工艺等方面也做了很多相关工作[5-7]。贴剂的临床应用[8-9]非常广泛,现已普遍用于肩周炎[10]、颈椎病[11-12]、哮喘[13-14]、镇痛[15-16]等。为了保证贴剂的疗效与质量,本文对香麻寒喘贴中盐酸麻黄碱含量[17-20]进行测定,并对该含量测定方法进行方法学验证。实验显示,该方法简单,可以有效地检测香麻寒喘贴中盐酸麻黄碱的含量,准确地控制贴剂有效成分,保证产品质量,现报道如下。

1仪器与材料

Agilent 1260高效液相色谱仪(紫外检测器,型号:G1314F,美国安捷伦公司),MS105DU型电子天平。盐酸麻黄碱(批号:171241-201508)对照品来源于中国食品药品检定研究院;甲醇、乙腈为色谱纯,来源于美国天地有限公司;水为纯化水,其他试剂均为分析纯。香麻寒喘贴样品来源于翔宇药业股份有限公司,批号160601、160602、160603。

2方法与结果

2.1色谱条件

色谱柱为Thermo C18柱(4.6 mm×250 mm,5 μm);流动相为0.01 mol/L磷酸二氢钾(用磷酸调节pH值至2.5)-甲醇(96︰4),检测波长210 nm,流速1.0 mol/min,柱温为25℃,进样量为5 μl。理论板数按盐酸麻黄碱峰计算应不低于1000。

2.2溶液的制备

2.2.1供试品溶液的制备 取160601批样品6片,精密测量,除去盖衬,置于带塞锥形瓶中,精密加入甲醇50 ml,称定重量,浸泡过夜。超声处理30 min,放冷,再称定重量,用甲醇补足减失的重量,摇匀,过滤即得。

2.2.2对照品溶液的制备 取盐酸麻黄碱对照品适量,精密称定,用甲醇溶解,制成500 μg/ml的盐酸麻黄碱作为对照品储备液。用甲醇稀释,制成50 μg/ml的盐酸麻黄碱作为对照品溶液。

2.2.3阴性供试品溶液制备 取不含麻黄药材的阴性样品6片,精密测量,同供试品溶液制备处理方法,制成阴性样品溶液。

2.3专属性试验

分别精密量取对照品溶液、供试品溶液和阴性供试品溶液各5 μl,用高效液相色谱仪测定(图1)。在该色谱条件下阴性样品对样品峰无干扰;主峰保留时间在22 min左右,理论板数按盐酸麻黄碱峰计算>1000,提示该方法专属性良好。

2.4盐酸麻黄碱溶液线性关系试验

精密吸取对照品储备液适量分别置于10 ml量瓶中,加甲醇溶液稀释制成浓度分别为15.20、30.39、50.65、60.78、75.98、91.17 μg/ml的线性溶液,依法测定。以浓度为横坐标,峰面积为纵坐标绘制标准曲线。由试验结果可知,盐酸麻黄碱含量为15.20~91.17 μg/ml,线性方程为A=11.576C+2.3606,r=0.9997(n=6)(表1),峰面积和浓度均呈现良好线性关系(图2)。

2.5盐酸麻黄碱溶液精密度试验

取对照品溶液,重复测5次,并记录色谱图。结果显示,峰面积的RSD值为1.13%(表2),提示该方法的系统精密度良好。

2.6盐酸麻黄碱重复性试验

精密称取样品(批号:160601)6份,按供試品制备方法制备供试品溶液,依法测定,计算含量为3.13 mg/100 cm2,含量RSD为1.10%(表3),提示该方法的重复性较好。

2.7盐酸麻黄碱溶液稳定性试验

将供试品溶液于室温条件下放置12 h,每隔1 h测定1次。结果显示,在室温条件下放置12 h内,测得供试品峰面积的相对标准偏差为0.70%(表4),提示供试品溶液在12 h内稳定性良好。

2.8盐酸麻黄碱溶液回收率试验

取160601批样品(含量为3.13 mg/100 cm2)27片,平均分成9份,每份3片,精密测量,除去盖衬,置9个带塞锥形瓶中分为3组,分别加入适量对照品溶液与供试品中待测成分含量之比为0.5︰1、1︰1、1.5︰1,依法测定(表5)。由试验结果可知,含量测定各浓度下平均回收率为98.0%~101.0%,回收率RSD为0.59%,提示该方法准确度良好。

2.9盐酸麻黄碱耐用性试验

2.9.1柱温 在20、25、30℃柱温条件下,分别测定含量。结果显示,柱温在20~30℃变化时,盐酸麻黄碱含量为3.13 mg/100 cm2,RSD为0.69%,柱温变化对测定结果无明显的影响。

2.9.2流速 在流速为0.8、1.0、1.2 ml/min条件下,分别测定含量。结果提示,流速在0.8~1.2 ml/min变化时,盐酸麻黄碱含量为3.17 mg/100 cm2,RSD为1.06%,流速对测定结果无明显的影响。

2.9.3流动相比例 在流动相磷酸二氢钾与乙腈的比例为94︰6、96︰4、98︰2条件下,分别测定含量。结果提示,流动相比例在94︰6~98︰2变化时,盐酸麻黄碱含量为3.16 mg/100 cm2,RSD为0.71%,流动相比例变化对测定结果的影响较小。

2.9.4流动相pH值 在流动相pH值为2.3、2.5、2.7条件下,分别测定含量。结果提示,pH值在2.3~2.7变化时,盐酸麻黄碱含量为3.17 mg/100 cm2,RSD为0.89%,流动相pH值对测定结果的影响较小。

2.9.5检测波长 在检测波长为208、210、212 nm条件下,分别测定含量。结果提示,检测波长在208~212 nm变化时,盐酸麻黄碱含量为3.17 mg/100 cm2,RSD为0.91%,检测波长耐用性较好。

2.9.6色谱柱 采用Inertsil ODS-C18柱(4.6 mm×150 mm,5 μm)、Diamonsil C18柱(250 mm×4.6 mm,5 μm)、Agilent C18柱(150 mm×4.6 mm,5 μm),分别测定含量。结果提示,使用不同型号的色谱柱,盐酸麻黄碱含量为3.25 mg/100 cm2,RSD为2.82%,色谱柱的耐用性较好。

2.10香麻寒喘贴样品盐酸麻黄碱含量测定结果

取3批香麻寒喘贴,依法测定盐酸麻黄碱含量,结果如下(表7)。

3讨论

近年来,经皮给药制剂飞速发展,贴剂以其操作简单、安全方便的特点越来越受到医药行业的重视。香麻寒喘贴是纯中药制剂,安全有效、副作用小,普遍用于宣肺平喘、化痰止咳。经查阅文献,香麻寒喘贴含量测定的方法鲜有报道,为进一步控制药品质量,本文对香痳寒喘贴中盐酸麻黄碱的含量测定方法进行研究。

采用甲醇为溶剂,对样品进行超声溶解,操作过程简单、毒性低,用高效液相色谱法对香麻寒喘贴中盐酸麻黄碱的含量进行测定,常见含量测定方法有薄层色谱法、紫外色谱法及高效液相色谱法等,其中高效液相色谱法准确性高,并对该方法进行了专属性、线性、精密度、重复性、稳定性、回收率及耐用性验证。实验结果显示,该方法专属性强、准确度高,能精确控制药品质量,保证药物的准确有效。

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(收稿日期:2017-12-18 本文编辑:祁海文)