浅谈食品卫生检验中沙门菌属LAMP检测方法的应用

赖小丽

惠州卫生职业技术学院 广东惠州 516000

本研究对100件食品样本采用2种检测方法进行检测，分析LAMP检测方法的应用效果。现报告如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料

收集本省入境检验检疫局于2018年6月-2018年12月收集的110件食品样本作为研究对象，其中，生鲜肉样品24件，熟肉制品17件，水产品18件，非发酵豆制品21件，冰激凌5件，冷冻生肉12件，生食类蔬菜5件，鲜榨果汁8件。参考菌株为肠炎沙门菌。

1.2 方法

食品检验前增菌培养方法：《食品安全国家标准食品微生物学检验沙门氏菌检验》（GB4789.4-2016）标准为依据进行检验前增菌培养。各样本分别取25g装入无菌均值袋中，袋中装225mL缓冲蛋白胨水，采用拍打式均质器连续拍击无菌袋1-2min，置于37℃恒温箱中，持续培养12h。冷冻样品则置于45℃环境下进行解冻，持续解冻15min。

LAMP检测方法：各取1mL食品前增菌，离心机处理2min，转速10000r/min，核算提取上清液，再取1μL上清液作为DNA待检测模板。依据文献[2]设计引物，采用煮沸法提取并检测各样品DNA，LAMP反应体系25μL为：2.5μL（10倍浓度 LAMP缓冲液）+5.0μL（20mmol/L质量浓度的 MgSO4）+2.5μL（10mmol/L质量浓度的dNTP）+2.5μL（5mmol/L质量浓度的甜菜碱）+3μL（LAMP内外引物8:1混合物）+1μL（8U/μLBst聚合酶）+7.5μL（超纯水），将所有混合物混匀后，再将20μL密封液加入混合液中，最后在EP反应管盖中间用1μL显色液点中，盖紧管盖。反应管置于63℃水浴锅中进行反应60min，再取出反应管，将混合液反复颠倒反应混匀后，观察混合液颜色。判断标准：阳性：反应管显示为绿色，表明有核酸扩增；阴性：反应管显示为橙色，表明无核酸扩增。

1.3 统计学方法

采用SPSS20.0对数据进行分析、处理，计数资料采用例数表示，χ2检验，P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 两种方法检测各样品沙门菌阳性结果比较

110份食品样品中，LAMP检出阳性样品18份，阳性率为16.36%；分离培养法检出阳性样品10份，阳性率为9.09%，低于LAMP阳性检出率（P＞0.05），见表1。

表1 两种方法检测各样品沙门菌阳性结果比较[n（%）]

2.2 LAMP检测法沙门菌检测效果

以分离培养法结果为标准，LAMP检测敏感度为90.00%（9/10），特异度为 91.00%（91/100），准确度为 90.91%（100/110）。

3 讨论

本研究显示，LAMP对110件食品样品阳性检出率达16.36%，略高于分离培养法的9.09%，检测敏感度为90.00%（9/10），特异度为 91.00%（91/100），准确度为 90.91%（100/110），具有良好的检测效能。目前，LMAP检测法已能够对沙门菌stn、phoP、invA、fimY等基因进行检测，均有较好的检测敏感度与特异度，检测速度可缩短至3h，最低检测浓度可达到5.6×102CFU/mL，反应时间快，无需特殊仪器就能完成检测[4]。

综上分析，在食品卫生检验中采用LAMP检测法检测沙门氏菌，检测过程更为快捷、方便，且阳性检出率高，检测准确度较好，是食品样品沙门菌现场检测的一种有效方法。