气相色谱-三重四极杆串联质谱法检测贝类中得克隆残留量

黄福勇，董湘君，王 扬

(浙江省水产技术推广总站，浙江 杭州 311100)

得克隆(dechlorane plus，DP)，分子式为C18H12Cl12，是一种添加型高氯代阻燃剂，其工业品包含2种异构体，分别为syn-DP和anti-DP。由于其具有阻燃效率高、热稳定性好、与基材和基材中的其他组分不发生化学反应，且价格便宜等优点，所以作为替代灭蚁灵的新型氯代阻燃剂在全球推广[1-2]。2006年之后，得克隆在全球生物、大气、室内灰尘和底泥中广泛检出[3-7]，由此带来的环境污染问题引起了人们广泛关注。现有研究表明，DP具有明显的持久性有机污染物(persistent organic pollutants，POPs)特性，具有难降解、生物富集性、生物毒性等性质。缢蛏、贻贝等贝类都属于滤食性生物，能在体内软组织内积累、富集环境中的污染物质。这2种贝类是我国沿海重要的养殖对象，是理想的海洋环境监测指示性生物。本研究采用自动凝胶渗透色谱(GPC)技术进行样品的前处理，气相色谱-三重四极杆串联质谱(GC-QQQ)进行分析测定，建立了贝类中2种DP异构体的检测方法。

1 材料与方法

1.1 材料与仪器

气相色谱-三重四极杆串联质谱仪(Agilent 7890气相色谱仪配7000B三重四极杆质谱仪，HP-5MS色谱柱(30 m×0.25 mm)，美国Agilent公司)；VORIO凝胶渗透色谱仪(德国LCTech公司)；GPC标准柱(500 mm×25 mm，德国LCTech公司)；RE2000B型旋转蒸发仪(上海亚荣生化仪器厂)；SK-15GT超声波清洗仪(上海科导超声仪器有限公司)；XH-C型旋涡振荡器(常州迈科诺仪器有限公司)。

DP标准品(质量浓度均为50 μg·mL-1，美国AccuStandard公司)；正己烷、丙酮、环己烷和乙酸乙酯(HPLC级，美国TEDIA公司)；无水硫酸钠(分析纯，华东试剂有限公司)；海砂(化学纯，国药集团化学试剂有限公司)。

1.2 供试样品

样品为采自浙江温州市、台州市和舟山市农贸市场的缢蛏和贻贝鲜活样品。样品进行去壳、去内脏处理。

1.3 样品前处理

取20 g贝类肌肉样品(去内脏)，放入50 mL塑料离心管，加5 g海沙、10 g无水硫酸钠，旋涡振荡5 min，再加入30 mL正己烷/丙酮(1∶1，V/V)溶液，漩涡混匀后，超声提取30 min。5 000 r·min-1离心10 min，取上清液，旋转蒸发至近干，用乙酸乙酯/环己烷(1∶1，V/V)溶液定容到10 mL，待GPC净化。

将上述提取液转移至自动凝胶净化系统，进样管定容至10 mL，进样量为5 mL。流动相为乙酸乙酯/环己烷(1∶1，V/V)溶液，流速5 mL·min-1。收集25～40 min的流动组分并旋转蒸发至近干，正己烷定容至1 mL，待分析。

1.4 检测条件

1.4.1 色谱条件

进样口温度250 ℃，载气为高纯氦气，纯度≥99.999%，柱流量为1.0 mL·min-1；不分流进样，进样量1 μL；定量方法外标法。色谱柱升温顺序为90 ℃保留1 min后，以每分钟15 ℃的速度升温到300 ℃，保留10 min。

1.4.2 串联质谱条件

色谱-质谱接口温度280 ℃，电离方式EI，电离能量70 eV，离子源温度250 ℃，等电流35 μA，测定方式为MRM多重反应监测模式。分析参数见表1。

表1 得克隆质谱检测参数

注：*表示定量离子。

2 结果与讨论

2.1 样品前处理方法

由于贝类中含水量较大，前处理时应适量加入无水硫酸钠吸水。试验样品中加入海砂，可以起到分散样品的效果，避免因样品聚团板结而降低萃取效率。本试验采用超声萃取法进行样品处理，利用超声波辐射压强产生的强烈空化应效应、机械振动、扰动效应、高的加速度、乳化、扩散、击碎和搅拌作用等多级效应，增大物质分子运动频率和速度，增加溶剂穿透力，从而加速目标成分进入溶剂，促进提取的进行。应用上述方法进行样品萃取，具有快速、简便、提取效率高等优点。样品净化采用GPC净化法进行，该方法具有回收率高、平行性好等优点。

2.2 色谱条件

本研究先后选用DB-5MS毛细管柱[8]、DB-35MS毛细管柱和HP-5MS毛细管柱进行检测分析，最终选定HP-5MS毛细管柱进行色谱分析。HP-5MS毛细管柱在色谱峰分离、离子响应2方面具有显著优势，分离效果最好且响应值最好。研究发现，syn-DP组分中，在确定的分析条件下，出峰时间在22.93 min，监测离子响应最高为271.8(m/z)，anti-DP出峰时间为24 min，监测离子响应最高为296.9(m/z)，因此分别选定为母离子271.8和296.9，再尝试用多种碰撞能量轰击母离子，结合仪器自带软件，进行分析，选定子离子。

2.3 线性范围和定量下限

配制一系列浓度分别为0.1、0.2、0.4、0.5、1.0和2.0 mg·L-1的标准工作溶液，在上述色谱条件和质谱条件下进行测定，syn-DP线性方程为y=26 953.515 3x+1 582.531 2，anti-DP线性方程为y=5 978.329 2x+395.175 6，相关系数均为0.999。以信噪比为3估算定量下限(LOQ)，syn-DP和anti-DP的LOQ分别为0.2、0.5 μg·kg-1。

2.4 样品分析结果

通过对仪器分析参数、超声萃取和凝胶渗透净化色谱条件的优化，初步形成了海洋贝类中得克隆残留检测的方法，并应用该方法对分别采自温州、台州和舟山3地的42个海洋贝类样品进行检测分析，确定了方法检出限。syn-DP和anti-DP的检出限分别为0.1、0.3 μg·kg-1；syn-DP回收率为85.1%～103.6%，anti-DP回收率为84.3%～102.5%。42个海洋贝类样品中，22个样品检出得克隆，含量在13.69～113.43 ng·kg-1。

3 小结

近年来，得克隆作为新兴有机污染物得到广泛关注[9]。由于海洋贝类的特殊生活习性，比其它海洋生物更易富集有机污染物，常作为海洋污染指示性生物。本研究建立了海洋贝类中得克隆残留量的气相色谱-串联质谱测定方法。该方法以正己烷/丙酮溶液为萃取试剂，超声方法提取，经GPC净化，GC-MS/MS进行分析测定。该方法样品前处理简便，方法灵敏度高、定性可靠、定量准确，并成功应用于市售贝类产品中2种得克隆同分异构体测定。该方法为海洋生物中得克隆残留监测、海洋贝类作为得克隆指示性生物监测以及相关检测标准制定等多方面的研究提供了参考。

参考文献：

[1] 高珊. 大凌河河口鱼体内得克隆污染特征及暴露风险[D]. 大连：大连海事大学, 2013.

[2] HOH E, ZHU L, HITES R A. Dechlorane plus, a chlorinated flame retardant, in the Great Lakes[J]. Environmental Science & Technology, 2006, 40(4):1184.

[3] SVERKO E, TOMY G T, MARVIN C H, et al. Dechlorane plus levels in sediment of the lower Great Lakes[J]. Environmental Science & Technology, 2008, 42(2):361-366.

[4] 方力. 浙江省表层土壤和沉积物中卤代阻燃剂污染特征研究[D]. 杭州：浙江工业大学, 2012.

[5] BEN Y J, LI X H, YANG Y L, et al. Dechlorane plus and its dechlorinated analogs from an e-waste recycling center in maternal serum and breast milk of women in Wenling, China[J]. Environmental Pollution, 2013, 173(1):176-181.

[6] SVERKO E, TOMY G T, REINER E J, et al. Dechlorane plus and related compounds in the environment: A review[J]. Environmental Science & Technology, 2011, 45(12):5088-5098.

[7] XIAN Q, SIDDIQUE S, LI T, et al. Sources and environmental behavior of dechlorane plus：a review[J]. Environment International, 2011, 37(7):1273-1284.

[8] 刘合欢, 李会茹, 张文兵,等. 气相色谱-串联质谱法测定得克隆及其相关化合物在土壤样品中的含量[J]. 分析化学, 2017, 45(3):423-428.

[9] 李宇霖, 孟祥周, 赵丽芳,等. 环境中新兴有机污染物得克隆的研究进展[J]. 环境科学与技术, 2012, 35(2):79-83.