红景天提取物对西藏缺氧地区肉仔鸡早期免疫功能的影响

李 龙,刘锁珠,张振仓

(1.杨凌职业技术学院动物工程分院,陕西杨凌 712100;2.西藏农牧学院动物科学学院,西藏林芝 860000)

近几年，西藏商品肉鸡的饲养量不断增加。但在高海拔缺氧条件下，外来商品肉鸡表现出死亡率高的特点，这也是造成高海拔地区肉鸡饲养经济损失的主要原因之一。Li等（2014）研究发现，在西藏林芝地区（平均海拔2900 m）饲养AA肉鸡死亡率高达30%，其中饲养前期（1～14 d）死亡率占总死亡率的一半，缺氧引起的腹水死亡主要发生在中期（15～28 d）和后期（29～42 d），饲养前期的死亡率主要是非腹水引起的死亡。高海拔地区的缺氧环境使肉仔鸡孵化率很低（田发益等，2001），西藏地区饲养的肉鸡都是从内地购买并空运进藏，因此，降低早期过高的雏鸡死亡率对西藏和其他高海拔地区养禽业的发展至关重要。

饲养前期肉仔鸡免疫系统未发育成熟，更易受到病原菌感染，造成前期死亡率高，因此，饲养前期的免疫系统发育对肉雏鸡来说非常重要（Bar-Shira等，2003）。已有大量研究表明，缺氧环境会影响动物机体的体液免疫和细胞免疫（McNamee等，2013；Clambey等，2012），本课题组前期研究也表明，缺氧会抑制肉鸡免疫机能的发育，并与高海拔肉鸡早期非腹水死亡率高有关（待发表）。多年生草本植物红景天在欧洲和亚洲以其抗缺氧、抗抑郁和抗炎等作用已在临床上得到广泛应用，在体外、动物和临床试验中已证实，红景天能增强机体免疫机能和调节机体的免疫反应（Recio等，2016；Chou等，2011）。但目前对红景天提取物对肉鸡早期免疫机能的影响还未见报道，因此，本试验的目的是研究不同红景天提取物添加水平对肉鸡早期（0～14 d）死亡率和免疫机能的影响。

1 材料与方法

1.1 红景天提取物制备 本试验中红景天来自西藏农牧学院校内人工种植，经本校相关专家鉴定为大花红景天。取红景天干燥根部用蒸馏水清洗，在阴凉处风干，用粉碎机将红景天制成粉末，按质量体积比1：5（m/V）蒸馏水，室温放置24 h（冷渗法）获得红景天水提物，将上层液体转入另一容器中，残渣重复上述操作4次。将所有红景天水提物混合并用纱布过滤，8000 g离心2 min转移上清弃去残渣。上清利用旋转蒸发仪进行干燥处理，结果显示，1 g大花红景天根部可以生产约0.18 g红景天水提物粉末。通过液相色谱检测提取物中红景天苷、络塞维和酪醇的含量分别为25.21、10.44 mg/g和 0.03 mg/g。

1.2 试验动物与饲养管理 本试验中所用的450只1日龄健康雄性AA肉仔鸡从成都购买，出壳当天空运至西藏大学农牧学院实习牧场（平均海拔2986 m）。肉仔鸡全程自由采食和饮水。饲养密度为15只/m3，第一周室温保持在33 ℃，第二周室温保持在28 ℃。光照制度为23 h光照，1 h熄灯。

1.3 试验设计 450只1日龄雄性AA肉仔鸡按体重随机分为5组，每组6个重复，每个重复15只鸡，试验期为14 d。仔鸡饲喂玉米为基础的商品前期日粮。5个处理组分别在基础日粮中添加0（对照组）、0.1%、0.15%、0.2% 和 0.4% 的红景天水提物干粉。

1.4 样品采集与测定 每天观察鸡群，统计死亡鸡只数。在14日龄，利用抗凝采血管颈静脉采血，血样3000 g离心10 min，血浆保存于-80 ℃，用于测定血浆免疫球蛋白IgA，IgG和IgM。血浆免疫球蛋白水平通过ELISA试剂盒（武汉伊莱瑞特）测定，操作步骤按照说明书进行。免疫球蛋白的浓度通过标准品构建的标准曲线计算。

为测定肉鸡特异性抗体免疫应答，本试验选择给雏鸡口服抗原牛血清白蛋白（BSA）。Bar-Shira（2003）曾报道鸡仔7日龄后才会出现特异性抗体应答，因此，本试验从每个重复选取2只鸡免疫BSA（每只鸡每天5 mg），从8日龄到12日龄连续免疫5 d。最后一次免疫10 d后颈静脉采血，3000 g离心10 min，收集血浆，通过ELISA方法检测抗-BSA抗体的水平。通过连续稀释免疫过BSA的鸡血清绘制标准曲线，未稀释的血清定为1000。

1.5 数据统计分析 试验数据采用SPSS 17.0 one-way ANOVA进行单因素方差分析，差异显著时用LSD法进行多重比较，P＜0.05表示差异显著，死亡率通过卡方检验进行统计，结果以“平均值±标准差”表示。

2 结果

2.1 死亡率 由图1可知，与对照组相比，0.1%和0.15%红景天提取物组对肉鸡早期死亡率无显著影响（P＞0.05），但0.2%和0.4%红景天提取物组显著降低了肉鸡早期死亡率（P＜0.05）。

图1 不同红景天提取物添加水平对饲养早期肉鸡死亡率的影响

2.2 血浆免疫球蛋白 由表1可知，在饲养期14 d，与对照组相比，0.2%和0.4%红景天提取物组血浆中IgA和IgG水平显著提高（P＜0.05），0.1%和0.15%红景天提取物组与对照组间无显著差异（P＞0.05）。所有处理组对血浆中IgM水平无显著影响（P＞0.05）。

2.3 BSA抗体滴度 由图2可知，与对照组相比，0.2%和0.4%红景天提取物组血浆中BSA抗体水平显著提高（P＜0.05），但0.1%和0.15%红景天提取物组与对照组无显著差异（P＞0.05）。

表1 不同红景天提取物添加水平对早期肉鸡免疫球蛋白水平的影响            ng/mL

图2 不同红景天提取物添加水平对饲养早期肉鸡BSA抗体水平的影响

3 讨论

高原缺氧条件下，肉鸡饲养早期死亡率偏高是制约高原地区肉鸡饲养的一个重要问题。本研究发现，饲料中添加0.2%和0.4%红景天提取物显著降低高原缺氧条件下肉鸡饲养早期（0～14 d）死亡率。高海拔地区肉鸡饲养前期高的死亡率与缺氧引起的免疫机能发育受阻密切相关。缺氧应激会影响机体免疫应答反应，削弱免疫细胞的分化和功能，如T细胞和B细胞，进而影响免疫球蛋白和细胞因子的水平。Kleessen等（2005）研究发现，德国登山者在攀登过程中，血清中的IgA和IgM水平有降低趋势。Chohan等（1975）发现，高海拔地区居民血清中的IgA和IgG水平显著高于生活在海平面的居民，而且生活在海平面的居民达到高海拔地区两年后，血清IgA和IgG水平也显著高于海平面居民。本研究发现，与对照组相比，0.2%和04%红景天提取物组显著提高肉鸡血液IgA和IgG水平。Mishra等（2010，2006）在体外和体内试验中发现，红景天提取物能改善不良状态下的免疫抑制作用，但在正常情况下红景天提取物对免疫的改善作用不明显。本课题组通过对比高氧组（氧气百分比25.8%～26.5%）和低氧组（氧气百分比20.7%～21.4%）肉鸡前期免疫机能发现，缺氧会削弱肉鸡前期非特异性免疫应答，降低血液中免疫球蛋白IgA和IgG水平（数据待发表），证实了缺氧条件造成肉鸡的免疫抑制。综合以上结果说明，红景天提取物能改善缺氧引起的肉鸡免疫抑制。

除了改善肉鸡的非特异性免疫应答，红景天提取物还会改善肉鸡特异性免疫应答。本试验发现，饲料中添加0.2%和04%红景天提取物能显著提高血浆中特异抗原BSA的抗体水平。徐业芬等（2005）也发现，饮水或肌注红景天提取物能显著提高藏鸡新城疫抗体水平，并且存在计量依懒性。在体外细胞模型和哺乳动物试验中发现，缺氧影响免疫应答的原因可能是因缺氧会抑制TCR信号通路或诱导细胞凋亡，从而影响T细胞的功能（Sitkovsky等，2005）。此外，缺氧还会引起细胞氧化损伤。免疫细胞对氧化应激特别敏感，免疫细胞表面存在大量多不饱和脂肪酸胶，并且缺乏维生素E、锌等抗氧化物质，这可能是缺氧影响免疫的另一个原因（Meydani等，1995）。但在家禽上，缺氧对免疫机能影响的机理可能会有不同，还需进一步研究。

4 结论

在本试验中，日粮添加0.2%和0.4%红景天提取物能显著降低肉鸡高原缺氧条件下饲养前期的死亡率，这与其能改善雏鸡免疫机能有关，结合实际生产成本，以0.2%红景天提取物添加量为最佳。

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