PI3K/mTOR抑制剂NVP—BEZ235对乳腺癌小鼠移植瘤生长的抑制作用

王欢欢 丁米娜 姜春如 陈丽艳

摘 要：乳腺癌是女性最常见的恶性肿瘤之一。NVP-BEZ235是PI3K和mTOR双重靶向抑制剂，具有抑制多种肿瘤恶性进展的作用[1]，但机制仍不明确。因此，我们利用乳腺癌MCF-7细胞建立小鼠移植瘤模型，观察不同浓度NVP-BEZ235对移植瘤生长的影响，并初步探讨其机制。

关键词：乳腺癌；小鼠；移植瘤

1 材料

裸鼠30只购自北京维通利华实验动物技术有限公司，NVP-BEZ235购自Selleck公司，MCF-7由延边大学肿瘤研究中心提供。

2 方法

2.1 MCF-7乳腺癌移植瘤模型的建立与分组给药

培养乳腺癌MCF-7细胞，消化离心，制备细胞悬液，用PBS调整细胞密度为5×10.6/mL，每只裸鼠乳腺脂肪垫下注射0.2mL，建立裸鼠乳腺癌移植瘤模型。30只实验裸鼠随机分为3组，（1）对照组：生理盐水0.1mL，灌胃；（2）NVP-BEZ235高剂量组：60mg/kg/day，灌胃，（3）NVP-BEZ235低剂量组：30mg/kg/day，灌胃。各组均每天一次。

2.2 观察药物对移植瘤生长的影响

给药期间，每2天用游标卡尺测量裸鼠肿瘤的最长径（a）和横径（b），计算肿瘤体积V=a×b.2，绘制肿瘤生长曲线。

2.3 蛋白免疫印迹检测Ki-67、LC3B的表达

肿瘤组织匀浆提取蛋白，BCA法测定蛋白含量，SDS-PAGE电泳分离，转膜，牛奶封闭，一抗4℃过夜，二抗孵育2h，ECL化学发光，凝胶呈像仪检测结果，使用Image J软件进行半定量分析。

2.4 统计方法

应用SPSS软件进行数据处理，以P<0.05表示差异具有统计学意义。

3 结果

3.1 NVP-BEZ235抑制MCF-7乳腺癌裸鼠移植瘤的生长

接种后第4天各组均见肿瘤生长，成瘤率100%，移植瘤生长基本相同。随着时间的延长，肿瘤体积逐渐增大，20-28d对照组生长明显快于给药组（P均<0.05），高剂量组肿瘤生长最慢，各组肿瘤生长情况见图1。结果表明NVP-BEZ235对裸鼠体内的肿瘤有明显抑制作用。

3.2 NVP-BEZ235对裸鼠移植瘤中Ki-67、LC3B的影响

蛋白免疫印迹结果显示，NVP-BEZ235给药组肿瘤组织中增殖相关蛋白Ki-67、LC3B的表达明显低于对照组，差异具有统计学意义（P<0.05，P<0.05），这表明NVP-BEZ235抑制肿瘤组织增殖可能与诱导细胞自噬有关。见图2。

4 讨论

目前研究表明，自噬与肿瘤发生发展密切相关。诱导肿瘤细胞发生自噬是化疗药物抑制肿瘤细胞增殖的重要机制之一。我们的前期研究表明，NVP-BEZ235体外应用对乳腺癌细胞具有抑制增殖、诱导细胞凋亡及自噬的效应[2]。因此本论文进一步探讨了其对MCF-7乳腺癌小鼠移植瘤生长的抑制作用。本研究首先构建了MCF-7乳腺癌裸鼠移植瘤模型，并检测了NVP-BEZ235对移植瘤的生长抑制作用。研究结果显示，NVP-BEZ235对MCF-7乳腺癌裸鼠移植瘤具有良好的生长抑制作用，并且能够下调移植瘤组织中Ki-67和LC3B的表达。LC3B是自噬重要的标志性蛋白，因此研究結果提示，NVP-BEZ235可诱导乳腺癌细胞发生自噬。

综上所述，NVP-BEZ235能够有效抑制MCF-7乳腺癌裸鼠移植瘤生长可能与其抑制肿瘤细胞增殖、诱导细胞自噬有关，具体作用机制有待于进一步深入探讨。

参考文献：

[1] Li Y， Zhao H， Wang Y， et al. Isoliquiritigenin induces growth inhibition and apoptosis through downregulating arachidonic acid metabolic network and the deactivation of PI3K/Akt in human breast cancer[J]. Toxicol Appl Pharmacol， 2013，272：37-48.

[2]王鹤儒，于洋，陈丽艳.PI3K/mTOR抑制剂NVP-BEZ235抑制人乳腺癌细胞增殖及促进细胞自噬[J].临床与实验病理学杂志，2016，36（8）：1139-1141.