蓝光对龙眼细胞培养及类黄酮代谢的影响

李汉生 姚德恒 陈晓慧 刘炜婳 陈裕坤 林玉玲 王云 赖钟雄

摘 要 采用搅拌式生物反应器放大培养龙眼悬浮细胞，探讨蓝光对龙眼细胞生长及类黄酮积累的影响。基于已建立并优化的龙眼细胞悬浮培养体系，首先研究龙眼细胞在黑暗和蓝光的培养过程中，细胞生长量、类黄酮含量、细胞活力、培养液的底物消耗量等的变化情况。结果发现：龙眼细胞培养9 d后，蓝光的细胞干重比黑暗增长了0.28 g/L，类黄酮含量增长了0.77 mg/g。细胞培养前期蓝光的培养液蔗糖消耗速度慢于黑暗培养，此后蔗糖含量均稳定在2 g/L。培养过程中，蓝光培养的还原糖含量均高于黑暗培养，蓝光的磷酸盐的消耗量基本大于黑暗培养。其次，通过qPCR技术分析光信号转录因子DlHY5、调控基因DlPAP1及类黄酮途径合成基因DlCHS的表达差异。结果表明蓝光可能通过光信号转录因子DlHY5调控基因DlPAP1的表达，进而调控龙眼类黄酮代谢途径合成基因DlCHS的表达，从而导致类黄酮的积累。

关键词 龙眼；细胞培养；生物反应器；蓝光；类黄酮

中图分类号 S667.2 文献标识码 A

Abstract The effects of blue light on the growth of longan cells and flavonoid accumulation were investigated using a stirred bioreactor with enlarged culture of longan cells in this study. Based on the established and optimized suspension culture system of longan cells， the changes of the growth of cells， flavonoid contents， cell vitality， substrate consumption and so on were firstly studied in the dark and blue light treatments. Results found that the dry weight of blue light increased by 0.28 g/L and the flavonoid contents increased by 0.77 mg/g after 9 days culture. The sucrose consumption under blue light was slower than that under the darkness in the early stages of culture， and then the sucrose contents were stable at 2 g/L. In the process of culture， the contents of reducing sugar under blue light was higher than that under darkness， and the phosphate consumption under blue light was more than that under darkness. Then， the expression of light signal transcription factor DlHY5， regulatory gene DlPAP1 and flavonoid biosynthesis pathway structural gene DlCHS were analyzed by qPCR. Results indicated that the regulation of flavonoid accumulation in longan by blue light is probably through the light signal transcription factor DlHY5， and then regulated the expression of flavonoid biosynthesis pathway regulatory gene DlPAP1 and structural genes DlCHS.

Keywords Dimocarpus longan Lour.； cell culture； bioreactor； blue light； flavonoids

doi 10.3969/j.issn.1000-2561.2018.04.013

龍眼（Dimocarpus longan Lour.）是无患子科（Sapindaceae）龙眼属植物，具有很高的药用和营养价值，自古以来被视为珍贵的补品。龙眼中药用成分众多，主要的次生代谢产物就包括类黄酮物质[1]。类黄酮在植物体内具有重要的生理学意义，它们控制着生长素的运输、紫外保护和抵御作用等[2]。另外，黄酮类化合物也是一种生物性很强的天然氧化剂，具有抗癌防癌、抗衰老等医疗保健功能[2]。

类黄酮的提取主要以植物果皮、果肉、果核、叶片等为材料，存在培养周期较长、成本高等诸多局限。而通过生物反应器培养植物细胞具有环境可调控、周期短、生产效益高、投资少等优势[3]。本实验室的搅拌式反应器（Biostat? B， Sartorius Stedim Biotech）是近年来出现的新型细胞培养生物反应器，较传统的反应器具有智能化程度高、实时监测、易保持无菌状态等优点。目前，已经超过200种药用植物进行过细胞悬浮培养研究，但只有少数植物实现了工厂化，其中以红豆杉悬浮细胞[4]、紫草悬浮细胞[5]大规模培养为代表性成果。而关于龙眼悬浮细胞在生物反应器中的相关研究至今无人报道。

在植物悬浮细胞的培养过程中，前人已通过不同的方法来刺激代谢途径以调控目标次生产物的合成量，其中光调控被看作改变植物细胞代谢产物合成的重要方法之一[6]。关于贯叶连翘悬浮细胞的研究表明，光照对悬浮细胞生长量和类黄酮含量有着促进作用[7]。钟春水等[8]的研究结果发现，光照条件下金花茶悬浮细胞生长量得到了提升，且光照对PPO（PolypHenol oxidase）、DFR（Dihydroflavonol4-reductase）、LAR（Leucoanthocyanidin reductase）3个基因的表达量及儿茶素总量均有极显著影响。植物对光的响应途径是复杂且精细的，HY5（Long Hypocotyl 5）作为光信号转导的重要调控因子，能够正调控类黄酮的合成[6]。而HY5调控类黄酮的合成是通过转录因子PAP1（an R2R3-MYB transcription factors）的转录激活[9]。另外，CHS （Chalcone sythase）是类黄酮代谢合成途径中的第一个关键酶[10]。

在本实验室董慧雪等[11]关于不同光质对龙眼愈伤组织类黄酮含量的影响研究中，就已发现蓝光最有利于促进类黄酮的积累。因此，本研究采用搅拌式生物反应器放大培养龙眼悬浮细胞，探讨蓝光对龙眼细胞生长及类黄酮积累的影响。基于已建立并优化的龙眼细胞悬浮培养体系[12]，首先研究了龙眼细胞在黑暗和蓝光的培养过程中细胞生长量、类黄酮含量、细胞活力、培养液的底物消耗量（蔗糖、还原糖、磷酸盐）、培养体系的pH及溶氧的变化情况等；其次，通过qPCR技术对光信号转录因子DlHY5、调控基因DlPAP1、类黄酮途径合成基因DlCHS进行表达量差异分析，探讨蓝光对龙眼类黄酮合成的分子机制。这些研究将为龙眼细胞反应器大规模培养类黄酮的工业化进程提供理论指导和实验依据。

1 材料与方法

1.1 材料

龙眼悬浮细胞培养体系参照赖钟雄等[12]建立的方法。在生物反应器中，龙眼悬浮细胞采用MS+20 g/L蔗糖+1.0 mg/L 2，4D+100 mg/L肌醇的液体培养基进行培养。龙眼幼胚诱导胚性愈伤组织、悬浮细胞、不同组织部位的材料均来源于‘红核子品种。

1.2 方法

1.2.1 龙眼悬浮细胞培养的条件 龙眼悬浮细胞培养参照赖钟雄等[13]建立的方法，并应用于生物反应器培养（表1）。

1.2.2 龙眼细胞的生长量测定 收集第1～9天的龙眼悬浮细胞，离心后去除多余培养液，于-20 ℃保存后进行冻干，最后测定干重。

1.2.3 龙眼细胞中类黄酮含量测定 总黄酮提取参照李琨等[14]的方法并适当改良。将龙眼愈伤组织进行冻干处理2 d，天平称取0.2 g材料，首先加入60%的乙醇溶液10 mL，通过超声波清洗器（KQ-200SPDE）提取1 h（60 ℃，功率300 w），冷却静置20 min，再通过离心机（TGL-15B）离心10 min（8 000×g，20 ℃）。然后吸取5 mL上清液于新试管中，并稀释至10 mL。最后取龙眼愈伤组织提取液5 mL，精确加入0.3 mL 5%亚硝酸钠溶液（NaNO2），摇匀后放置6 min，加入0.3 mL10% 硝酸铝溶液（Al（NO3）3），摇匀后放置 6 min，加入4 mL 20% 氢氧化钠溶液（NaOH），加入10 mL 60%乙醇溶液定容至10 mL刻度线，摇动均匀并静置15 min。通过紫外可见分光光度计（T6）检测吸光度，波长设置为510 nm，根据所建立的标准曲线计算龙眼愈伤组织的类黄酮含量。

1.2.4 细胞活性测定 细胞活性测定参照张建文等[15]

的方法并适当改良：培养液中龙眼悬浮细胞经8 μm滤膜抽滤后，在15 mL的试管中加入0.5 g鲜重龙眼细胞、2.5 mL 0.1 mol/L Na2HPO4-NaH2PO4 缓冲液（pH为7.0）、2.5 mL质量浓度为4 g/L 的2，3，5-氯化三苯基四氮唑（TTC）溶液；接着将溶液混匀后，置于25℃温度下暗处理13-16 h，离心去上清液，并用蒸馏水漂洗3次；然后向龙眼细胞中加入5 mL甲醇，60 ℃水浴50 min，期间摇动数次；最后在室温下放置至细胞无色，离心后取上清液，通过分光光度计测定吸光值A，波长为485 nm。

1.2.5 细胞培养底物消耗量测定 可溶性糖的测定参照苯酚法[16]并适当改良，收集1～9 d龙眼悬浮细胞培养液，在-20℃冰箱保存备用。吸取0.5 mL培养液于规格为50 mL的试管中，然后加入1 mL 9%苯酚溶液，再慢速加入5 mL浓硫酸，将试管溶液摇动混匀，最后加入蒸馏水并将其定容到10 mL。常温下静置30 min进行显色反应，吸取1 mL待测液于规格为20 mL的新试管，用蒸馏水稀释至15 mL，并通过分光光度计测定吸光度，波长设置为485nm，根据所建立的标准曲線计算培养液的蔗糖含量。

还原糖的测定参照3，5-二硝基水杨酸法[17]并适当改良，吸取2 mL培养液于规格为50 mL的试管中，再向培养液中加入1.5 mL 3，5-二硝基水杨酸试剂，将试管溶液摇动均匀。通过90 ℃水浴锅（JK-WB-4A）中加热5 min，取出试管后，立即进行冷却，再加入蒸馏水并将其定容到20 mL，摇动均匀。并通过分光光度计测定吸光度，波长设置为540 nm，根据所建立标准曲线计算出培养液的还原糖含量。

磷酸盐参照李永远等[18]的测定方法并适当改良：吸取5 mL培养液于规格为50 mL试管中，首先加入3 mL钼酸钠-硫酸溶液，再向溶液中加入0.4 mL硫酸肼溶液，将试管摇动均匀，通过90 ℃水浴锅中加热10 min后，立即放入冷水中进行冷却。并通过分光光度计测定吸光度，波长设置为660 nm，根据所建立的标准曲线计算培养液的磷酸盐含量。

1.2.6 溶氧量测定 PO2（溶氧量）的值通过Sartorius Stedim Biotech的光学传感器技术进行测量。传感器被集成到各种系统中，在 UniVessel?SU中，传感器贴片位于一次性容器的底部，可直接通过自由空间光电子对传感器进行读数。

1.2.7 基因表达定量分析 以龙眼愈伤组织作为材料，采用TriPure Isolation Reagent（Roche）按操作说明书进行龙眼愈伤组织总RNA的提取。所获得的总RNA采用1.0%非变性琼脂糖凝胶电泳和紫外分光光度计进行完整性、纯度和浓度的检测。检测质量合格的总RNA放置于-80 ℃超低温冰箱保存，待后续使用。采用PrimerscriptTMRT Reagent Kit逆转录cDNA用于qPCR。参考Lin等[19]建立的方法，以龙眼EF-1a、elF-4a和DlFSD1a作为内参基因，通过2-ΔΔCt法进行相对表达量计算。采用SYBR? Premix Ex Taq? II （TliRNaseH Plus； Takara， Japan）在LightCycler480定量仪上进行龙眼细胞表达模式的分析。龙眼基因qPCR引物序列见表2。

1.3 数据分析

每个处理设3次生物学重复，试验数据统计分析使用SPSS V19.0 软件，单因素方差分析采用Duncan法，显著性水平设为p<0.05。制图采用GraphPad Prism 6.0软件。

2 结果与分析

2.1 搅拌式生物反应器

龙眼细胞在一个5 L的搅拌式生物反应器（Biostat? B， Sartorius Stedim Biotech）中进行，主要由1个5 L的双壁容器（UniVessel?）、1个控制系统（BioPAT? MFCS SCADA）、1个冷水机（LF-30）、1个空气发生器（东方汇利PGA-10L）组成（图1）。内有灵敏度较高的pH计、溶氧电极、温度探测计可实时输出反应器的pH、溶氧、温度。带环形分布器的分布管和带微孔分布器的分布管实现密集通气功能。三叶扇形搅拌器（直径70 mm）实现搅拌功能。该生物反应器配置配套的在线控制系统，实现反应体系的温度、搅拌速度、通气量等参数的控制。通过BioPAT? MFCS 4软件对生物反应器进行实时监测。

2.2 龙眼不同组织部位的类黄酮含量差异

类黄酮是龙眼中最为重要的次生代谢产物之一。通过对龙眼不同组织部位中类黄酮的含量进行对比，结果见图2，龙眼果壳的类黄酮含量最高（49.07 mg/g），而果肉的含量较低（16.42 mg/g）。龙眼愈伤组织类黄酮含量明显低于不同组织部位，但是通过生物反应器的放大培养，其类黄酮的产量、效益、周期均优于不同组织部位。同时，结果也发现蓝光培养下的龙眼愈伤组织类黄酮含量高于黑暗培养。

2.3 蓝光对龙眼悬浮培养细胞的生长量和类黄酮含量的影响

在搅拌式生物反应器中，龙眼悬浮细胞分别在黑暗和蓝光条件下培养9d，其生长量的变化趋势见图3。黑暗培养的细胞经过3d的延迟期，从第3～7天处于对数生长期，第7天开始基本进入平台期，细胞生长缓慢。以同样的接种浓度，蓝光培养下细胞的延迟期、生长期、平台期与黑暗培养较为一致。其中，蓝光培养的细胞生长率最高出现在第4～5天，而黑暗培养出现在第3～4天。蓝光培养下细胞生长量从第5天开始略微高于黑暗培养。因此，可推测蓝光对龙眼细胞的生长量有着微弱的促进作用。

在生物反应器中，黑暗和蓝光培养下龙眼细胞合成类黄酮的情况见图4。黑暗和蓝光培养过程中，龙眼细胞类黄酮含量都得到了提升。黑暗条件下，第1～6天类黄酮含量增长缓慢，从第6天开始合成率小幅提升，第9天达到最高值3.33 mg/g。蓝光条件下，第1～4天类黄酮含量增长缓慢，从第4天开始类黄酮合成率大幅提升，第9天达到最高值4.10 mg/g。生物反应器中，蓝光较之黑暗培养，龙眼细胞干重增长0.28 g/L，类黄酮含量增长0.77 mg/g。因此，尽管蓝光对龙眼细胞生长量有着微弱得促进作用，但对类黄酮的积累起到明显的促进作用。

2.4 蓝光对龙眼悬浮培养细胞活力的影响

细胞活力是衡量细胞在适宜环境中生长和分裂的能力，通常细胞活力与离子不可渗透的细胞膜的存在有关[20]。通过TTC法测定龙眼悬浮细胞中的酶活性，可直接反应细胞的活力，即细胞活力越小，则A值越低[15]。在黑暗和蓝光培养中，龙眼细胞的细胞活力变化较为一致（图5）。黑暗和蓝光培养过程中，龙眼细胞的活力变化，这或许就是蓝光对龙眼细胞生长量不显著的原因所在。黑暗培养条件下，第1～3天细胞活力值呈现下降趋势，第3天为培养过程中的最低值0.271。这可能是因为培养的初期龙眼细胞需要一个调整适应环境的过程。第3～6天细胞活力呈现上升趋势，至第6天细胞活力值为0.415，此后又开始下降。第6天以后细胞活力下降的原因可能是龙眼细胞生长量达到平臺期，培养液底物消耗殆尽，不足以提供此阶段龙眼细胞的生长需要。

2.5 蓝光对龙眼悬浮细胞培养液底物消耗量的影响

蔗糖是植物悬浮细胞培养中最为常用的一种碳源。关于玫瑰茄悬浮细胞的研究已经发现蔗糖是其细胞生长中最适合的碳源[21]。黑暗和蓝光培养过程中，细胞培养液的蔗糖含量变化情况见图6。在黑暗培养过程中，第1～5天蔗糖含量呈现大幅下降的趋势，第5～9天蔗糖含量维持在2 g/L左右。第1～5天蔗糖含量大幅下降，可能是因为龙眼细胞培养前期需要摄取大量的蔗糖。而在蓝光培养过程中，第1～6天蔗糖含量呈现大幅下降趋势，此后也维持在2 g/L左右。其中，细胞培养的前期蓝光的蔗糖消耗速度慢于黑暗培养，可能是蓝光生长量略高于黑暗培养的原因所在。根据相关文献[15]报道当植物细胞的状态较差，将加快蔗糖水解产能作为一种防御措施，因此黑暗培养的蔗糖消化率较快。另外，还发现蔗糖的消耗量和龙眼细胞类黄酮合成量呈反比。

还原糖也是植物悬浮细胞培养中最为常用的一种碳源。黑暗和蓝光培养过程中，细胞培养液的还原糖含量变化情况见图7。在黑暗培养过程中，第1～4天还原糖呈现上升趋势，在第4天达到最高值16.29 g/L；第4～9天还原糖呈现下降趋势。龙眼细胞培养的初期，由于部分蔗糖分解成还原糖，还原糖大幅提升。此后为提供细胞生长，还原糖开始下降。在蓝光培养过程中，第1～5天还原糖呈现上升趋势，此后下降。其中，黑暗培养的还原糖含量均高于蓝光培养，这可能是因为相比蓝光培养，黑暗培养过程中有更多的蔗糖分解成还原糖，而蓝光中的蔗糖更多的提供于龙眼细胞的生长。

磷酸盐也是植物细胞培养不可或缺的原料之一[22]。在黑暗和蓝光培养过程中，细胞培养液的磷酸盐含量变化情况见图8。黑暗和蓝光培养中磷酸盐下降的趋势较为一致。同时，还发现磷酸盐消耗量与龙眼细胞生长量、类黄酮合成量呈反比，并且蓝光磷酸盐的消耗量大于黑暗培养。这可能是蓝光细胞生长量略高于黑暗培养，蓝光类黄酮含量显著高于黑暗培养的原因所在。

2.6 蓝光对龙眼悬浮细胞培养液pH的影响

在植物悬浮细胞培养过程中，pH通常在起始阶段出现下降，延滞期结束时开始回升[15， 23]。如图9所示，黑暗培养过程中，第1～3天培养液pH下降至4.95，至第6天回调至5.92，此后略微下降。而蓝光培养过程中，第1～3天培养液pH下降至5.13，至第6天回调至5.88，第6～9天 pH也略微下降。第1～5天，蓝光pH明显高于黑暗培养，这可能是因为培养初期龙眼细胞状态较差，而蓝光具有修复细胞功能[24]，阻断了部分破碎细胞内含物外泄。

2.7 蓝光对龙眼悬浮细胞培养液PO2的影响

在黑暗和蓝光培养过程中，细胞培养液PO2的变化趋势较为一致（图10）。第1～4天黑暗和蓝光的 PO2分别提升至118.6%、130.5%，第4～9天呈下降的趋势，而第7～9天基本维持在80%。第1～4天PO2迅速提升，可能是因为培养初期聚合的龙眼悬浮细胞不断被生物反应器搅拌松散，培养液中的氧气得到回升。第4～9天呈下降的趋势，可能是因为龙眼细胞不断增长消耗了培养液中的氧气。

2.8 龙眼悬浮细胞在蓝光处理下的类黄酮合成关键基因的表达量变化

本研究以黑暗为对照，采用荧光定量PCR检测在蓝光处理下的龙眼细胞类黄酮代谢相关基因的表达量变化（图11）。在黑暗培养过程中，DlHY5与DlPAP1的表达量呈现相同的变化趋势。而第1～9天，DlCHS的表达量呈现缓慢上升的趋势，第9天达到最高值0.942。但并未发现3个基因之间有明显的联系。这可能是因为黑暗条件并不能激发DlHY5的表达，DlHY5失活使得类黄酮合成基因不能表达[6]。而DlCHS的表达量缓慢上升，可能是因为培养时长也能够影响类黄酮的积累。在蓝光培养过程中，第1～9天，DlHY5、DlPAP1、DlCHS的表达量均呈现上升趋势，第5天后表达量均显著提升，3个基因表达趋势基本一致。因此，推测蓝光可能通过光信号转录因子DlHY5调控DlPAP1的表达，进而调控龙眼类黄酮代谢途径结构基因DlCHS的表达，导致类黄酮的积累，这种调控机制有待遗传转化进一步验证。

3 讨论

3.1 蓝光促进龙眼悬浮培养细胞的生长及类黄酮的合成

龙眼细胞规模化生产中，影响生物反应器培养的主要因素为化学微环境、气体微环境及光照微环境等[25]。其中，通过光照影响龙眼细胞培养是一种较为简便且有效的调控手段[26]。在生物反应器培养龙眼细胞过程中，发现蓝光可促进龙眼细胞的生长和类黄酮的合成。王娟等[27]的研究发现光照条件对西洋参悬浮细胞生长、人参皂苷及西洋参多糖合成有显著影响。王璟[7]在贯叶连翘悬浮细胞摇瓶培养中，也发现光照可提升悬浮细胞生长量和类黄酮含量。在龙眼细胞培养液底物消耗量的测定中，蓝光培养的还原糖、磷酸盐消耗量大于黑暗培养；在龙眼细胞活力测定中，蓝光培养的细胞活力略高于黑暗培养。这些也从侧面解释蓝光对龙眼细胞生长及类黄酮合成的促进作用。目前国内外多数研究停留在光照对摇瓶培养植物细胞的影响，而本研究通过生物反应器的培养，实时统计观察细胞活力、底物消耗量、pH、PO2等多项参数，从而建立培养参数之间的联系，更为直观地获取到光照对龙眼细胞培养的差异。因此，蓝光可能加速了龙眼细胞对营养物质（还原糖、磷酸盐）等的吸收，提升了细胞活力，促进细胞分化生长，进而促进了类黄酮的代谢合成。

3.2 蔗糖、还原糖、磷酸盐是影响龙眼悬浮细胞培养和类黄酮含量的主要因素

在生物反应器培养龙眼细胞的进程中，蔗糖、还原糖、磷酸盐逐渐被消耗，这些都为龙眼细胞增殖提供原料[28]。前人的研究中已经表明糖是植物体内重要组成成分，不仅为植物生长提供能量，也为植物次生代谢产物的合成提供原料[29-30]。在柑橘愈伤组织的研究中发现，糖可能是愈傷组织积累类胡萝卜素的信号因子[31]。蔗糖能够调节拟南芥PAP1转录因子的表达，从而增加花青素合成基因的表达，进而影响花青素的合成[32]。另外，在拟南芥研究中已经表明光信号和糖信号能够协同调控植物的生长和代谢[33]。生物反应器可保证植物细胞培养环境的一致性，培养细胞的均一性，这些将为今后光信号和糖信号协同作用的研究提供优良的基础。磷酸盐也是植物细胞培养不可或缺的原料之一[22]。在关于黄连悬浮细胞的研究中就发现P元素的消耗较快，并且与细胞生长和次生产物的合成有密切联系[34]。王静等[35]的研究中也已经表明磷元素对桔梗的多糖有着显著的促进作用。

通过生物反应器培养龙眼细胞，更为明确地了解到细胞生长过程中，每个阶段消耗蔗糖、还原糖、磷酸盐的情况。通过这些培养特征的研究，将为后续研究起到提示作用。

3.3 转录因子DlHY5、DlPAP1参与蓝光调控龙眼悬浮培养细胞类黄酮的积累

光照可通过植物体内的光受体感知，并通过光信号转导途径调控植物生长发育和次生代谢产物的合成[36]。HY5作为光形态建成的正调控因子，是光调控植物生长发育、代谢合成等的分子开关[37]。在拟南芥和苹果的研究中已经表明，光照通过HY5激活R2R3 MYBs，进而调控类黄酮结构基因，最终达到调控类黄酮的积累[38-40]。在Li等[41]的研究也表明光照促使HY5表达量提高，同时类黄酮途径基因表达量也很快出现变化。本研究发现龙眼细胞培养过程中，蓝光的DlHY5表达量与类黄酮含量趋势呈正相关，而黑暗培养的DlHY5与类黄酮含量无明显规律，说明蓝光可通过光信号转录因子DlHY5调控龙眼细胞类黄酮的合成。

相关研究已阐述了蓝光调控类黄酮的途径，蓝光作用下，COP1/SPA1 （Suppressor of phya-105）复合体激活了光感受器CRY，导致COP1（constitutively photomorphogenic 1）蛋白脱离结合的转录因子，离开细胞核，转录因子HY5活化，促进了光调控基因的表达，从而调控类黄酮的积累[6]。

拟南芥的研究发现HY5可诱导类黄酮的合成转录因子PAP1的表达[9]。本研究中龙眼的DlPAP1与DlHY5的表达规律基本一致，说明蓝光通过光信号转录因子DlHY5调控DlPAP1的表达，进而调控龙眼类黄酮代谢途径结构基因DlCHS的表达，导致类黄酮的积累。关于这种调控机制有待遗传转化进一步验证。

综上所述，本研究利用5L生物反应器对龙眼细胞进行放大培养，对黑暗和蓝光处理下龙眼细胞的培养特征进行研究，将为今后龙眼细胞培养进一步规模化生产类黄酮奠定基础。

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