巴西橡胶树次生乳管分化能力的早期评价方法研究

张世鑫 刘宁涛 杨署光 陈月异 晁金泉 田维敏

摘 要 天然橡胶产量是通过测量割胶收集从次生乳管中流出的胶乳而得到，具有连续收获和累进计产的特点，这也是目前橡胶树的产量构成性状难于剖析和橡胶树产量育种周期长且效率低的主要原因。橡胶树次生乳管分化能力是决定橡胶产量的关键因子之一，通过对幼树的次生乳管分化能力进行早期预测对于缩短橡胶树产量育种周期具有重要意义。本研究采用实验形态学技术，以不同树龄和不同次生乳管分化能力的橡胶树种质为材料，系统地分析机械伤害、割胶和茉莉酸类物质处理对其次生乳管分化能力的影响。研究发现，割胶处理相同种质的二年生幼树与八年生成龄未开割树，得到次生乳管分化能力的效应是一致的，所以使用二年生幼树就可以较好地区分出橡胶树种质间的次生乳管分化能力差异。因此，割胶处理二年生幼树的方法可以作为橡胶树次生乳管分化能力的早期评价的有效方法。这些研究结果不仅丰富了橡胶树产胶潜力的早期预测技术，而且为产胶潜力相关分子标记研发打下良好基础。

关键词 巴西橡胶树；产量育种；早期预测；乳管分化能力；茉莉酸信号

中图分类号 S794.1 文献标识码 A

Abstract In natural rubber production， latex flows out of the severed secondary laticifer caused by tapping （cutting the laticifer in trunk bark） and is collected as the raw material for refining natural rubber. The secondary differentiation ability is one of the key factors to determine the latex yield in rubber tree. Therefore， the early prediction of secondary laticifer differentiation for young tree has a significant meaning to shorten the yield breeding cycle in Hevea. To achieve this goal， this study analyzed the difference in laticifer differentiation ability among Hevea germplasm with different ages， treated by mechanical wounding， tapping and jasmonates using experimental morphological techniques. It was found that a significant similarity existed in the laticifer differentiation ability of either the two-year-old germplasm or the eight-year-old germplasm. And moreover， the laticifer differentiation ability of 84% two-year-old germplasm was in accordance with the corresponding 8-year-old virgin trees under test-tapping condition. Therefore， the method of test-tapping treatment for two-year-old germplasm could be used as an effective method to the early evaluation of secondary laticifer differentiation ability. The results not only enrich the early selection technology of latex yield potential breeding， but also lay a good foundation for the research on molecular markers associated with latex yield potential breeding.

Keywords Hevea brasiliensis Muell. Arg.； yield breeding； early selection； laticifer differentiation； jasmonate signal

DOI 10.3969/j.issn.1000-2561.2018.07.002

產量构成（yield components， YC）理论最早是由Engledow等[1]提出的，并首次将作物产量这一综合性状分解成不同的构成性状。通过品种的自交或者杂交，将单一的构成性状进行定向聚合，更容易实现优质品种的培育。

巴西橡胶树收获的目标是割胶后次生乳管排出的胶乳，产量的测定方法是单株或单位面积胶园在单位时间（年）内生产的胶乳鲜重的总和，分别以g/（株·年）或t/（hm2·年）来计[2]，因此，橡胶产量的测定方法具有连续收获、累进计产的特点[3]。所以，与普通作物相比，橡胶树产量是一个典型的综合性状。由于橡胶树产量育种的构成性状难于剖析，导致了橡胶树育种周期长、效率低这一现状。随着对橡胶树树皮结构[4-9]以及产排胶生理研究的深入[10-14]，人们发现，产生和贮存胶乳的次生乳管数量的多少、排胶时间的长短、橡胶合成效率的高低等因子对胶乳产量起着决定作用，可以作为构成性状来剖析橡胶产量的形成。其中，次生乳管数量是决定橡胶产量的最重要因素，橡胶树分化乳管的能力则是评估其产胶潜力的关键因子之一。

关于乳管分化的研究一直受到广泛的关注。Wu等[4]、Hao等[5]、Ichihara等[6]、张世鑫等[7]、Tian等[8]、Zhang等[9]研究发现，割胶、机械伤害和茉莉酸类物质都可以诱导橡胶树的乳管分化，并建立了利用机械伤害诱导橡胶树萌条次生乳管分化的实验系统，发明了一种早期预测橡胶树种质乳管分化能力的方法[15]。为建立系统化的理论体系、进一步完善利用乳管分化能力进行早期评价产量的技术，本研究以不同树龄和不同次生乳管分化能力的橡胶树种质为材料，采用实验形态学技术分析了机械伤害、割胶和茉莉酸类物质处理对树皮中次生乳管分化的影响，旨在进一步优化橡胶树产胶潜力的早期选择技术，并为产胶潜力相关分子标记研发奠定基础。

1 材料与方法

1.1 材料

植物材料为巴西橡胶树（Hevea brasiliensis Muell. Arg.）的野生种质和不同乳管分化能力种质的杂交后代，其中，①一年生萌条种植于国家农作物种质资源平台-国家橡胶树种质资源子平台的九队基地的野生种质，这些种质引种于巴西的阿克里州（简称AC州）、朗多尼亚州（简称RO州）和马托格罗索州（简称MT州）3个州，每州各选10份种质，分别进行机械伤害和冠菌素（coronatine， COR）单次处理，每种处理3个生物学重复；②二年生幼树和与其对应的八年生未开割树种植于国家农作物种质资源平台-国家橡胶树种质资源子平台的九队和三队基地，随机挑选57份野生种质和46份魏克汉种质，每份种质3个生物学重复；③八年生不同乳管分化能力种质的杂交组合后代种植于中国热带农业科学院橡胶研究所遗传育种研究室九队基地的七号地块，随机选取20份乳管分化能力强且产量高的种质材料和50份乳管分化能力弱且产量低的种质材料。

1.2 处理方法

1.2.1 机械伤害处理一年生橡胶树野生种质萌条 一年生野生种质萌条的第一伸长单位（EU1）[5]叶片处于稳定期时，使用单面刀片在其第一伸长单位最下面一片叶下方2 cm的绿色茎皮处（图1-A），刮去1 cm×1 cm 面积的表皮和部分皮层，使伤口直接暴露在空气中，另取其下方10 cm处未处理的茎皮作为空白对照（图1-A）。处理10 d后，使用单面刀片削取茎皮，制备石蜡切片。

1.2.2 冠菌素（COR）刺激处理一年生橡胶树野生种质萌条 由于冠菌素的结构与活性形式的茉莉酸非常相似，且比茉莉酸甲酯（Methyl Jasmonate， MeJA）更能有效地诱导橡胶树次生乳管分化[6]，因此，本研究使用COR代替MeJA进行一年生野生种质萌条诱导乳管分化实验。

实验材料同第1.2.1节。当萌条的第一伸长单位（EU1）叶片处于稳定期时，分别在其最下面一片叶下方2 cm处和10 cm处（图1-B），使用刀片刮去1 cm×1 cm面积树皮的表皮和部分皮层，使用灭菌脱脂棉贴附于刮伤部位，施加适量的10 μmol/L COR溶液，再用封口膜包裹处理部位，另外取远离处理位置未处理的树皮作为空白对照（图1-B）。分别处理5 d和10 d后，使用单面刀片削取处理部位的树皮，制备石蜡切片。

1.2.3 割胶处理二年生及其对应八年生橡胶树野生种质和魏克汉种质橡胶树 野生种质和魏克汉种质材料的二年生幼树，在距离地面0.5 m处的树干树皮上使用芽接刀模擬正常割胶的方法进行开割线和割去树皮，每10 d割1刀，共割3刀；与其对应的八年生成龄未开割树在距离地面0.5 m处的树干树皮上正常割胶，每3 d割1刀，共割10刀。割胶处理完后30 d，在割线处用打孔器采集树皮，制备石蜡切片。以相同种质材料未割胶处理的树皮为对照。

1.2.4 COR单次刺激处理八年生橡胶树种质的杂交后代 不同乳管分化能力种质的杂交组合后代的八年生未开割树，在橡胶树树干的1.5 m和2 m处，使用刀片刮去面积为3 cm×3 cm的树皮周皮和部分皮层，使用灭菌脱脂棉贴附于表面，分别施加10 μmol/L和30 μmol/L COR溶液，使用方形塑料封口膜覆盖，再使用黑色薄膜覆盖并用凡士林封固四周（防水）。分别处理10 d和15 d后，使用打孔器取处理部位的树皮，制备石蜡切片。以同一地块内未割胶处理的同杂交后代种质材料的树皮为对照。

1.2.5 茉莉酸类物质多次刺激处理八年生橡胶树种质的杂交后代 实验材料同第1.2.4节，在橡胶树树干的1 m处围绕树干选取2处，使用刀片刮去面积为3 cm×3 cm的树皮周皮和部分皮层，使用灭菌脱脂棉贴附于表面，分别施加0.14% MeJA和30 μmol/L COR的混合羊毛脂，并用塑料封口膜包裹，再使用黑色薄膜覆盖并用凡士林封固四周（防水），处理10 d后；除去旧的羊毛脂，涂抹纯羊毛脂处理2 d后，再次刮除纯羊毛脂。再次涂抹含有MeJA和COR的混合羊毛脂，并重复上述步骤4次，共处理46 d。用打孔器采集处理部位树皮，并在树干同一高度的背面，取一块不做任何处理的树皮作为空白对照，制备石蜡切片。

1.3 实验方法

1.3.1 石蜡切片的制备方法 石蜡切片制备方法参照Hao等[5]、史自强等[16]的方法并优化。树皮材料分割后，于80%乙醇中固定24 h以上，乙醇系列脱水，冰醋酸过渡，I-Br染液着色橡胶（60 ℃烘箱中36～48 h），冰醋酸洗涤，乙醇过渡，正丁醇透明，石蜡包埋。使用Leica切片机切片（厚度14 μm），二甲苯脱蜡，固绿染色，松节油透明，中性树胶封片。

1.3.2 次生乳管数量和橡胶树乳管分化等级的统计方法 次生乳管数量的统计参考文献[5-9]的方法，并加以改进。统计形成层附近的次生乳管列数，“0”代表没有诱导出的次生乳管，“1”代表诱导出的次生乳管是完整的1列；出现不完整的1列时，用标尺量取乳管列长度，与视野总长度的比值即为该视野下诱导出次生乳管的列数。

橡胶树次生乳管分化等级的统计参考Chen等[17]的方法。形成层附近诱导产生0～1列次生乳管，基本没有密集乳管出现评价为1级；形成层附近诱导出2～3列次生乳管，且在局部有密集乳管出现，评价为2级；形成层附近诱导出4～5列次生乳管，且乳管密集程度较高，评价为3级；形成层附近诱导出5列以上次生乳管，且乳管密集程度高，评价为4级。

1.4 数据分析

通过SPSS 20.0软件对统计数据进行差异显著性分析，通过OriginLab 8.5软件进行柱状图的绘制。

2 结果与分析

2.1 机械伤害对一年生橡胶树萌条次生乳管分化的影响

通过光学显微镜观察机械伤害处理的野生种

质树皮。结果显示，在总共30份野生种质萌条中，有28份种质成功诱导出1列次生乳管（如图2-A红色箭头所示），诱导成功率为93.3%。来自于巴西州3个州各10份种质的30株野生种质材料中，AC州的种质中共有25株萌条诱导出次生乳管，诱导出次生乳管种质数量的比例为83.33%，且诱

导出连续1列次生乳管的有15株，占50%（图

2-B）；RO州共有16株萌条诱导出次生乳管，诱导出次生乳管种质数量的比例为53.33%，且出现连续1列次生乳管的植株有10株，占33.33%（图2-B）；MT州共有25株萌条诱导出次生乳管，诱导出次生乳管种质数量的比例为83.33%，且出现连续1列次生乳管的植株15株，占50%（图2-B）。由此可见，通过机械伤害诱导，AC州和MT州的野生种质萌条次生乳管分化的诱导效率要明显高于RO州，但AC州和MT州的数据间却没有差异。

2.2 COR单次刺激对一年生橡胶树萌条次生乳管分化的影响

对同样来自于巴西3个州的30份野生种质进行COR处理。结果表明，COR处理5 d能够诱导出次生乳管的种质数量少，只有5份，诱导成功率仅16.7%；10 d能够诱导出次生乳管的种质有25份，诱导成功率达到83.3%（图3-A）。AC州和MT州在机械伤害处理和COR处理后诱导乳管分化效果较好，也略强于RO州（图3-B）。COR处理5 d和10 d的诱导率呈极显著差异（p<0.01），且COR处理5 d能够诱导出次生乳管的5份种质，在COR处理10 d的条件下也有分化出次生乳管。这可能是COR处理确实有诱导乳管分化的作用，只是处理5 d的时间较短，次生乳管中的橡胶成分积累量不够，在石蜡切片中难以观察到，而COR处理10 d的时间就能够较容易检测到。

2.3 割胶对二年生、八年生橡胶树种质次生乳管分化的影响

光学显微镜观察结果表明，二年生幼树割胶处理后乳管分化能力差异显著，能够誘导出从0～1列到4～5列不等的次生乳管（如图4所示）。二年生野生种质材料在割胶后乳管分化能力强的种质有6份，分别为XJ007163、XJ000954、XJ000881、XJ001678、XJ002960和XJ000198，能够分化出3～4列次生乳管，它们对应的乳管分化能力等级分别为4级、3级、3级、3级、3级和3级；乳管分化能力较差的种质有XJ000138、XJ000126、XJ000454、XJ000125、XJ000405等27份，能够分化出断断续续的1列次生乳管或者少数几个次生乳管细胞，它们的乳管分化能力等级大多为1级。同样，二年生魏克汉种质材料在割胶后乳管分化能力强的种质分别为热研8-333、热研7-33-97、RRIC100、保亭155、KRS21、海垦6和徐育3共7份种质，能够分化出4～5列次生乳管，它们的乳管分化能力等级分别为4级、4级、4级、3级、3级、3级和3级；乳管分化能力较差的种质有云研277-5、色宝2、热垦523、马矮、热研7-18-55、RRIC121、KRS156等19份种质，能够分化出断断续续的1列次生乳管或者少数几个次生乳管细胞，它们的乳管分化能力等级均为1级。

对于与二年生种质相对应的八年生成龄未开割树也进行割胶处理。光学显微镜观察结果表明，八年生幼树割胶处理后乳管分化能力差异显著，能够诱导出从0～1列到4～5列不等的次生乳管。八年生野生种质材料在割胶后乳管分化能力强的种质也为6份，与二年生的种质是完全相同的，分别为XJ007163、XJ000954、XJ000881、XJ001678、XJ002960和XJ000198，能够分化出多数达5～6列的次生乳管；乳管分化能力较差的有 XJ000131、XJ000375、XJ000138、XJ000126、XJ000454、XJ000125、XJ000405等26份，与二年生的种质一致程度为81.48%，能够分化出断断续续的1列次生乳管或者少数几个次生乳管细胞，乳管分化能力等级大多为1级。同样，八年生魏克汉种质材料在割胶后乳管分化能力强的种质也是7份，与二年生的种质完全相同，为热研8-333、热研7-33-97、RRIC100、保亭155、KRS21、海垦6和徐育3，能够分化出5～6列次生乳管，它们的乳管分化能力等级分别为4级、4级、4级、4级、4级、3级和3级；乳管分化能力较差的有RRIC130、南俸76-1、云研277-5、色宝2、热垦523、马矮、热研7-18-55和RRIC121等21份种质，与二年生的种质一致程度为80%，能够分化出断断续续的1列次生乳管或者少数几个次生乳管细胞，乳管分化能力等级同样均为1级。

通过对比，发现二年生幼树与其对应的八年生成龄未开割树割胶后的乳管分化能力，在绝大多数的种质中是一致的，总的种质一致程度高达84%。可见割胶处理二年生材料用于筛选乳管分化能力差异的种质的结果准确度很好。

2.4 COR单次刺激对八年生橡胶树种质杂交后代次生乳管分化的影响

以不同次生乳管分化能力的橡胶树种质杂交组合的后代，研究茉莉酸单次刺激对种质的次生乳管分化是否会出现差异。光学显微镜观察结果显示，在总共70株杂交后代种质中，使用10 μmol/L COR处理10 d后，有11株杂交组合后代种质能够诱导出次生乳管，占总种质数的15.7%；使用30 μmol/L COR处理10 d后，有33株杂交组合后代种质能够诱导出次生乳管，占总种质数的47.1%；使用10 μmol/L COR处理15 d后，有25株杂交组合后代种质能够诱导出次生乳管，占总种质数的35.7%；使用30 μmol/L COR处理15 d后，有46株杂交组合后代种质能够诱导出次生乳管（图5-A），占总种质数的65.7%。其中，乳管分化能力低（1～2级）的50株杂交组合后代种质能够中有32株材料诱导出1列次生乳管，占总种质数的64%；乳管分化能力高（3～4级）的20株杂交组合后代种质能够中有15株材料诱导出1列次生乳管，占总种质数的75%。

由于上述的COR单次刺激不同乳管分化能力的橡胶树杂交组合后代种质后，诱导次生乳管分化的数据差异不显著，本研究分析了外施COR剂量和处理时间等因素对其可能造成的影响，结果发现：①外施茉莉酸类物质的效果可能与剂量有一定关系，从图5-B可以看出，30 μmol/L COR诱导乳管分化的种质数量要远高于10 μmol/L COR。②外施COR的效果可能与处理时间有一定关系，从图5-B可以看出，无论10 μmol/L还是30 μmol/L，COR处理15 d诱导乳管分化的种质数量都要远高于处理10 d，且呈极显著差异（p<0.01）。

2.5 茉莉酸类物质多次刺激对八年生橡胶树种质杂交后代次生乳管分化的影响

MeJA和COR多次连续性刺激诱导橡胶树八年生不同次生乳管分化能力的橡胶树种质杂交组合后代的树皮切片结果表明，MeJA处理后，50株乳管分化能力低（1～2级）的杂交组合后代种质诱导次生乳管在1列以下的（<1列）共36株，占比72%；1列及以上的（≥1列）共14株，占28%。而在20株乳管分化能力高（3～4级）种质中，诱导出1列以下的（<1列）只有6株，占30%；1列及以上的（≥1列）共14株，占比70%，如图6B-a所示。

同样，使用COR处理后，50株乳管分化能力低（1～2级）的杂交组合后代种质诱导次生乳管1列以下的（<1列）共44株，占比88%；1列及以上的（≥1列）共6株，占12%。而在20株乳管分化能力高（3～4级）种质中，诱导1列以下的（<1列）有8株，占40%；1列次生乳管的共3株，占15%；1列以上的（≥1列）共12株，占比60%，如图6B-b所示。由此可见，MeJA和COR的多次刺激比单次刺激效果更好，且更容易区分不同次生乳管分化能力的橡胶树种质杂交组合后代的次生乳管分化能力。

3 讨论

3.1 橡胶树种质的次生乳管分化能力早期预测有望缩短橡胶树产量育种周期

与普通作物一次性收获计产不同，巴西橡胶树产量测定具有连续收获和累进计产的特点，这也是其产量构成性状难于剖析的原因。目前主要依赖割胶测产的方法进行随机的表型选择[17]，育种周期长达30～40年，且效率低下[18-20]。根据橡胶树产量形成的特点，目前，将决定橡胶树天然橡胶产量的关键因素分解为3个，即树干树皮中的次生乳管数量、两次割胶间的胶乳再生（主要是橡胶生物合成）和排胶持续时间[21]。其中，树干树皮中的乳管数量是决定天然橡胶产量的最重要的结构因子[22]，且树干树皮中的次生乳管数量与天然橡胶产量高度正相关[23]。树皮功能韧皮部的次生乳管是由维管形成层细胞分化而来，因此，维管形成层分化次生乳管的能力强弱决定次生乳管数量的多少。前期研究发现，机械伤害、割胶和茉莉酸能诱导橡胶树分化出次生乳管[4-9， 17]，并且这些因素诱导的橡胶树种质间乳管分化差异，主要是由种质的遗传因素决定的，所以，乳管分化能力强的种质其后代也能够保留较强的乳管分化能力[23-26]。因此，通过对橡胶树幼树次生乳管分化能力的进行早期预测，对于缩短橡胶树产量育种周期具有重要意义。

3.2 橡胶树种质对间断性刺激所表现出的次生乳管分化能力存在明显差异

不同的橡胶树种质在机械伤害、割胶和茉莉酸刺激后，所表现出次生乳管分化的能力存在一定的差异[15， 22]，为了更准确地反应出不同橡胶树种质受外界刺激处理后所表现出的次生乳管分化能力，本文系统分析了不同的刺激方式处理不同橡胶树种质，诱导次生乳管的效果。研究发现机械伤害和一次性COR刺激后10 d，不同的橡胶树种质间的次生乳管分化差异并不显著，大多数种质均能分化出1列次生乳管，而COR多次刺激和割胶处理后，不同种质间的次生乳管分化差异明显——割胶条件下乳管分化能力强的种质诱导效果明显强于乳管分化能力弱的种质，究其原因，是橡胶树种质对于多次间断性刺激后，形成层细胞分化次生乳管的能力存在明显的差异。因此，通过间断性多次刺激的方法来对不同橡胶树种质乳管分化能力进行等级鉴定与评价，是可以辅助橡胶树产量育种和缩短育种周期的。另外，根据橡胶树对一次性刺激和多次间断性刺激后，形成层细胞分化次生乳管情况不同，可以利用一次性和多次间断性刺激这两种实验方法处理橡胶树，从而筛选出乳管分化相关的差异基因，为开发橡胶树产胶潜力相关的分子标记打下理论基础。

3.3 二年生橡胶树幼树进行割胶的方法可以鉴定不同橡胶树种质的次生乳管分化能力

为了尽可能“早”地评价橡胶树的次生乳管分化能力，本研究从一年生橡胶树萌条开始，发现机械伤害处理和茉莉酸类物质刺激后，不同橡胶树种质一年生萌条的次生乳管分化能力差异不明显，主要原因是一年生萌條的树皮较薄，机械伤害处理后造成的植物组织失水响应差别不大，引起的内源过氧化氢爆发及内源茉莉酸增加的效应均很明显，所以不同的橡胶树种质都很容易诱导次生乳管分化[6]。因此，本研究选择对树皮较厚的二年生橡胶树幼树进行割胶处理，发现在割胶处理的二年生的魏克汉种质或野生种质，不同种质间的次生乳管分化能力均有较大差异。为了验证二年生橡胶树种质对割胶处理鉴定评价乳管分化能力的准确性，本研究又对二年生橡胶树对应的八年生种质也进行了割胶处理，发现这些二年生和八年生种质在割胶后的次生乳管分化能力一致性很高。因此，本研究发现对二年生橡胶树进行割胶处理的方法，是可以实现“早”预测和“准确”预测橡胶树种质乳管分化能力的。

总而言之，对二年生的橡胶树幼树进行割胶来鉴定不同种质的乳管分化能力的方法，可以开发成一种有效的次生乳管分化能力早期评价方法。

致谢 本研究中的橡胶树各种质材料的选取和鉴别得到了中国热带农业科学院橡胶研究所胡彦师副研究员和黄肖农艺师的大力帮助，在此表示诚挚谢意。

参考文献

[1] Engledow F L， Wadham S M. Investigation on yield in the cereals. I [J]. The Journal of Agricultural Science， 1923， 13（4）： 390-439.

[2] 林位夫.橡胶树农学辞典[M]. 北京：中国农业出版社，2014.

[3] 罗明武，邓柳红.巴西橡胶树产胶与排胶机制研究进展[J]. 林业科学，2006，42（9）：127-129.

[4] Wu J L， Hao B Z， Tan H Y. Wound-induced differentiation in Hevea brasiliensis shoots mediated by jasmonic acid[J]. Journal of Rubber Research， 2002， 5： 53-63.

[5] Hao B Z， Wu J L. Laticifer differentiation in Hevea brasiliensis： induction by exogenous jasmonic acid and linolenicacid[J]. Annals of Botany， 2000， 85： 37-43.

[6] Ichihara A， Shiraishi K， Sato H， et al. The structure of coronatine[J]. Journal of the American Chemical Society， 1977， 99 （2）： 636-637.

[7] 张世鑫， 刘世彪， 田维敏. 形成层活动对机械伤害诱导巴西橡胶树次生乳管分化的影响[J]. 热带作物学报， 2011， 32（6）： 1037-1041.

[8] Tian W M， Yang S G， Shi M J， et al. Mechanical wounding-induced laticifer differentiation in rubber tree： An indicative role of dehydration， hydrogen peroxide， and jasmonates[J]. Journal of Plant Physiology， 2015， 182： 95-103.

[9] Zhang S X， Wu S H， Tian W M. The secondary laticifer differentiation in rubber tree is induced by trichostatin A， an inhibitor of histone acetylation[J]. Frontiers Agricultural Science and Engineering， 2016， 3（4）： 357-362.

[10] Zhang S X， Tian W M. Cross talk between cytokinin and jasmonates in regulating the secondary laticifer differentiation in rubber tree （Hevea brasiliensis Muell. Arg.）[J]. Journal of Rubber Research， 2015， 18（1）： 38-48.

[11] Chao J Q， Yang S G， Chen Y Y， et al. Transcript profiling of Hevea brasiliensis during latex flow[J]. Frontiers in Plant Science， 2017， 8： 1 904.

[12] 王立丰，安 锋，王纪坤，等.不同旱害级别对开割和未开割橡胶树形态和生理特性的影响[J]. 热带作物学报，2017，38（10）：1 777-1 783.

[13] 仇 键，杨文凤，吴 明，等.橡胶树PR107不同乙烯浓度气刺微割的产量和生理效应[J].广东农业科学， 2014， 41（8）： 74-77.

[14] Wu S H， Zhang S X， Chao J Q， et al. Transcriptome analysis of the signalling networks in coronatine-induced secondary laticifer differentiation from vascular cambia in rubber trees[J]. Scientific Reports， 2016， 6： 36384.

[15] 田维敏，黄华孙，史敏晶，等.一种苗期预测橡胶树次生乳管分化能力的方法： CN200810003352.7[P]. 2008-07-23.

[16] 史自强，胡正海.植物含胶组织的制片方法[J]. 植物学报，1965，13（2）：179-185.

[17] Chen Y Y， Gao X S， Zhang X F， et al. Relationship between the number of tapping-induced secondary laticifer lines and rubber yield among Hevea germplasm[J]. Frontiers of Agricultural Science and Engineering， 2016， 3（4）： 363-367.

[18] 何 康，黄宗道.热带北缘橡胶树栽培[M]. 广州：广东科技出版社，1987： 341-369.

[19] Gnagne M， 周建南.橡胶苗圃实生苗筛选效率的临界范围[J]. 热带作物译丛，1991，4：3-9.

[20] 周钟毓.国外巴西橡胶树产量早期选择预测方法研究概况[J]. 热带农业科学，1993（2）：77-83.

[21] Mantello C C， Suzuki F I， Souza L M， et al. Microsatellite marker development for the rubber tree （Hevea brasiliensis）： characterization and cross-amplification in wild Hevea species[J]. BMC Research Notes， 2012， 5： 329.

[22] Silva C C， Mantello C C， Campos T. Leaf-， panel- and latex-expressed sequenced tags from the rubber tree （Hevea brasiliensis） under cold-stressed and suboptimal growing conditions： the development of gene-targeted functional markers for stress response.[J]. Molecular Breeding， 2014， 34（3）： 1035-1053.

[23] 田维敏，史敏晶，谭海燕，等.橡胶树树皮结构与发育[M]. 北京：科学出版社，2015.

[24] 郝秉中，吴继林.巴西橡胶树乳管生物学与胶乳生产[J]. 热带作物学报，2004，25（4）：1-7.

[25] 周钟毓，郭祁源，詹赛荣.不同預测产量类型的巴西橡胶树无性系乳管状况的比较（1981-1992）[J]. 热带作物研究，1994（4）：1-6.

[26] 赵中奇.橡胶树乳管发育与产胶量关系研究[J]. 云南农业大学学报，1998，13（4）：397-401.