青海地区乳腺癌患者外周血液MTDH基因表达水平的初步研

张双元 梅士娟 刘震 张晨如 措羊 米晓琳 董显花 孔令达

（1青海大学附属医院肿瘤外科二科 青海 西宁 810001）

（2青海大学医学院基础部 青海 西宁 810001）

乳腺癌是严重影响中国女性健康的疾病之一，出现复发、转移是最主要的死亡原因，因此，控制复发和转移对降低乳腺癌患者的死亡率具有决定性作用[1]。异黏蛋白(metadherin，MTDH)最早是在感染了人免疫缺陷病毒(HIV-1)的人原始胚胎星形细胞中被克隆出来的，在多种肿瘤组织中高度表达。体内外研究也发现，MTDH 基因的表达可以调控肿瘤细胞的生长、增殖等，进而影响肿瘤的进展与转移[2]。为了明确青海地区乳腺癌患者外周静脉血液中MTDH的表达状况，本文采用聚合酶链式反应（Polymerase Chain Reactio,PCR ）法进行了初步研究。

1.实验材料

1.1 材料来源

收集2015年1月至2016年12月，青海大学附属医院肿瘤外科二科收治的41例乳腺癌患者和47例健康对照组人群的新鲜外周静脉血液各1.5ml，提取RNA。

1.2 试剂

外周静脉血检测MTDH的表达用PCR法检测。TRI Reagent®BD试剂、红细胞裂解液、TIANScript RT Kit cDNA第一链合成试剂盒、2×PCR MasterMix、D2000 Marker、DNase/RNase-Free 去离子水及其它分子生物学试剂均购自北京天根生物化学试剂公司。

1.3 试验方法

外周静脉血检测MTDH的表达用PCR法检测。

1.3.1 总RNA完整度的检测 采用Trizol一步法提取的血液总RNA经电泳检测可见清晰的28S和18S两条rRNA条带，其中28S条带亮度两倍于18S带（图1），表明组织总RNA完整性良好。

1.3.2 检测基因循环数确定

（1）GAPDH内参基因

GAPDH内参基因扩增循环数从20次增至29次，每个循环取出1管，进行电泳分析发现，当循环数进入24时，已经达到指数扩增的初中期，因此，确定24为后期实验检测循环数。

图1 血液总RNA提取电泳图

图2 GAPDH内参基因循环数电泳图与光密度分析

（2）MTDH基因

MTDH基因扩增循环数从26次增至35次，每个循环取出1管，进行电泳分析发现，当循环数进入29时，已经达到指数扩增的初中期，因此，确定29为后期实验检测循环数。

1.4 统计方法

全部实验数据均采用均数±标准差表示，采用SPSS17.0统计软件分析处理。使用秩和检验进行统计分析，以P＜0.05为有统计学意义。

图3 MTDH基因循环数电泳图与光密度分析

2.结果

（1）组间MTDH基因表达变化检测

用凝胶分析系统分析实验结果，测出目的基因及内参照的灰度值，并计算二者的比值，为mRNA相对表达量。结果显示，乳腺癌患者和正常健康对照组间MTDH基因mRNA表达差异有统计学意义（P＜0.05）。

图4 部分MTDH和GAPDH内参基因扩增电泳图

（2）乳腺癌组和对照组血液MTDH基因mRNA表达

乳腺癌组外周血MTDH基因mRNA表达(0.81±0.66)，健康组外周血MTDH基因mRNA表达(0.64±0.55)，P=0.019，统计学具有差异。见表。

表 乳腺癌组和对照组血液MTDH基因mRNA表达

3.讨论

近年来，乳腺癌已成为威胁女性健康的主要原因之一。乳腺癌是全身性疾病，早期就有可能发生全身微转移，因此，即使一开始就对患者实行手术、放疗、化疗的综合性治疗，仍有一部分患者会发生复发和转移。分子生物学研究表明，抑癌基因的灭活、细胞信号转导通路的异常、癌基因的激活等因素，对乳腺癌发生和发展起关键作用。因此迫切需要继续在分子水平研究乳腺癌的发生、发展，寻找其他的治疗途径，进一步提高乳腺癌的治疗效果[3]。

异黏蛋白(metadherin，MTDH)，又被命名为星状细胞上调基因-1（astroycyte elevated gen-1，AEG-1）。MDTH是原癌基因，定位于染色体8q22.1，是存在于核膜、内质网及核仁内的跨膜蛋白，其功能是调节与肿瘤发生、发展相关的分子信号途径。MDTH参与恶性肿瘤的进展的主要过程，包括肿瘤侵袭和转移、抑制细胞转化、促进肿瘤血管生成、抵抗化疗药物、促进肿瘤细胞增殖和生长。MTDH在多种肿瘤细胞中过表达，且与恶性程度的增高呈正相关，如肝癌、黑色素瘤、前列腺癌等，而在良性组织或正常组织中则不表达或低表达。有研究认为，敲除MTDH基因可以提高乳腺癌细胞对多种化疗药物的敏感性，如顺铂、阿霉素和紫杉醇。因此我们可以初步判断MTDH有可能为庞大的、繁杂的肿瘤信号网络通路中的一个关键位点，是调节恶性肿瘤发生、发展的重要分子。

有关青海地区乳腺癌患者外周静脉血MTDH基因的表达状况尚未见报道。本研究采用PCR技术发现，在青海地区乳腺癌患者外周血中MTDHmRNA为0.81±0.66，健康组外周血MTDH基因mRNA表达为0.64±0.55，提示MTDH基因在青海乳腺癌患者中处于高表达状态。

综上所述，我们初步断定，MTDH在青海地区对乳腺癌的发生和疾病进展或有着重要的作用，需要进一步进行深入研究。

【参考文献】

[1]张思维，陈万青，孔灵芝，等.中国部分市县2003年恶性肿瘤发病年度报告[J].中国肿瘤，2007，16(7)：503.

[2]Emdad L，Sarkar D, Su ZZ，et a1.Astrocyte elevated gene-1：recent insights into a novel gene involved in tumor progression,metastasis and neurodegeneration[J].Pharmacol Ther.2007.114：155-170.

[3]Yoo BK, Emdad L, Su ZZ, et al.Astrocyte elevated gene-1 regulates hepatocellular carcinoma developmenl and progression[J].J Clin In.vest 2009.119：465-469.