4种商陆提取物对鸡肾肿症治疗效果的试验

王文文,张炳亮,董发明,马 霞,张国祖,黄一帆

(1.河南科技大学动物科技学院,河南 洛阳 471023;2.河南省康星药业股份有限公司,河南 郑州 451464;3.河南牧业经济学院,河南 郑州 450011;4.福建农林大学动物科学学院,福建 福州 350002)

鸡肾肿症是对鸡的肾肿大、肾结石、肾炎、肾病、内脏痛风、尿酸盐沉积、酸中毒等的统称,也叫肾脏肿大综合征,是现代养鸡业中鸡死亡的主要疾病之一,不同日龄的鸡群均可发生,死亡率10% ～30%[1],当其他疾病伴随着肾肿症发生时,其死亡率将会增加1倍以上[2],严重危害养殖业的发展。

商陆也叫当陆、章柳、白昌、夜呼、马尾,是商陆科植物商陆(Phytolacca acinosaRoxb.)或垂序商陆(Phytolacca americanaL.)的干燥根。味辛,性平,有毒,归肺、脾、肾、大肠经,主治水肿、疝气肿大、腹胀、疏通五脏,消除各种水肿,外用解毒散结[3-4]。中药具有天然无公害、毒副作用小、不易产生耐药性等优势。本试验分别采用水煎法、水提醇沉法、减压干燥法、渗漉法4种提取方法制备商陆提取物,旨在研究不同提取物对人工诱发的鸡肾肿症的治疗效果,筛选治疗效果最佳的商陆提取方法,为研制开发治疗鸡肾肿症效果更好的药物提供依据。

1 材料与方法

1.1 主要仪器 PF-300型全自动生化分析仪,购自深圳市普康电子有限公司;JY系列多功能电子天平,购自上海衡平仪器仪表厂;酶联免疫检测仪,购自赛默飞世尔(上海)仪器有限公司。

1.2 试验药物 商陆试验用药由河南省康星药业股份有限公司中兽药新制剂实验室制备,通过水煎法、水提醇沉法(醇沉终浓度90%)、减压干燥法、渗漉法(90%乙醇渗漉)4种提取方法制备得4种商陆提取物,浓度均为每1 mL相当于原生药1 g。高效液相色谱法测得商陆皂苷甲(Esculentoside A,EsA)的含量依次为 0.73 mg/mL、0.98 mg/mL、0.68 mg/mL、1.72 mg/mL;消肿解毒散,购自河北征宇制药有限公司;作为本试验的对照药;磺胺甲基异恶唑(SMZ)原粉,购自郑州天顺公司,作为本试验造模用药。

1.3 检测试剂 肾组织NO检测试剂盒由R&D System Inc.,Minneapolis,USA.生产,实验操作严格按照说明书,UA、Cr标准品由广州科方生物技术股份有限公司生产。

1.4 动物模型建立 1日龄AA肉鸡正常饲喂到第10日龄,采用SMZ 0.8 g/kg体重拌料给药,连续给SMZ 7 d,鸡只出现精神沉郁、采食和饮水量明显下降、粪便稀薄及个别鸡只出现死亡时开始给各商陆提取物。

1.5 试验动物与分组 420只AA肉鸡随机分成7组,分别为商陆水煎组、商陆醇沉组、商陆减压干燥组、商陆渗漉组、消肿解毒散组、阳性对照组、空白对照组,每组60只,每组均分为3个重复。1～4组为造模用药治疗组,在饮水中按每千克体重分别添加0.5 mL水煎商陆提取物、醇沉商陆提取物、减压干燥商陆提取物、渗漉商陆提取物,连续给药5 d,第5组按照说明书在饲料中添加消肿解毒散为用药对照组,第6组造模不用药为阳性对照组,第7组不造模不用药为空白对照组。具体分组与处理见表1。

表1 分组与处理

1.6 测定指标 每日观察并记录各组采食、饮水、精神、粪便、死亡等情况。在给药前及给药结束、停药第5天,对存活鸡只分别称重,统计增重情况。在给药前、用药结束及停药5 d每组随机抽取6只鸡翅静脉采血制备血清,生化分析仪测定血清UA和Cr的含量。在给药前、用药结束及停药5 d每组随机抽取6只鸡翅静脉采血制备血清,酶联免疫试剂盒检测血清中肾组织NO的含量。在给药前、给药结束后及停药第5天每组随机抽取6只鸡剖检,取肾脏去掉脂肪和系膜称重测定肾指数变化,肾指数=肾重(g)/活体重(kg)。

1.7 疗效评价标准 痊愈:鸡精神活泼,采食饮水完全正常。显效:鸡存活,但精神、饮水及采食等未完全恢复正常。无效:鸡死亡,剖检出现肾脏肿大、花斑肾及尿酸盐沉积等症状。有效率=(痊愈数+显效数/样本数)×100%。

1.8 统计学分析 用SPSS 19.0软件对试验数据进行Duncan′s多重分析,比较各组差异的显著性;试验数据以平均值±标准差表示。

2 结果与分析

2.1 各组临床症状 在造模后用药前,各模型组鸡精神沉郁、拉稀、饮水和采食量下降;各用药组在用药第2天,采食和精神明显转好,在用药的第4天,各用药组的鸡采食量和精神状况进一步恢复,拉稀症状也逐渐好转;用药结束时,各用药组采食量和饮水基本正常,阳性对照组的饮水采食量仍显著低于各用药组和空白对照组,各用药组中商陆渗漉组鸡只精神、采食状况恢复最好。

2.2 各用药组体重变化 在给药前,各模型组间鸡只体重差异不显著,但显著低于空白对照组(P<0.05);在用药结束后,商陆各用药组和兽药对照组体重均显著低于空白对照组,但高于阳性对照组(P<0.05);停药第5天,各用药组的体重均高于阳性对照组,商陆渗漉组体重高于其他各用药组,但仍低于空白对照组(P<0.05)。结果见表2。

表2 用药前后体重变化

2.3 各组总体疗效 各商陆用药组和兽药对照组的死亡率均显著低于阳性对照组(P<0.05);各商陆用药组和兽药对照组的治愈率和有效率均显著高于阳性对照组,但低于空白对照组(P<0.05)。结果见表3。

表3 各组的总体疗效

2.4 血清中UA的含量变化 在给药前,各模型组血清中UA的含量显著高于空白对照组(P<0.05);在给药结束后,各商陆用药组和兽药对照组血清中UA的含量高于空白对照组,但显著低于阳性对照组(P<0.05);停药5 d时,各商陆用药组和兽药对照组血清中UA的含量显著低于阳性对照组(P<0.05),商陆渗漉组血清中UA的含量高于空白对照组但差异不显著(P>0.05)。结果见表4。

表4 各组血清UA的含量 (μmol/L)

2.5 血清中Cr的含量变化 在给药前,模型组血清中Cr的含量高于空白对照组(P<0.05);给药结束后各用药组的Cr含量低于阳性对照组,但仍高于空白对照组(P<0.05);停药第5天时,商陆渗漉组Cr的含量显著低于其他各用药组和阳性对照组(P<0.05),和空白对照组相比差异不显著(P>0.05)。 结果见表 5。

表5 各组血清中Cr的含量 (μmol/L)

2.6 肾组织NO的含量变化 在给药前,各模型组肾组织NO的含量显著高于空白对照组(P<0.05);给药结束后,商陆各用药组及兽药对照组的肾组织NO含量仍高于空白对照组但显著低于阳性对照组(P<0.05),停药第5天,商陆渗漉组肾组织NO的含量高于空白对照组但差异不显著(P>0.05)。 结果见表6。

表6 各组中肾组织NO的含量

2.7 各组肾脏指数变化 在给药前,各模型组的肾脏指数均高于空白对照组(P<0.05);给药结束后商陆各用药组和兽药对照组的肾脏指数均低于阳性对照组(P<0.05);停药第5天时,商陆各用药组和兽药对照组与空白对照组相比差异不显著(P>0.05),但均低于阳性对照组(P<0.05)。结果见表7。

表7 各组肾脏指数变化

3 讨论

试验结果显示,不同方法提取得到的商陆提取物均可改善肾肿、肾损伤模型鸡的体重、精神、采食、拉稀等临床症状,各用药组的治愈率和有效率均高于阳性对照组,说明商陆提取物对该药物性引起的鸡肾肿症具有较好的治疗效果,其中商陆渗漉提取物的治愈率和有效率高于其他各用药组,效果最佳。

UA和Cr是反映肾功能的重要指标[5],UA是动物体内主要代谢产物,当体内UA过高,易引起肾功能衰退,常见于急慢性肾炎、肾损伤、痛风等,Cr是肌肉在体内代谢的产物,Cr主要由肾小球滤过排除体外,血清Cr的浓度变化主要由肾小球滤过率来决定,Cr浓度升高则表明,肾小球滤过能力下降,Cr过高意味着肾脏受损。有学者研究表明,脏器指数的升高表明该脏器受损,可作为判定病变的指标之一[6]。本研究结果显示,商陆提取物能显著降低血清中UA和Cr的含量及肾指数,尤其是商陆渗漉提取物对UA、Cr和肾指数的下调水平高于其他各用药组,表明商陆提取物可能通过下调血清中UA、Cr的浓度达到治疗鸡肾肿的疗效。

NO对肾脏组织具有保护和损伤的双重作用,NO低水平持续合成,可起到抗炎、抑制肾小球系膜细胞增生的作用,但大量合成NO则会导致组织急性损伤,引发炎症。本试验结果显示,模型组鸡只肾组织NO的含量显著升高,商陆能降低人工引起的肾损伤鸡只肾组织NO的水平,其中商陆渗漉提取物能显著降低肾组织NO含量,和空白对照组相比略高于空白对照组但差异不显著(P>0.05)。庞军[7-8]等研究发现,商陆粗提物能降低阿霉素所致肾损伤大鼠的NO的浓度,起到保护肾脏的作用,和本研究结果一致。

文献记载EsA是从中国商陆的块根中提取的一种三萜皂苷类化合物,并有学者发现EsA对系膜增生性肾小球肾炎具有降低尿蛋白,改善肾小球血液循环,保护肾脏的作用[9-10]。

本实验室前期研究发现,渗漉法提取的EsA是4种提取方法中含量最高的(1.72 mg/mL),在治疗中的效果也尤为突出,EsA可是商陆中能起到通肾利尿、抗炎作用的有效成分之一,其作用机理有待进一步研究。

参考文献:

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