肌酐检测方法及常见药物对肌酐检测干扰的研究进展

王正印， 尹 元， 王伟灵

（上海中医药大学附属上海市中西医结合医院检验科，上海 200082）

血液中的肌酐水平反映了肾小球的滤过功能，是衡量肾功能的重要指标之一[1]。然而，临床上常发现血肌酐的检测结果与患者的临床表现不符，这令许多临床医生和患者感到困惑和不解。究其原因，可能与血肌酐的检测结果会受很多因素，特别是药物的干扰，且不同药物对不同检测方法的干扰方向也不同有关[2]。目前，临床实验室检测肌酐的常规方法有多种，这些方法都会受到药物的干扰。因此，本文就肌酐的检测方法及临床上常见药物对肌酐检测结果的干扰作用作一综述。

1 肌酐的检测方法

1.1 碱性苦味酸法

碱性苦味酸法是检测肌酐最经典的方法，由Jaffé最先发现这种反应过程，故又称Jaffé法[3]。其原理是在碱性条件下肌酐与苦味酸反应生成橙红色结合物，在505～520 nm波长处测其吸光度（A）值来反映肌酐的水平。这种方法的特异性不强，抗干扰能力差，易受血中很多“假肌酐”的干扰，如丙酮酸、胆红素、乙酰乙酸盐等，这些“假肌酐”也会与苦味酸发生有色反应，从而影响肌酐的检测结果[4-5]。室间质量评价结果显示，碱性苦味酸法变异系数（coefficient of variation，CV）范围为1.03%～18.23%，其中 BECKMANCOULTER检测系统实验室间的变异情况优于其他检测系统，BECKMAN-COULTER UniCel系列检测系统的CV范围为3.13%～4.90%[6]。此外，该方法易出现交叉污染。但由于该方法成本低，故很多临床实验室仍一直在使用。虽然有些临床实验室使用经过改良的碱性苦味酸法，但均或多或少地存在各种问题。因此，肌酐检测的干扰问题未从根本上得到解决。

1.2 酶法

酶法包括肌氨酸氧化酶法与肌酐亚胺水解酶法。肌氨酸氧化酶法的原理是通过肌酐酶的作用使体内的肌酐水解成肌酸和尿素，肌酸又可经一系列反应生成H2O2，生成的H2O2偶联Trinder反应，再通过比色法测定肌酐水平。有很多研究表明该法的准确度优于碱性苦味酸法，抗干扰能力相对较好且交叉污染相对较少，但肌酸、血红蛋白、维生素C和胆红素等对该方法的干扰作用较强[7]。室间质量评价结果显示，酶法的CV范围为1.50%～8.08%，其中日立系列（日立仪器+罗氏试剂）检测系统的变异情况（CV为1.50%～3.00%）优于其他检测系统[6]。肌酐亚胺水解酶法是通过肌酐亚氨基水解酶将肌酐水解，经一系列反应生成谷氨酸，通过测定340 nm处的A值降低速率计算肌酐水平。与肌氨酸氧化酶法相比，该方法稳定性更好，不易受血红蛋白、维生素C和胆红素等物质的影响，但由于试剂的稳定性较差，而且价格较高，故使用该方法的实验室并不多[8]。虽然现在酶法因其较高的稳定性和特异性而受到越来越多临床实验室的青睐，但仍有很多因素可干扰该方法的检测结果[9]。

1.3 放射性核素稀释质谱法（isotope dilutionmass spectrometry，ID-MS）

ID-MS的原理是将已知丰度与重量的放射性核素稀释剂与样本混合，用质谱检测混合前后样本丰度的变化，求得样本中某种元素水平的方法。ID-MS具有很高的特异性，而且精密度与准确度也非常好，不产生系统误差，是检验临床指标量值最常用的参考方法，但由于该方法的检测成本较高，目前还未能在临床上普遍使用。

1.3.1 放射性核素稀释气相色谱质谱法（isotope dilution-gas chromatography mass spectrometry，ID-GC-MS）

ID-GC-MS以13C和15N2作为标记物，在酸性环境中通过阳离子交换柱提纯样本中的肌酐，采用三氟乙酸衍生后再用气相色谱质谱法（gas chromatography mass spectrometry，GC-MS）检测。该方法的准确度较高，但检测前需要将样本进行一系列较为复杂的处理，费时费力，不适用于临床样本的检测，所以又促使人们研究出了另一种检测方法——同位素稀释液相色谱质谱法（isotope dilution-liquid chromatography mass spectrometry，ID-LC-MS）。

1.3.2 ID-LC-MS

ID-LC-MS不需要像ID-GC-MS一样进行复杂的样本预处理，只要将样本进行简单的离心、沉淀蛋白质并过滤，便可直接进行检测，而且检测的准确度高、特异性强。目前，国际上已把此方法作为多种临床指标定值的参考方法[7]。

1.4 高效液相色谱法（high-performance liquid chromatography，HPLC）

HPLC通过阳离子交换层析柱将肌酐分离出来，再测得其在233 nm处的A值，从而检测出血肌酐水平。该方法的精密度和准确度高于常规使用的碱性苦味酸法和酶法，但检测过程比较繁琐，用时较长，并不适合用于临床大批量样本的检测。

1.5 毛细管电泳法

毛细管电泳法是通过毛细管电泳将血清中的肌酐分离出来，然后检测234 nm处的A值计算肌酐值。该方法效率高，样本用量少，分析速度快，并可排除体内“假肌酐”对血肌酐测定的干扰。但毛细管内壁易吸附蛋白质，导致该法的重复性较差[10-11]，因此不适用于临床常规检测。

1.6 拉曼散射法

拉曼散射法是由STOSCH等[12]提出的一种检测肌酐的方法，该方法使用2-13C和2，3-15N2作为内标，计算出天然肌酐和标记物肌酐特征拉曼散射峰的强度比值，原理类似于ID-MS，但检测成本低于ID-MS，在临床上可用于常规检测。

1.7 电极法

电极法是通过半酶法，利用离子选择性电极对肌酐进行测定的一种方法。该方法虽然操作比较简单，速度也较快，但抗内源性物质干扰的能力较差，故在临床上也并不常用。

2 常见药物对肌酐检测的干扰

药物对肌酐检测的干扰已引起临床越来越多的关注，很多研究也已证实多种药物对肌酐检测存在干扰。相关药物的干扰情况见表1。

3 肌酐检测的溯源性及标准化

临床检验结果对于疾病的诊断与防治有至关重要的意义。只有保证检验结果的准确性，才能在疾病的诊断与防治方面做到更加精准。要实现检测结果的准确、可靠，最有效的方法是实现检测结果的溯源性和标准化。目前，国际上非常重视检测结果的量值溯源，而我国的临床实验室在这一方面尚需完善。由于检测肌酐的方法较多，不同仪器和试剂的检测结果之间也存在差异，加上药物等因素的干扰，因此肌酐项目的可比性与互换性较差。国家卫生和计划生育委员会及上海市临床检验中心已针对肌酐项目实施了正确度验证计划，并于2013年颁布了我国卫生行业标准WS/T414—2013《血肌酐测定参考方法——同位素稀释液相色谱串联质谱法》。加强与国际同行之间的交流与合作，建立必要的临床检验参考标准，为肌酐检测试剂和结果制定参考标准，完善我国的临床检验参考体系，是未来的一个发展趋势。目前，建立完善的检验参考体系尚有很多问题需要解决，如溯源参考物质的来源、如何保证参考物质的互通性以及溯源链和不确定度评估方案的建立等。

表1 常见药物对肌酐测定的干扰

4 总结

综上所述，影响肌酐的药物较多，而药物引起的假性结果可能会导致临床医生出现误诊，延误患者病情。因此，深入研究药物对肌酐检测的干扰机制，提高检测方法的抗干扰能力，选择适合的检测方法以及加强临床医生与检验人员的及时沟通，对提高检验质量及临床诊疗工作具有重要意义。此外，建立检测系统的溯源链和肌酐检测的参考体系，实现肌酐检测的标准化势在必行。

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