SAT-TB检测支气管肺泡灌洗液对涂阴肺结核的快速临床诊断价值

许蕴怡 蔡杏珊 谭耀驹 刘燕文 周辉林 曾少芳 马品云 刘 欣

WHO估算中国2014年的新发肺结核人数约93万，我国位居全球第三名仅次于印度和印度尼西亚。传统方法中结核分枝杆菌培养及痰涂片是确诊肺结核的重要手段，虽然痰涂片所需时间较培养法快，但阳性率总体并不高,Bactec MGIT 960平均阳性报告时间14.1 d，快速培养法报告阴性需时42 d，因此，传统方法由于阳性率低且耗时较长，已经无法满足临床上对肺结核患者快速诊断的需求。

近几年，结核分枝杆菌的分子生物学快速诊断方法已渐趋成熟，主要是以核酸作为检测靶标的分子生物学技术、基因芯片法等[1-3]。其中，结核分枝杆菌RNA恒温扩增实时检测技术(SAT-TB)是以结核分枝杆菌活菌中特异性16s rRNA为扩增靶标，准确快速地判断待检样本中结核分枝杆菌存在与否。本研究将涂阴疑似肺结核患者收集支气管肺泡灌洗液(BALF)，进行SAT-TB的检测，评价SAT-TB通过检测BALF对涂阴肺结核的快速诊断价值。

1 材料与方法

1.1 研究对象

2016年9月1日—2016年11月4日期间，共有80例广州市胸科医院涂阴疑似肺结核患者进入最后分析。研究对象首先必须满足以下条件：①发现肺部异常阴影，临床诊断为疑似肺结核患者；②痰涂片行荧光染色法结果连续3次阴性者(3次荧光染色时间间隔范围不超过1周)。入院后肺结核疑似患者行痰涂片荧光染色结果为阳性者排除此项研究。

1.2 试剂和仪器

试剂:结核分枝杆菌(TB)核酸检测试剂盒(仁度生物科技公司)；荧光涂片法染色液及快速液体法培养前处理液均由我院检验科自配。仪器：应用公司ABI7300荧光定量扩增仪；BACTEC MGIT960仪器。

1.3 方法

1.3.1 BD960快速培养法 采用Bactec MGIT 960快速培养法，按照此实验的说明书标准严格进行实验。

1.3.2 SAT-TB检测 取液化好的痰标本1 mL于EP管中，以13 000 r/min 离心 5 min,后弃上清，再加入1 mL PBS缓冲液重悬离心，弃上清。将痰液标本加入50 μL裂解液重悬，该样品即为待测样本，用超声破碎仪破碎15 min，功率300 W。后将2 μL处理物加入含30 μL扩增检测液的洁净微量反应管或者反应板中，置恒温荧光检测仪上进行检测。

1.3.3 荧光涂片染色镜检法 用竹签挑取标本的脓样、血样或干酪样部分0.05～0.1 mL于玻片正面的右侧2/3中央处，并均匀涂抹成1.0 cm×2.0 cm椭圆形痰膜，薄厚适中，室温下自然干燥。将痰涂片进行染色和镜检。

1.4 统计学分析

直接涂片检查、Bactec MGIT 960培养、SAT-TB法，所有研究对象行支纤镜刷检涂片荧光染色及支气管肺泡灌洗液，收集BALF5-10ML检测，并记录数据。

根据SPSS 18.0统计软件进行分析，各以培养法和临床诊断为标准作为参考标准，计算诊断的敏感度、特异度、阳性预测值(PPV)、阴性预测值(NPV)。

2 结果

2.1 以临床诊断为标准，SAT-TB法检测BALF对涂阴肺结核的价值

若以临床诊断作为判断肺结核的阳性标准，临床诊断肺结核包括培阳及涂阴肺结核，非肺结核或疑似肺结核为阴性标准，以临床诊断作为参考标准，SAT-TB诊断涂阴肺结核的敏感度31.7%(20/63)、特异度88.2%(15/17)、阳性预测值91.0%(20/22)、阴性预测值25.9%(15/58)。见表1。

表1 以临床诊断为标准，SAT-TB法检测BALF对涂阴肺结核的诊断结果 (n)

2.2 以培养法为标准，SAT-TB检测BALF诊断涂阴肺结核的价值

以培养法(BD960)作为参考标准，SAT-TB诊断涂阴肺结核的敏感度为53.3%(8/15),特异度为88.2%(15/17)，阳性预测值80.0%(8/10)，阴性预测值68.1%(15/22)。见表2。

表2 SAT-TB法检测BALF对涂阴肺结核的诊断结果 (n)

3 讨论

SAT-TB检测的靶标为结核分枝杆菌的16s rRNA，此检测技术特点：活菌检测、准确、快速、简便。最大的优点在于检测RNA反映标本活菌的存在与否。SAT-TB的操作时间及检测时间大大减少，与痰涂片荧光染色相比较，操作时间从1 d缩短到1.5～2 h。

将该技术与目前最新使用的其他分子生物学诊断方法进行比较，近期发表的研究报道Xpert Mtb/RIF诊断涂阴肺结核的敏感61%～81%不等[4-5]，Le Palud等[6]同样用BALF的Xpert Mtb/RIF诊断涂阴肺结核的敏感度为80%，特异度为98.6%;其他方法如Kim等[5]研究巢式PCR法诊断结核病的敏感度仅为69.4%，同一研究中的巢式PCR法和家庭式普通PCR法[7]的诊断敏感度仅分别为79.2%和59.7%,特异度为100%，而本实验若以培阳作为计算肺结核的金标准，非肺结核为阴性标准，SAT-TB诊断涂阴肺结核的敏感度为53.3%,特异度为88.2%。因此，与其他最新使用的分子生物学诊断技术相比，本研究用SAT-TB检测BALF诊断涂阴肺结核的敏感度与最新使用的其他分子生物学技术中的家庭式普通PCR法相似，只能说，SAT-TB法检测BALF能提供有价值的诊断敏感度及特异度。但是，在已有研究结果中发现SAT-TB检测BALF对结核分枝杆菌的检出率较低(见表2),在SAT-TB法阴性培阳患者临床数据中，SAT-TB对肺结核的检出率略高于Bactec MGIT 960培养法，但临床上仍有约30%以上的培阳患者通过SAT-TB法无法检出。究其原因，发现如下因素可能影响该项研究SAT-TB的检测效率：第一：标本取出后放置的时间过久，在课题实施过程中将BALF取出、分装等室温下经历的时间长达4 h以上，留取涂片荧光染色的BALF也需要放置一段时间，与痰液相比，室温放置的时间较之过长，可能导致SAT-TB对标本中16s rRNA的检出率降低；第二：临床操作气管镜时对支气管冲洗的部位BALF的量偏少，这些因素都可能导致对结核分枝杆菌的检出率降低；第三：究其培阳而SAT-TB法阴性的比例中，且临床诊断为肺结核者，笔者认为，Bactec MGIT 960培养法有其自身的优点，只要达到一定的菌量则会在培养基中正常生长。而SAT-TB操作技术虽然污染率低，速度快，但因为RNA降解快，如果患者的菌量不多，而SAT-TB操作时间控制不当或者标本前处理后，如放在超声破碎仪中留置时间过长，也可能造成SAT-TB检出率下降，出现假阴性可能性增加。此次实验标本量较少，若适当扩大标本量，预期会达到更加完善的实验数据。

此外，此次实验研究仍然发现了2例假阳性结果，因此分析在取BALF时容易通过内镜消毒不严、标本运送等操作环节造成标本污染[8]；在该项技术的今后临床使用中，以上所提及的因素是值得关注的。否则，可能限制该技术在临床上的广泛应用，降低其实际诊断价值。

综上所述，从检测时间上比较，SAT-TB的检测速度明显快于快速培养法；检测结果与培养法的一致率达72.5%，也就是说SAT-TB能够在最短的时间内提供准确率为72.5%的诊断结果；从表1、表2中可见： SAT-TB检测结核分枝杆菌阳性例数比Bactec MGIT 960快速培养法的结核分枝杆菌多(20>15)。因此，SAT-TB的检出率略高于培养法阳性检出率(31.7%>23.8%)，敏感度高。有1例非结核分枝杆菌(龟-脓肿分支杆菌)肺病患者培养为阳性，但SAT-TB对标本中含有非结核分枝杆菌者检测结果为阴性，以上实验数据中发现：SAT-TB法优于涂片法和Bactec MGIT 960培养法。而SAT-TB法含有非结核分枝杆菌者检测结果阳性有2例，考虑操作过程存在污染。也说明培养法和SAT-TB法各有各自的优点，而SAT-TB法更有其快速、敏感度高的显著特点。

因此，本实验表明SAT-TB检测BALF是一项对涂阴肺结核患者快速、有价值的诊断方法之一。

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[6] PALUD P L, CATTOIR V, MALBRUNY B, et al. Retrospective observational study of diagnostic accuracy of the Xpert MTB/RIF assay on fiberoptic bronchoscopy sampling for early diagnosis off smear-negative or sputum-scarce patients with suspected tuberculosis[J]. BMC Pulm Med,2014,14(1):137

[7] 范 琳,王 鹏,杨 妍,等.RNA恒温扩增实时荧光检测技术检测支气管肺泡灌洗液对涂阴肺结核的快速诊断价值[J].中国防痨杂志,2015,37(2):140-144.

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曲妥珠单抗属于靶向治疗性药物，乳腺癌细胞常常产生一种蛋白质——表皮生长因子受体2(英文名叫 HER2或ERBB2)，在表皮生长因子受体2作用下，乳腺癌细胞不断分裂，肿瘤便不断生长。因此，科学家希望设计一种抗体来阻断表皮生长因子受体2，于是诞生了曲妥珠单抗。曲妥珠单抗被注射到乳腺癌患者体内后，抗体与乳腺癌细胞表面的表皮生长因子受体2结合，诱导抗体依赖的细胞介导的细胞毒作用从而杀伤肿瘤细胞。另外曲妥珠单抗结合乳腺癌细胞表面的HER2受体后导致胞内信号传导通路的抑制，乳腺癌细胞便停止增殖，肿瘤也就停止生长。

作者：佚名 来源：肿瘤资讯