北京地区奶牛球虫感染情况调查

李复煌， 于 童， 苏山春， 潘保良， 郑瑞峰， 陈京媛， 刘康， 贾 婷， 汪 明

(1.北京市畜牧总站， 北京 朝阳 100107 ；2.中国农业大学动物医学院， 北京 海淀 100193 ；3.北京动物园， 北京 西城 100044)

艾美耳科的多种球虫都可引发奶牛球虫病。奶牛球虫病以出血性肠炎为特征，在世界范围内均有分布，且可在任何季节发病，尤其潮湿、卫生较差的环境易造成本病的流行。 犊牛的发病率较高，且容易造成死亡，青年牛和成年牛常呈隐性感染，感病率和感染强度均不高。 发病期间，腹泻的犊牛每克粪便卵囊数(Oocysts per gramme，OPG)可达到3万～5 万，其他犊牛摄入孢子化卵囊即可引起大规模发病，造成严重的经济损失。

为了了解北京地区奶牛球虫病的感染情况，我们于2016 年6 月-2017 年6 月选取北京地区的奶牛场进行采样，对这些地区奶牛球虫的流行情况进行调查，从而为北京地区奶牛球虫病的预防和控制提供依据。

1 材料与方法

1.1 试验仪器 100 mL 量筒、50 mL 烧杯、100 mL离心管、40 目铜筛、计数器、载玻片、盖玻片、玻璃棒、1 mL 塑料吸管，以上器具使用之前洗干净并在烘箱内80 ℃烘烤2 ～3 h。 改良麦克马斯计数板(上海润友科技有限公司)；天平(上海舜宇恒平科学仪器有限公司)；离心机(北京时代北利公司)；OLYMPUS BX53F ：显微镜(日本OLYMPUS公司)。

1.2 样品来源 2016 年6 月-2017 年6 月，于北京的顺义区、昌平区、房山区、大兴区、延庆区、密云区、怀柔区、通州区9 个远郊区县30 个养殖场采取奶牛新鲜粪样，进行球虫感染情况调查。 粪样共采集2 307 份，其中0 ～2 月龄犊牛粪样共398 份，2 ～6月龄犊牛共468 份，大于6 月龄的青年牛与成乳牛共1 441 份。

1.3 样品的采集与保存 记录场名、饲养规模与养殖条件等信息后，根据养殖规模对不同年龄段的牛进行样品采集，按照10∶1的比例采集样品。 尽量采取直肠的粪便，或采集牛舍、运动场刚排出的新鲜粪便50 ～100 g，将粪便搅拌均匀后抓取样品，排出空气，做好标记，放置于4 ℃冰箱备用。 样品保存时间不超过一周。

1.4 样品检测及感染强度确定 采用改良麦克马斯特法计数法检测样品[1]，并统计阳性粪便的OPG。

1.5 艾美耳球虫虫种初步鉴定 以牛场为单位，选取2 ～6 月龄犊牛OPG 较高(≥800)阳性粪便，进行孢子化处理。 显微镜下先观察卵囊的形态、颜色、大小、卵囊壁的厚度；然后观察孢子囊形态、大小、有无内外残体、折光体、有无卵膜孔等，根据卵囊特征参照图谱进行虫种初步鉴定。

2 结果

2.1 北京地区部分奶牛场球虫感染率与感染强度 从表1 可看出，尽管不同区县奶牛养殖规模存在差异，但在本次调查的30 个奶牛场均存在球虫感染，奶牛场的阳性率为100%；牛的平均感染率为23.88%，平均感染强度即OPG 值为549(见表1)。

2.2 不同年龄阶段牛的球虫感染率与感染强度在北京地区所调查的3 个年龄段奶牛的球虫感染率分别为：0 ～2 月龄犊牛16. 83%；2 ～6 月龄犊牛38. 25%；6 月龄以上牛21. 12%；2 ～6 月龄犊牛感染率最高。 球虫的感染强度亦有差异，各个年龄组中：2 ～6 月龄犊牛的球虫感染率最高，其平均OPG 值达到1 032；小于2 月龄与大于6月龄的牛只感染强度相对较低，其OPG 值分别为334 与267。 不同年龄阶段奶牛球虫感染率见表2。

2.3 艾美耳球虫种类及孢子化卵囊形态特征 根据孢子化卵囊的形态特征初步鉴定，北京地区奶牛场存在7 种牛艾美耳球虫，分别为：邱氏艾美耳球虫(Eimeria zuernii))、牛艾美耳球虫(Eimeria bovis)、椭圆艾美耳球虫(Eimeria ellipsoidalli)、柱状艾美耳球虫(Eimeria ellipsoidalli)、拨克朗艾美耳球虫(Eimeria bukidnonensis)、 亚 球 艾 美 耳 球 虫(Eimeria subspherica)、加拿大艾美耳球虫(Eimeria canadensis)，各种艾美耳球虫所观察到的孢子化卵囊形态见图1。

表1 北京地区不同牛场奶牛球虫感染情况

表2 不同生长阶段牛的球虫感染率与感染强度

2.4 不同种类艾美耳球虫在北京地区的感染情况 根据调查结果，30 个球虫阳性的牛场共查出7 种艾美耳属球虫，最常见的球虫虫种为邱氏艾美耳球虫，其检出率为33.01%，其次为牛艾美耳球虫，其比例占所检测卵囊的31.09%，椭圆艾美耳球虫的感染率也有25.32%之多。 检出率最低的为柱状艾美耳球虫，仅占全部检测卵囊的1.34%。而拨克朗艾美耳球虫也只有1. 45% 的检出率。北京地区不同牛场的球虫种类及其感染率见表3。

图1 牛球虫初步鉴定结果 (400 ×)

表3 北京地区奶牛感染的球虫种类及其感染率

在此次调查中，对顺义牛场4、密云牛场2、通州牛场3 发病的犊牛样品进行了孢子化培养，其他样品均为按场统计。 发病的犊牛均为多种球虫混合感染，最多的一头病牛混合感染了6 种球虫。 各个牛场的调查结果也均为混合感染而并非单一虫种。

3 讨论

3.1 本次共调查了30 个养殖场共计2 307 头牛，球虫平均感染率为23.88%，最低感染率为11.38%，最高感染率为46.84%，不同养殖场的球虫感染率不同。本次调查结果显示，北京地区牛球虫感染非常普遍，但感染率低于安徽(66.34%)[2]、云南(50%)[3]、扬州(37.16%)[4]、上海(37.46%)[5]，基本与张龙现等调查的郑州市郊8 个奶牛场奶牛球虫感染率29.6%相似[6]，但高于河南新郑黄牛13.89%的感染率[7]。 奶牛在任意年龄段均可感染球虫，感染率与感染强度最高的为2 ～6 月龄的犊牛，其感染率为38.25%，OPG 值1 032；6 月龄以上的牛，其感染率为21.12%，其OPG 值为267；感染率最低的为小于2 月龄的犊牛，感染率为16.83%，OPG 值为334。这与高曼报道的0 ～3 月龄犊牛感染率最低的结果相似[8]。 年龄是影响球虫感染的重要因素[9-10]。2 ～12月龄的犊牛体内，母源抗体的保护逐渐消失，而自身免疫系统尚未成熟，犊牛感染球虫后自身清除机制低下，易被球虫或其他病原微生物感染。 随着年龄的增长和自身免疫系统的完善，对病原入侵的抵抗力增强。 而对0 ～2 月龄的犊牛而言，其母源抗体可以保持在足够高的水平，以抵御病原入侵，保护幼龄动物免受某些疾病威胁，提高存活率。 同时，饲养管理上，0 ～2 月龄的犊牛多生活在犊牛岛，与潜在的感染源—带虫母牛是隔离饲养的，这样就减少了犊牛与病原的直接接触，因此0 ～2 月龄的犊牛感染率较低，而2 月龄以后，犊牛会从犊牛岛转移到圈舍集中饲养，提高了接触病原与互相传播的机会，加之母源抗体水平下降，使得2 ～6 月龄的犊牛成为感染率最高且OPG 值最高的生长阶段，这与其他调查研究的结果相同。 球虫感染犊牛可引起腹泻和死亡，因此，2 ～6 月龄犊牛球虫病的防控应当引起养殖场重视。

3.2 艾美耳球虫种类丰富，坦桑尼亚报道发现7 个虫种[11]，澳大利亚的调查报告指出在当地检出11种牛球虫[12]，而一项在土耳其的调查也检出11 种牛球虫[13]。 本次调查共涉及北京地区的30 个养殖场，共检出7 种艾美耳球虫，7 种牛球虫分别为：牛艾美耳球虫、邱氏艾美耳球虫、椭圆艾美耳球虫、亚球形艾美耳球虫、柱状艾美耳球虫、拨克朗艾美耳球虫与加拿大艾美耳球虫，其中优势种为牛艾美耳球虫、邱氏艾美耳球虫与椭圆艾美耳球虫，其他4 种球虫占的比例较少，所检测的3 个发病病例皆为多种球虫混合感染。 但各个地区、各个牛场、各个年龄段奶牛所流行的奶牛球虫种类及感染率有所差异。 这可能与不同牛场的地理位置、历史感染情况、牛只引进途径、饲养管理条件差异有很大的关系。