不同基因诊断技术在耐药结核菌检测中的应用对比

刘 威

（营口市老边区疾病预防控制中心 微生物检验科，辽宁 营口 115005）

结核病是因为受到结核分枝杆菌感染所致的常见的传染病之一。人类对于结核病的认识可以追溯到50万年前，虽然该病历史悠久，但是人类尚没有完全克服它，至今为止结核病仍居于引起人类死亡的传染病的第二位。据世界卫生组织统计，世界范围内活动性肺结核的患者约有2000万，据该组织统计21世纪10年，世界范围内新发的肺结核患者超过了500万，我国是人口大国，同时也是遭受结核分枝杆菌影响的大国，据我国资料显示我国居民的结核分枝杆菌的感染率超过30%[1]。因结核分枝杆菌常有变异耐药发生，因此对于耐药性的结核分枝杆菌的检测的准确性可以指导临床用药，避免了病情的延误，减轻了患者的经济负担，我疾控中心应用不同的基因检测技术检测耐药结核分枝杆菌，旨在找出简便易行、检测率高的检测方法，指导临床治疗和疾病的防控，报道如下。

1 资料与方法

1.1 基本资料：选取自2015年4月至2016年4月于营口市疾控中心痰涂片结核分枝杆菌阳性的痰标本150例（每人痰样本为3例，共450例），采用信封法随机分为试验组和对照组，试验组150例，其中男性75例，女性75例，年龄19～70岁，平均（41.9±7.9）岁，对照组150例，其中男性75例，女性75例，年龄19～74岁，平均（41.3±8.6）岁，经统计学分析两组患者年龄和性别均无统计学差异（P＞0.05），可以进行比较。

1.2 痰标本的收集方法：嘱患者均应在每日行口腔清洁连续3 d，每天留取痰样本3次，取得痰样本后应将样本放于4 ℃的环境中暂存，患者痰样本的实验室培养标准参照中国防痨协会《结核病诊断实验室检验规程》中的标准进行[2]。

1.3 实验室药敏技术：应用BASCO公司的培养基对痰标本进行一般培养，并对结核分枝杆菌应用异烟肼和利福平的药敏定性和定量检测，所有的实验室药敏培养技术均参照世界卫生组织的IUATLD标准进行。计算并统计耐药的标本数量。

1.4 传统基因扩增检测技术：将患者的痰标本进行必要的去污及相关处理后应用传统基因扩增技术对痰液标本进行测定和分析[3]。

1.5 线性探针基因检测：应用GenotypeR MTBDR plus试剂盒，将痰标本经过去污处理后制成混悬液，进过离心、水浴和再次离心后取上清液5 μL加入PCR扩增体系中，经过多次不同的条件扩增后将标本与线性探针进行杂交根据比色条判断药物的耐药性。

1.6 观察指标：观察试验组、对照组和实验室药敏培养的耐药率。

1.7 统计学分析：采用统计学软件SPSS19.0进行分析，计数资料采用（±s）表示，两组间率比较采用卡方检验，P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结 果

试验组耐药率为7.3%，对照组耐压率为3.3%，实验室药敏培养耐药率8.6%。试验组和对照组比较有统计学差异（P＜0.05），试验组和实验室药敏培养的耐药率比较没有统计学差异（P＞0.05），见表1。

表1 两组实验结果

3 讨 论

结核分枝杆菌是一类形态呈杆状，不易被染色可以抗盐酸，可以被乙醇脱色的抗酸杆菌，具有较强的抗干燥能力在干燥的痰液内可以顽强生存7个月。不仅如此结核分枝杆菌具有一定的变异性，容易发生耐药，目前研究认为该耐药性是因为结核分枝杆菌内本身发生的某些基因突变或者是因为药物的刺激而发生了基因的突变产生耐药性[4]。

本文研究了观察传统的基因扩增检测技术和线性探针基因检测技术对耐药结核分枝杆菌检测的准确性，结果表明线性探针基因检测技术较基因扩增检测技术对于耐药的结核分枝杆菌检测较为敏感与对照组比较均有统计学意义（P＜0.05），线性探针基因检测技术对耐药结核分枝杆菌的检测率优于较传统的基因扩增检测技术。

[1]陆伟,周扬,陈诚,等.江苏省社区人群结核杆菌耐药状况及影响因素研究[J].中华疾病控制杂志,2013,17(7):560-563.

[2]梁建琴,李洪敏,高华方,等.应用 PCR-荧光探针法快速检测耐多药结核分枝杆菌基因型[J].中华医院感染学杂志,2013,23(21):5140-5142.

[3]朱丽,霍贵成.环介导等温扩增法快速检测耐甲氧西林金黄色葡萄球菌[J].食品科学,2011,32(16):213-218.

[4]时金艳,李铁成,夏荣荣,等.线性探针技术用于快速筛查耐多药结核病的研究[J].实验与检验医学,2012,30(4):330-333.