茶树油对断奶仔猪血清、肝脏和肠黏膜抗氧化指标的影响

董 丽 王淑楠 刘 军 毛俊舟 彭 众 霍永久 魏瑧武 包文斌 喻礼怀

(扬州大学动物科学与技术学院，扬州 225009)

茶树油(tea tree oil, TTO)是从桃金娘科(Myrtaceae)白千层属(Melaleuca)植物互叶白千层(Melaleucaahemifolia)的新鲜枝叶中蒸馏提取所得的芳香精油。茶树油具广谱抗菌、抗肿瘤、解除焦虑和提高机体免疫功能等功效[10-11]。本实验室前期的研究结果表明，在饲粮中添加适量茶树油可一定程度促进断奶仔猪生长，降低腹泻，促进肝脏和胸腺的发育，且具有一定的调节脂肪代谢作用，可一定程度替代抗生素的使用，且添加100 mg/kg茶树油效果较好。茶树油在抗氧化方面也具有积极作用。有研究表明，茶树油中含有的某些成分能与自由基结合，进而可以清除机体内的自由基以达到减缓人体衰老、治疗疾病的作用[12]。因此，本试验在实验室前期研究的基础上，进一步研究茶树油对断奶仔猪血清、肝脏、空肠和回肠黏膜抗氧化指标的影响，并与抗生素的添加效果进行对比，从而为新型无公害饲料添加剂的开发提供一定的理论基础。

1 材料与方法

1.1 试验材料

试验所用茶树油为粉状饲料添加剂，由无锡晨芳生物科技有限公司提供，其主要成分含量为：松油醇-4>60%，对伞花烃5%～10%，桉叶素2%～10%，α-松油醇>3%，α-松油烯<10%，α-派烯<0.5%。

1.2 试验设计与饲养管理

试验选取21日龄体重[(6.73±0.12) kg]相近的健康“杜×长×大”三元杂交断奶仔猪120头，采用单因子试验设计，随机分为5组，每组6个重复，每个重复4头仔猪，公母各占1/2。5个组分别为对照组(CON组，饲喂基础饲粮)、抗生素组[(ANT组，饲喂基础饲粮+200 mg/kg硫酸黏菌素(10%)+75 mg/kg金霉素(15%)]、低茶树油组(LTO组，饲喂基础饲粮+50 mg/kg茶树油)、中茶树油组(MTO组，饲喂基础饲粮+100 mg/kg茶树油)和高茶树油组(HTO组，饲喂基础饲粮+150 mg/kg茶树油)。试验期21 d。基础饲粮参照NRC(2012)仔猪营养需要标准并结合生产实践配制，其组成及营养水平见表1。

1)预混料为每千克饲粮提供 The premix provided the following per kilogram of the diet: VA 6 000 IU，VD 3 400 IU，VE 50 IU，VK32 mg，VB13.5 mg，VB25.5 mg，VB63.5 mg，VB1225.0 μg，生物素 biotin 0.05 mg，叶酸 folic acid 0.3 mg，D-泛酸D-pantothenic acid 20 mg，烟酸niacin 20 mg，氯化胆碱 choline chloride 500 mg，Fe 110 mg，Zn 100 mg，Cu 20 mg，Mn 15 mg，Se 0.30 mg，I 0.40 mg。

2)消化能为计算值，其余为实测值。DE was a calculated value, while the others were measured values.

5组试验猪饲养在同一猪舍，各重复皆分隔为相同的圈，饲养管理条件一致。试验期间试验猪没有进行免疫接种，全期无死淘。特别申明：试验于2016年6月在太仓市金诸种猪场进行，当时农业部有关禁用硫酸黏菌素作为饲料添加剂的文件尚未出台，本试验旨在研究可替代硫酸黏菌素等抗生素的饲料添加剂，故设计了添加了硫酸黏菌素的对照组，所有饲喂抗生素的猪后期都仅用于科研。

1.3 检测指标

试验结束前1天空腹24 h，采集血样，试验结束当日，每个重复选取1头断奶仔猪进行称重屠宰，采集血液用于分离血清，采集肝脏，另冲洗肠道内容物并刮取空肠和回肠黏膜。测定血清、肝脏、空肠黏膜和回肠黏膜中相关抗氧化指标。

1.3.1 血清抗氧化指标检测

试验第21天，每个重复选取1头仔猪(即每个试验组选取6头，公母各占1/2)，前腔静脉采血10 mL，静置15 min后离心(3 000 r/min，10 min)取上清得到血清，分装后置于-20 ℃冰箱冷冻保存待测。测定血清中总抗氧化能力(total-antioxidant capacity, T-AOC)，超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(glutathione peroxidases,GSH-Px)、过氧化氢酶(catalase,CAT)活性，丙二醛(malondialdehyde,MDA)、还原型谷胱甘肽(glutathione,GSH)、H2O2含量。试剂盒均购自南京建成生物工程研究所，测定步骤按照试剂盒说明书进行。

1.3.2 肝脏抗氧化指标检测

取样品肝脏用生理盐水按1∶9(质量体积比)制成匀浆，充分混匀后离心(3 000 r/min、10 min)，吸取上清液即酶提取液。离心的上清液用于测定肝脏T-AOC，SOD、GSH-Px、CAT活性，GSH、H2O2、MDA含量。试剂盒均购自南京建成生物工程研究所，测定步骤按照试剂盒说明书进行。

1.3.3 肠黏膜抗氧化指标检测

空肠、回肠测量称重后，用生理盐水冲洗肠道，剪开肠段，去除空肠中内容物，用吸水纸吸干表面的水质以及其他杂质，用载玻片刮取空肠、回肠黏膜，置于-80 ℃保存。取待测样品用生理盐水按1∶9(质量体积比)匀浆，充分混匀后离心(3 000 r/min、10 min)，吸取上清液，用于测定空肠、回肠黏膜中T-AOC，SOD、GSH-Px、CAT活性，GSH、H2O2、MDA含量。试剂盒均购自南京建成生物工程研究所，测定步骤按照试剂盒说明书进行。

1.4 统计分析

试验数据经Excel 2013初步计算处理后，采用SPSS 19.0软件对试验数据进行单因素方差分析(one-way ANOVA)，用Duncan氏法对各组间进行多重比较，结果以平均值表示，P<0.05表示差异显著。

2 结 果

2.1 茶树油对断奶仔猪血清抗氧化指标的影响

由表2可知，HTO组仔猪血清T-AOC显著高于LTO和MTO组(P<0.05)，MTO组仔猪血清SOD活性显著高于HTO、CON和ANT组(P<0.05)，LTO组仔猪血清H2O2含量显著低于MTO、HTO和CON组(P<0.05)。

2.2 茶树油对断奶仔猪肝脏抗氧化指标的影响

由表3可知，LTO组仔猪肝脏T-AOC显著高于MTO组(P<0.05)，且LTO和MTO组仔猪肝脏T-AOC显著高于CON和ANT组(P<0.05)；LTO和MTO组仔猪肝脏GSH-Px活性显著高于HTO、CON和ANT组(P<0.05)，且HTO组仔猪肝脏GSH-Px活性显著高于ANT组(P<0.05)；LTO和MTO组仔猪肝脏SOD活性显著高于CON组(P<0.05)；LTO组仔猪肝脏CAT活性显著高于HTO组(P<0.05)，且LTO、MTO和HTO组仔猪肝脏CAT活性均显著高于CON组(P<0.05)；HTO组仔猪肝脏GSH含量显著高于CON和ANT组(P<0.05)；LTO和MTO组仔猪肝脏H2O2含量显著高于CON、ANT和HTO组(P<0.05)。

2.3 茶树油对断奶仔猪空肠黏膜抗氧化指标的影响

由表4可知，HTO组仔猪空肠黏膜GSH-Px和SOD活性显著高于MTO和ANT组(P<0.05)；LTO、MTO和HTO组之间仔猪空肠黏膜H2O2含量差异不显著(P>0.05)，但均显著低于CON组(P<0.05)。

2.4 茶树油对断奶仔猪回肠黏膜抗氧化指标的影响

由表5可知，HTO组仔猪回肠黏膜SOD活性和GSH含量显著高于CON组(P<0.05)；LTO、MTO和HTO组之间仔猪空肠黏膜MDA含量差异不显著(P>0.05)，但均显著低于CON组(P<0.05)。

表2 茶树油对断奶仔猪血清抗氧化指标的影响

同行数据肩标不同小写字母表示差异显著(P<0.05)，相同或无字母表示差异不显著(P>0.05)。下表同。

In the same row, values with different small letter superscripts mean significant difference (P<0.05), while with the same or no letter superscripts mean no significant difference (P>0.05). The same as below.

表3 茶树油对断奶仔猪肝脏抗氧化指标的影响

表4 茶树油对断奶仔猪空肠黏膜抗氧化指标的影响

3 讨 论

3.1 茶树油对断奶仔猪血清抗氧化指标的影响

表5 茶树油对断奶仔猪回肠黏膜抗氧化指标的影响

3.2 茶树油对断奶仔猪肝脏抗氧化指标的影响

3.3 茶树油对断奶仔猪小肠黏膜抗氧化指标的影响

有研究表明，早期断奶对血清中抗氧化状态影响稍弱，但更容易对仔猪肠道造成氧化损伤[20]。研究表明，氧化应激对断奶仔猪的危害主要表现为肠道黏膜受损、屏障功能降低，从而引发严重腹泻、养分消化利用率降低[21]。本研究发现，饲粮添加茶树油和抗生素，断奶仔猪空肠黏膜H2O2含量和回肠黏膜MDA含量显著降低；饲粮添加150 mg/kg茶树油，断奶仔猪回肠黏膜SOD活性和GSH含量显著高于CON组，空肠黏膜GSH-Px和SOD活性显著高于ANT组。这些结果说明，在断奶仔猪饲粮中添加茶树油和抗生素，均可减少其空肠H2O2含量，缓解其回肠的脂质过氧化，添加150 mg/kg茶树油仔猪空肠黏膜清除自由基的能力强于添加抗生素，仔猪回肠黏膜清除自由基的能力显著增强。这与我们实验室前期的研究结果相一致，前期研究表明，饲粮中添加适量茶树油可一定程度促进断奶仔猪生长，降低腹泻，这可能与茶树油可提高断奶仔猪肠道黏膜抗氧化功能有关。另有研究表明，茶树油可抑制黏膜炎症，在手帕上滴2滴茶树油，把手帕放在鼻子下面，5 min后鼻子通畅，暗示了茶树油对黏膜的抗氧化功能和免疫功能的改善。目前茶树油主要作为外用产品用于护肤、消炎抗菌，或者用作食品添加剂来调味，但其作为饲料添加剂用于畜禽养殖的研究尚未见报道，茶树油对肠道黏膜抗氧化功能的研究也尚未报道。茶树油的原产国是澳大利亚，目前，我国的广东、广西、云南等省份也开始规模种植加工茶树油，每年在广西的产量就达数十吨，未来茶树油有望作为一种饲料添加剂应用于养猪生产，提高断奶仔猪抗氧化应激的能力，减少腹泻和缓解断奶应激。

4 结 论

饲粮中添加茶树油可提高断奶仔猪血清、肝脏和小肠黏膜抗氧化酶活性，减少血清和空肠黏膜H2O2含量，进而提高断奶仔猪的机体抗氧化功能，建议添加量为100 mg/kg。

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*Contributed equally