红芪总黄酮对人白血病细胞诱导分化的分析及研究

邓婉蓉 戴恩来 陈彻

（甘肃中医药大学 甘肃 兰州730000）

红芪是多序岩黄芪干燥根，为同类产品中的上品。其有着排毒利尿，固表益气以及排脓敛疮的效果，进而在临床上被广泛使用[1]。

总黄酮为红芪内主要成分，这种成分对于白血病细胞的生长、繁殖以及分化等有着一定影响，相关作用机制也成为了当前临床中的热点研究问题。结合实际情况，本文全面分析红芪总黄酮对人白血病细胞诱导分化的影响情况，为日后实验提供理论性依据，现将具体结果汇报如下。

1.资料与方法

1.1 一般资料

选择实验药材红芪为研究材料，经鉴定，确认其为上品。实验室完成红芪总黄酮的分离、纯化工作。检测得出有效物质量为88.30%。择取2014年5月—2017年5月我院收治的100例白血病干细胞样本进行研究。

1.2 方法

择取白血病患者白血病患者骨髓，开展KG-1a细胞培养，以免疫磁珠法分选白血病肿瘤干细胞并培养。计算红芪总黄酮作用不同时间（总黄酮浓度为60、80以及100mg/L），同时以等量RPMI1640为对照，开展MTT法检测红芪总黄酮对白血病干细胞增殖的影响，对白血病干细胞周期以及凋亡情况进行流式检测，PCR检测c-fos等相关基因mRNA并分析可诱导基因的表达量，利用western blotting技术检测MAPK等相关蛋白表达，开展RNA干扰技术分别封闭c-fos等基因，westernblotting检测相关蛋白表达，全面分析表达基因与c-fos之间的网络关系。

1.3 统计学方法

使用SPSS20.0专业统计学软件，开展方差检验分析，当P＜0.05时，组间数据存在统计学差异。

2.结果

2.1 细胞周期和凋亡率检测情况

经检验证实，使用不同浓度的红芪总黄酮处理后，HL-60细胞周期停滞在G0/G1以及G2/M期。存在浓度依赖关系，与之相对应的S期细胞减少，但促细胞凋亡作用不显著。详细情况见表。

表 红芪总黄酮对HL-60细胞周期和凋亡影响情况（±s，%）

表 红芪总黄酮对HL-60细胞周期和凋亡影响情况（±s，%）

注：和对照组相比，△P＜0.05。△△P＜0.01。

未处理组41.9±4.252.2±3.16.0±1.4 2.2±0.3处理组6049.4±3.6△44.5±6.56.2±1.72.8±0.9 8060.6±9.1△△31.3±4.9△△ 8.2±1.2△3.8±1.2 10062.8±8.6△△26.6±2.1△△ 10.4±2.2△3.4±1.0

2.2 分化相关基因检测

HL-60细胞使用浓度为60、80以及100mg/L的红芪总黄酮处理之后，C-fos表达分别为24.03±2.81，32.34±2.55，38.73±3.14，未处理组为16.84±1.69.与未处理组相比，处理组相关数据存在统计学差异，P＜0.05.处理组之间的C-fos表达呈现出剂量依赖关系。

3.讨论

红芪中含有黄酮类化合物低分子天然植物成分。上述化合物主要有A苯环以及B苯环组成，经三个碳原子相互连接，构成的多酚类化合物。

总黄酮广泛存在于红芪皮、果实、叶以及根部。其在黄芪中主要以游离或者糖甙复合物形式存在[2]。因糖种类和连接位置存在差异，会结合形成多类黄酮苷。主要为黄酮醇类、黄酮类、双黄酮类、异黄酮类等相应的醇类。就黄酮类化合物来讲，主要包含金雀异黄素、蛇葡萄素、儿茶素、槲皮素等等。

黄酮类化合物为天然植物陈分，毒性小，为当前人们比较关注的化合物之一。

此类成分对于白血病细胞增殖、分化以及凋亡方面的影响机制，也成为了当研究热点，但值得说明的是，迄今为止，临床上对于红芪所含有的总黄酮对于白血病细胞作用研究不多[3]。

本文指出，HL-60细胞使用总黄酮作用处理之后，CD11b的表达量上升，NBT的还原水平明显降低，证实使用红芪总黄酮对早幼粒细胞进行处理，能令其取得成熟粒细胞的表面标志着以及相关功能。经处理后，HL-60细胞会停滞在G0/G1期、G2/M期，S期细胞明显减少，进而令细胞增殖速度减少，趋向于分化状态[4]。

细胞增殖和分化会受到有关基因调控影响。而C-fos原癌基因属于蛋白质Fos，编码分子量为55KD，其中包含380个氨基酸残基。C-fos对于某些生长因子以及分化诱导刺激反应早期应答基因。这种基因产物和诱导分化存在极强相关性。其在成熟的粒细胞与单核细胞内大量表达。而在没有分化的人早幼粒细胞中并不表达其编码的蛋白质DNA结合性蛋白。其主要以第三信使方式调控基因表达[5]。

本实验证实，经总黄酮作用后，HL-60细胞的C-fos蛋白表达量上升，提示这种基因可能为总黄酮作用靶分子。值得说明的是，很多细胞外信号会对C-fos表达起到促进作用。另外，经过MAPK，PKA和PKC通路，也能令c-Fos发生磷酸化反应，进而对其活性造成影响。Fos家族成员可能和C-jun二聚化，进而形成AP-1转录因子，对涉及到分化以及增殖的基因加以表达。

由此能够看出，上述通路与有关基因是否能够和红芪总黄酮作用有关，为日后研究方向，其也势必成为红芪总黄酮诱导白血病分化提供更加有力的证据。

】

[1]崔笑梅，王志平，张志华，等.红芪多糖增强LAK细胞对膀胱肿瘤细胞杀伤作用的实验研究[J].中药药理与临床，1999，15(2)：18.

[2]海力茜，梁鸿，赵玉英，等.多序岩黄芪化学成分研究[J].中国中药杂志，2002，27(11)：843

[3]王玮，王琳.黄酮类化合物的研究进展[J].沈阳医学院学报，2002，4（2）：115.

[4]杨向东，李红玉，李德冠，等.蝎毒多肽对白血病细胞株KG1a干细胞活性的影响[J].中华中医药杂志，2015(4)：1278-1281.

[5]张宇，田劭丹，侯丽，等.川芎嗪对急性髓性白血病KG-1a细胞表面标志物的影响[J].现代生物医学进展，2015，15(5)：844-848.