红花中羟基红花黄色素A的提取方法与含量测定研究进展

李 栋，马秉智，梁莹莹，张淑君，张相林，赫 军

（中日友好医院 药学部，北京 100029）

中药红花为菊科植物红花 （Carthamus tinctorius L）的干燥花，是活血通络、祛瘀止痛之良药，临床上主要用于治疗痛经、跌打损伤、冠心病、心绞痛和高血压等[1]。羟基红花黄色素A（hydroxysafflor yellow A，HSYA）是红花中最具药理活性的水溶性成分，多年来一直是科研的热点，临床研究表明，其具有抗凝血、抗氧化、预防脑缺血、保护血管内皮细胞和神经等作用，是2015版中国药典收录红花药材的质量控制指标成分之一[2，3]。其主要提取方法为渗漉法、水提醇沉法、超声提取法等。本文综述了近十几年来HSYA的提取方法和含量测定方面的研究论文，以期为开发利用HSYA提供参考。

1 HSYA的提取方法

1.1 渗漉法

喻樊[4]以HSYA和红花黄色素的含量作为评价指标，采用正交试验优选提取工艺，最佳提取条件是以60%乙醇浸渍12h，25倍量进行渗漉，渗漉流速为1ml/min。

1.2 水提法

李云云[5]通过正交实验讨论了提取温度、提取时间、提取次数、料液比对提取效果的影响。实验结果表明，影响因素的大小依次是提取时间、提取次数、提取温度、料液比；最适宜提取条件是：温度为45℃、时间为45min、料液比为1∶20，提取 2 次。

1.3 醇沉法

袁佳等[6]采用L9（34）正交试验法，以HSYA转移率、浸出物得率和纯度为指标进行综合评分，确定红花提取液醇沉的最佳工艺条件为：终点乙醇质量分数50%，药液初始质量浓度 1.15g/ml，搅拌速度500r/min，药液pH5.0。该工艺操作简便、效果稳定，HSYA转移率、浸出物得率和纯度较高。

1.4 超声提取法

孙燕雯等[7]通过单因素试验选取试验因素与水平，根据中心组合试验设计原理，以HSYA为指标成分，以其提取率为响应值，采用三因素三水平的响应面法建立数学模型并获得最优提取条件。实验结果显示最佳提取工艺为：超声温度 55℃，液料比 16∶1，超声时间 39min，提取 3次。徐忠亮等[8]用超声提取法，以HSYA百分含量为指标，考查提取时间、提取次数、提取液用量、提取温度对HSYA纯化的影响。结果显示HSYA的最佳提取工艺为：加水8倍量，提取温度为30℃，提取次数为3次，时间为1h/次。通过6次验证试验HSYA含量平均值为16.157mg/g，该工艺稳定，重现性好。

1.5 闪式提取法

王玥等[9]以提取液中HSYA的含量为指标，采用正交试验设计，对闪式提取的影响因素进行考察，并在提取率、提取时间、耗电量等方面与文献报道的方法进行比较。结果显示最佳提取工艺是以40倍水为溶剂，闪式提取2 min，100V电压。何惠芳等[10]应用单因素试验及正交实验优化闪式提取法提取HSYA的最佳工艺条件，包括最佳溶剂倍数、提取时间、提取电压，并与温浸提取法进行比较。结果显示闪式提取最佳工艺为40倍水，闪式提取2.5min，90V电压。

1.6 大孔树脂纯化法

唐红等[11]考察了HPD200A大孔树脂对羟基红花黄色素A分离的最佳条件。用温浸法提取，选用ZTCl+1澄清剂进行初步除杂，采取静态吸附和动态吸附方法筛选HPD200A型大孔树脂最佳条件。运用紫外-可见分光光度法测定红花液中羟基红花黄色素A的含量，薄层色谱定性分析。显示最佳洗脱剂浓度为浓度50%乙醇，上样液pH为5，洗脱流速为1ml/min，径高比为 l∶7，柱体积为2%。 李云云[5]为提高红花黄色素中HSYA的含量，通过大孔吸附树脂对HSYA的吸附量、解吸率和静态吸附的动力学研究，考察了9种大孔吸附树脂的吸附性能。实验结果表明，HPD200A型号的树脂对HSYA的吸附量和解吸率都比较高，并且对大孔树脂静态吸附动力学的研究进一步说明分离纯化HSYA适宜的树脂是HPD200A。

1.7 其他方法

李励珺等[12]使用有机溶剂二甲基亚砜（DMSO）提取HSYA。采用HPLC法，以HSYA含量为指标，采用正交试验优选最佳提取工艺，考察沉淀试剂及用量，并考察不同除杂方式的效果。其最佳制备工艺为：14倍量DMSO常温避光搅拌30min除杂，抽滤；滤渣加入14倍量DMSO浸泡1h，在 80℃下，密闭热提 50min，抽滤，滤渣加入 12倍量DMSO，在 80℃下，密闭热提50min，抽滤，合并滤液；滤液加入3倍量乙酸丁酯，离心，沉淀用适量乙醇洗涤，干燥，最终沉淀物纯度为14.56%。 本实验首次以非水溶媒为提取溶剂制备HSYA，该工艺具有操作简单、经济、环保等优点。李页瑞等[13]用罐组式逆流提取技术提取HSYA。杨艳红等[14]采用微波萃取法提取HSYA。

2 HSYA的含量测定方法

2.1 HPLC法

因具有操作简便、快速、准确可靠、重现性好和专属性强等特点，HPLC法已广泛应用于HSYA的含量测定。谭生建等[15]在测定强筋健骨散中羟基红花黄色素A的含量是使用了HPLC测定方法。杨辉等[16]对HSYA进行提取工艺改进时采用HPLC法测定其含量。王秀梅等[17]使用HPLC法建立红花地上部分中HSYA和木犀草素的含量测定方法。李江然等[18]采用HPLC法测定大鼠口服HSYA后粪便和尿液中含量。艾散江等[19]建立了HPLC法测定药食同源红花中HSYA含量的方法。张朝阳等[20]建立HPLC法测定大鼠口服红花水提物和红花黄色素后尿、粪和胆汁中HSYA的含量。具体检测条件和回收率见表1。

2.2 紫外分光光度法

梁颖等[21]对天然色素红花黄色素中HSYA的含量进行检测时，采用了紫外分光光度法。波长403nm下线性范围为 0.0176～0.0704mg/ml。

2.3 近红外光谱（NIRS）透射法

与传统分析方法相比，近红外光谱特性稳定，具有快速分析、无需消耗试剂等特点，是一种快速无损的绿色分析技术。陈雪英等[22]采用NIRS透射法对红花罐组式逆流提取过程中HSYA的含量进行快速无损的测定。校正模型相关系数达到0.982，预测相关系数达到0.965，校正集预测误差均方根 （RMSEC）和验证集预测误差均方根（RMSEP）分别为 0.053和 0.075，校正集相对偏差（RSEC）和验证集相对偏差（RSEP）分别为3.96%和5.25%。结果表明，NIRS可以作为一种准确、快速、无损的检测方法用于检测中药逆流提取过程有效成分含量变化规律。

2.4 液质联用（LC-MS）法

相比HPLC，LC-MS法具有更高的检测灵敏度和更小的杂质信号干扰，常用于药代动力学研究中样品的批量分析。李长印等[23]采用LC-MS/MS法测定人血浆中HSYA的浓度，采用 Agilent ZORBAX SB C18 （3.0mm×100mm，3.5μm）色谱柱进行等度洗脱分离，流动相为0.2mmol/L乙酸铵水溶液∶甲醇=30∶70。质谱检测采用负离子模式，扫描方式为多反应检测，结果显示血浆中HSYA的线性范围为8.57～4185μg/L（r为 0.9949～0.9992），定量下限 8.570μg/L，日内日间精密度RSD均＜7%；低、中、高3个浓度下的平均介质效应分别为116.62%、119.06%和 115.72%，（RSD分别为3.27%、3.42%和4.93%），平均提取回收率分别为77.75%、80.90%和 80.76%，（RSD 分别为 1.70%、1.78%和4.15%）。

HSYA的水溶性好，但是对热不稳定，在提取分离过程中尽量不要长时间高温处理，避免分解破坏[24]，分离得到的HSYA要及时置冷藏室保存。

表1 用于HSYA分析和定量的HPLC法

[1]郑虎占，董泽宏，佘靖，等.中药现代研究与应用[M].北京：学苑出版社，1998.2057.

[2]Zhou XD，Tang LY，Xu YL，et al.Towards a better understanding of medicinal uses of carthamus tinctorius L.in traditional chinese medicine：a phytochemistry and pharmacologicalreview [J].JournalofEthnopharmacology，2014，151（1）：27-43.

[3]国家药典委员会.中华人民共和国药典.一部[S].北京：中国医药科技出版社，2015.151.

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