实验动物山羊自体输血及交叉配血试验

王振芳, 宋 倩, 王 帅, 王 亚, 马建青, 吴占勇

(冀中能源邢台矿业集团总医院, 河北 邢台054000)

储存式自体输血是自体输血的一种方式,即根据患者手术时间的长短、失血量的预测以及患者自身条件,在手术前数天乃至数月前,采集自体血液储存,以备手术使用[1]。 该种输血方法是一种科学、安全、合理、经济、易行的输血新技术,国内不少医疗单位开展该项新技术[2-4]。 但储存式自体输血,在实验动物山羊术中应用临床少见。 对山羊的血型鉴定及交叉配血国内未见报道。 为防止山羊在新术式实验出血过多而导致死亡,笔者尝试对实验山羊进行储存式自体输血,取得好的效果,同时,也进行了山羊术前血型鉴定及交叉配血实验。 现简介如下。

1 材料与方法

1.1 实验山羊简介 本院骨科研究中心饲养的山羊3 只(分别称山羊A、B、C),其中山羊A 雌性,年龄2 岁,体重28.5 kg;山羊B 雌性,年龄2 岁,体重27.2 kg;山羊C 雌性,年龄1.5 岁,体重23.7 kg。

1.2 试剂与仪器 A 型红细胞、B 型红细胞及O 型红细胞(批号20170907、20171029)为长春博德生物技术有限责任公司生产;微柱凝胶血型卡、配血卡(批号：20170815、20170908),FYQ 免疫微柱孵育器,TD-3A 型血清学离心机,均为长春博德生物技术有限责任公司生产,2005 - 2 型血库专用离心机(BaSo 贝索)。

1.3 血型鉴定 (1)将山羊血标本的压积红细胞洗涤3 次;(2)用低离子介质溶液配成0.8%红细胞悬液;(3)取出微柱凝胶血型卡,标记检测号,撕开封口膜;(4)微柱凝胶血型卡前三孔从左到右依次各加入山羊红细胞悬液50 μL;微柱凝胶血型卡后三孔从左到右依次加入山羊血浆各50 μL,再分别加入0.8%O 型红细胞、A 型红细胞、B 型红细胞各50 μL,离心5 min 观察结果。

1.4 交叉配血 采用微柱凝胶卡法和试管法。

2 结果

2.1 3只山羊血型 鉴定结果见表1。

2.2 交叉配血试验 山羊A 与供血山羊B、山羊C交叉配血;山羊B 与供血山羊A、山羊C 交叉配血;山羊C 与供血山羊A、山羊B 交叉配血。 主侧管内容物为受血者血清加供血者红细胞,次侧管内容物为供血者血清加受血者红细胞。 用微核凝胶卡和盐水试管法主次侧均无溶血无凝集。

3 讨论

临床医生在探索某些高难新术式中,有时需要先在动物身上做实验。 我院骨科研究中心,选用山羊开展新术式,在开展新术式过程中,为预防因山羊出血过多而达不到手术预期效果的情况发生,实验人员对山羊开展了术前储存式自体输血,与此同时,还应用微柱凝胶新技术,对山羊的血型鉴定和交叉配血试验进行了尝试。 微柱凝胶技术基于生物学凝胶过滤技术和离心技术及免疫化学抗原抗体特异性反应,将凝胶抗及人球蛋白血清抗体或其他抗体装入微柱中离心,抗原抗体反应形成凝集块经离心不能通过凝胶间隙,而留在凝胶上层,呈阳性反应,未凝集的红细胞离心时还可通过凝集间隙,而沉积于凝胶管底部,呈阴性反应[5]。 该方法所用红细胞不用洗涤,操作方法简便,尤其适合批量标本检测,且试验结果明确可靠,重复性好,判读结果人为因素少,并可拍照永久保存。

表1 3 只山羊血型鉴定结果

由表1 可知,山羊血型正定型时,山羊的红细胞加入微柱凝胶血型卡中,微柱管中的单克隆抗-A、抗-B、抗-D 均出现阴性结果。 正定型结果好似人类O 型RhD 阴性血型;反定型山羊血清加人类Ac、Bc全出现凝集现象,反定型也似人类O 血型,但对照管山羊血清加O 型标准红细胞,同样出现凝集现象。 对照管内所加的O 型标准红细胞,因其红细胞上无抗原,无论待检山羊为何血型,不应该出现凝集红细胞现象。 对照管出现阳性结果,推测可能有两种原因：其一可能有干扰因素存在,其二可能山羊血清中有抗人类红细胞的种族抗体。 由于试验的标本例数太少,有待于日后扩大样本,探索检测山羊血型更匹配的方法。

笔者对山羊术中输血设计了两套方案：其一自体输血,3 只山羊均在术前2 ～3 周各采自体全血100 mL,术中将预存血液回输于山羊,山羊术中、术后均无输血反应,术后也未发生伤口感染,山羊输血后效果良好。 其二异体输血准备,为防止山羊术中万一大出血,实验人员术前将山羊A、山羊B、山羊C 均进行了交叉配血,3 只山羊互相配血结果全为阴性,一旦任何1 只山羊术中大出血,输自体血后仍然需要输血时,其他待备山羊的预存血液均可输用。