种鸡场ELISA数据分析浅析

华裕农业科技有限公司 河北蛋鸡繁育工程技术研究中心 056000

ELISA检测已成为种鸡场评估鸡群健康状况的一种常用手段，主要用于垂直传播性疾病感染水平、疫苗免疫后效果的评价，以及雏鸡产品质量的评估等。目前常用试剂为IDEXX产品，但在检测过程中会对数据产生质疑，故对此进行简单的分析，也希望与同行进行交流。

1 白血病检测

简称ALV，属于肿瘤性疾病，可以垂直和水平传播，ALV-Ag检测采用双抗体捕获法检测抗原，也就是我们常说的P27抗原检测，为IDEXX家禽产品ELI检测唯一的抗原检测方法。样本为蛋清、肛拭子等，该检测阳性不能区分是否为内源性白血病。血清检测方面主要包括ALV-J亚型抗体及ALV-A/B亚型，目前通常日龄较大的鸡群会有抗体阳性检出，但ALV-Ag检测多为阴性，表明鸡群还在安全状态。很多公司现在把血清学检测作为一个参考，重点是把P27抗原结果和抗凝全血病原分离结果作为最终判定。目前常用的病原分离细胞为DF-1细胞，病原分离也是公认的白血病检测标准。

2 网状内皮组织增生症抗体检测

简称REV，与季节性有很大关系，和蚊虫传播相关。现在国内报道会有抗体阳性检出的结论，但抗体阳性率普遍较低，维持在3%以内。验证是否存在野毒感染，也常用到病毒分离的方法，一般会用到DF-1细胞，样品是抗凝全血，最终用PCR或免疫荧光手段进行鉴定。阳性场区要加强种鸡管理，注意病毒性疾病的发生，同时也要关注种鸡下一代的抗体水平。

REV在大日龄鸡中会有检出，但鸡群不会有临床症状。目前普遍认为10%以内为安全范围，但是小日龄阳性率较高可能会出现肿瘤疾病的发生，可以跟踪检测抗体阳性率及抗体滴度变化做动态观测。

3 滑液囊支原体抗体检测

简称MS，为眼下困扰种鸡养殖的主要疾病之一。IDEXX公司认为，无灭活苗免疫转阳前6周为感染日龄，而且在MS灭活苗免疫后抗体滴度超过6000，就存在野毒感染。现在普遍认为抗体滴度高于6000，表明关节腔内已经感染，再用药物防控效果不会很好。目前MS活苗在国内已开始少量使用，因其主要是占位效应，所以免疫时间很重要，应尽早免疫，控制在20日龄以内，而且免疫后不要使用MS防控药物。评估办法是免疫后阳性率很低，同时在不同日龄采集咽拭子进行PCR检测，并要区分是否为野毒感染，最终制定防控方案。

4 MG抗体检测

目前MG的感染情况要低于MS，常用疫苗为F株、6/85和TS-11，如果想开展疾病净化，就要按照毒株强弱进行使用。目前MG的免疫也属于占位效应，产生体液抗体的能力较弱。普遍认为6/85免疫后6周检测均为阴性、TS-11免疫后6周阳性率在20%以内，而且抗体滴度控制在2000以内，做该免疫要做到免疫前鸡群为阴性，免疫后2周不用药物防控。如果免疫前转阳，会对疫苗的效果产生影响。现实中支原体的防控药物常为泰乐菌素、土霉素和利高霉素等。

目前MG、MS免疫是同日龄免疫，TS-11与MSH株在咽喉在存在竞争占位效应，同时保证免疫前鸡群为阴性状态，可以在免疫前进行药物净化。目前采集咽拭子进行MS PCR检测较为常用，但对于免疫活苗场区活苗和野毒区分仍是国内检测的难点。

5 CAV抗体检测

CAV可感染早期雏鸡，因此母源抗体很重要。IDEXX建议在16周龄开展检测，无论免疫鸡群或野毒感染均要达到100%抗体阳性。如果雏鸡35日龄之内没有疾病发生，表明母源保护良好。如果出现免疫抑制、皮肤溃烂等现象，即表明可能存在感染。目前CAV抗体水平在各场的差异较大，有的能达到100%阳性，有的则很低，因此也要进行综合评价。

目前活疫苗免疫后抗体阳性率并不高，可能与细胞免疫有关，而且可以长期处于较低阳性率水平，可能表示与免疫后感染压力不大有关。尤其CAV检测同场区个别大日龄批次阳性率高比较好，但是发现个别批次阳性率较低，此时可能与环境生物安全较好有关。此时可以在短时间内降低标准或进行免疫，提高阳性率，以降低下一代雏鸡早期感染的风险。

6 REO抗体检测

目前国内的阳性率偏高，有人认为可以将其作为场区生物安全是否良好的一个指标。因其属于环境中常在病毒，抗体滴度可能很高，但无临床症状。个人认为，目前评价场区REO情况的主要指标为临床表现，但要注意与MS进行区分。

7 IBV抗体检测

IBV属于免疫项目，目前我们检测到父母代0日龄母源抗体滴度基本在600～4000，离散度为40%左右，28日龄检测阳性率在40%以内，抗体值处于临界值。56天抗体值在1000～4000，离散度在60%以内，抗体阳性率接近100%。84天阳性率在4000～5000，阳性率为100%，离散度在40%左右。有人认为，抗体滴度超过15000，鸡群可能存在感染，因此要注意防控，尤其在雏鸡阶段。

IBV检测由于疫苗种类较多，如果单纯的疫苗免疫产生的抗体，离散度会很大，介于60%以上也属于正常状态，过低的离散度反而是病毒耐过后表现。同时指出父母代雏鸡抗体滴度不能低于2000，商品代不能低于1500。

8 IBD抗体检测

目前我们检测到的父母代0日龄母源抗体滴度基本在4000～5000，阳性率接近100%，离散度在40%以内。28日龄阳性率为40%～60%，处于母源抗体衰减阶段。IBD对雏鸡早期影响较大，目前抗体检测整体良好。就IBV、IBD等免疫项目的研究，IDEXX建议进行基准线确立，因每个场区环境压力不同，因此我们的数据不是绝对值。

AE现在有流行趋势，大日龄鸡无明显病理变化，但是降蛋会很严重，雏鸡感染会有一定的临床表现。

综上所述，种鸡场ELISA评估涉及到很到方面，如疫苗种类、免疫途径、鸡群临床表现等，因此数据分析设计的面很广，如果能做到全面分析，对鸡群的潜在风险就可以起到预警作用。