猪人工授精中的几个重要环节

郑玉红 黑龙江省林口县朱家镇畜牧站 157699

1 精液品质检查

（1）采精量。采集精液后称重，按每克1mL计，避免以量筒等测量精液的体积。

（2）颜色。正常的精液是乳白色或浅灰色，精子密度越高，色泽愈浓，透明度愈低。带有绿色、黄色、浅红色、红褐色等异常颜色的精液应予废弃。

（3）气味。猪精液略带腥味，如有异常气味，应废弃。

（4）pH值（酸碱度）。用pH计或pH试纸测量，正常范围为 7.0～7.8。

（5）精子活力检查。精子活力是指呈直线运动的精子所占百分率，在显微镜下观察，一般用0.1～1.0的十级评分法估计，鲜精活力要求不低于0.7。检查活力时要求载玻片和盖玻片都应在37℃下预热。

（6）精子密度。指每毫升精液中所含的精子数，是确定稀释倍数的重要标准。要求用血细胞计数板计数或精液密度仪测定。血细胞计数方法：以微量加样器取具有代表性的原精液200ul，用3%NaCl稀释10倍；在血细胞计数板上放一盖玻片，取1滴稀释后的精液置于计数板的槽中，靠虹吸将精液吸入计数室内；在高倍镜下计数5个中方格内的精子总数，将该数乘以50万，即得到原精液每毫升的精子数（即精液密度）。

（7）精子畸形率。畸形率是指异常精子的百分率，一般要求畸形率不超过18%。其测定可用普通显微镜，但需进行伊红或姬姆萨染色，用相差显微镜可直接观察活精子的畸形率。公猪利用过频或高温环境会产生精子尾部带有原生质滴的畸形精子。畸形精子种类很多。要求对每头公猪每2周检查一次精子畸形率。

2 精液的稀释、分装和储存

（1）稀释液。稀释液按稀释液配方配制（D-葡萄糖37.15，柠檬酸三钠6.00，EDTA钠盐1.25，碳酸氯钠1.25，氯化钾 0.75，青霉钠 0.60，硫酸链霉素 1.00），用称量纸、电子天平准确称量药品；按1000mL和2000mL剂量称量稀释粉，置于密封袋中；在大烧杯或塑料杯中套入一到两层一次性食品袋，然后将稀释粉加入，再将烧杯（或塑料杯）放在电子秤上，除皮重；通过与蒸馏水容器连接的软管将蒸馏水导入杯中（最初放出的几毫升水用其它杯接取废弃），直到将水加至规定的重量（如1000g即约1000mL）；将杯子放入水浴中加热，加热后轻轻摇动，使其彻底溶解。某些稀释粉遇水后结块，溶解较慢，需将加热时间延长一些。稀释粉全部溶解后，在水浴中继续加热至所需的温度。用0.1N稀盐酸或0.1N氢氧化钠调整稀释液的pH值达7.2（6.8～7.4）左右，稀释液配好后应及时贴上标签、标明品名、配制日期和时间、经手人等。将稀释液置于冰箱内4℃下保存，时间不超过24小时。

（2）原精液稀释后体积计算。原精液总有效精子数=原精液体积（或重量 g）×精子密度（单位：个/mL）×活率。原精液稀释后可分装的份数=原精总有效精子数/每份精液中的有效精子数。原精液稀释后的体积（或重量）=原精液稀释后可分装的份数 （取整数）×每份精液的体积（或重量）。每份精液中有效精子数推荐为30亿。

（3）精液稀释。精液采集后应尽快稀释，原精储存不超过30分钟。未经品质检查或检查不合格（活力在0.7以下）的精液不能稀释。稀释液与精液要求等温稀释，两者温差不超过1℃，即稀释液应加热至33～37℃，以精液温度为标准来调节稀释液的温度，绝不能反过来操作。稀释时用一个塑料杯（1000～1500mL）放在电子秤上，除皮后将装精液的采精袋从保温杯中取出，放入大塑料杯中，并将袋口翻在杯外。如果集精容器为一次性纸杯，则需将纸杯中的精液倒入装有食品袋的塑料杯中并放在电子秤上。也可在此时称量并记录精液重量。然后向杯中徐徐加入与精液等温的稀释液，直到达到所计算的最终重量。

（4）精液分装。一次性输精瓶的分装。将塑料杯中稀释后的精液分别加入不同的输精瓶中，使精液面达到输精瓶上相应的刻度（如100mL），然后拧上输精瓶盖。一次性输精袋分装。将输精袋的两个悬挂孔挂在专门用于分装精液的支架上，在输精袋中插上一次性塑料漏斗，放在电子秤上，然后除皮。将塑料杯中稀释后的精液通过漏斗徐徐加入输精袋中，直到达到规定的重量（如100g），取下漏斗和输精袋，挂上一个新的输精袋，再将漏斗插入，分装另一袋精液。分装后的输精袋用塑料热封口机封口。在输精瓶或袋上标明公猪品种、耳号、生产日期、保存有效期、稀释液名称和生产单位等。

（5）精液储存。将分装后的输精容器放入泡沫塑料盒中，在室温下缓慢降温30分钟后，再将输精容器放入17℃恒温箱内的搁架上保存。保存过程中不要频繁打开冰箱，并且每隔12小时轻轻翻转一次，防止精子沉淀而引起死亡。短效稀释液可保存3天，中效稀释液可保存4～6天，长效稀释液可保存7～9天，无论用何种稀释液保存精液，都应尽快用完。